為探究細(xì)胞因子對(duì)鹿茸再生的影響,提取鹿茸頂端組織總RNA(Trizol法),反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA模板,克隆TGF-β1成熟肽基因。利用生物信息學(xué)軟件,對(duì)其基因序列及蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析。結(jié)果表明:成功獲得梅花鹿TGF-β1成熟肽基因,序列長339 bp,共編碼112個(gè)氨基酸,蛋白性質(zhì)穩(wěn)定,理論分子質(zhì)量約為12.8 kD。同源性分析結(jié)果顯示,TGF-β1在進(jìn)化過程中具有高度保守性,梅花鹿與牛、羊、豬、人、鼠的核苷酸序列同源性均>90%;除鼠外,梅花鹿與其他物種氨基酸序列并未發(fā)生變化。免疫組化結(jié)果顯示,TGF-β1在鹿茸頂端不同組織中差異表達(dá),軟骨層中表達(dá)水平最高。由此推測,TGF-β1在鹿茸再生過程中可能發(fā)揮重要作用。

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 供試材料
    1.2 試劑與儀器
    1.3 鹿茸頂端組織總RNA提取及cDNA合成
    1.4 梅花鹿成熟型 TGF-β1 基因的克隆
    1.5 梅花鹿成熟型 TGF-β1 的序列分析
    1.6 免疫組化法檢測TGF-β1的相對(duì)表達(dá)水平
2 結(jié)果與分析
    2.1 鹿茸頂端組織總RNA的提取
    2.2 成熟型TGF-β1基因的PCR擴(kuò)增
    2.3 重組質(zhì)粒pMD-19T-TGF-β1的PCR鑒定及雙酶切反應(yīng)鑒定
    2.4 核苷酸序列及氨基酸序列的同源性比較分析
    2.5 成熟型TGF-β1基因結(jié)構(gòu)的生物信息學(xué)分析
        2.5.1 成熟型TGF-β1基因的理化性質(zhì)分析
        2.5.2 成熟型TGF-β1蛋白的翻譯后修飾分析
        2.5.3 成熟型TGF-β1
    2.6 TGF-β1在鹿茸頂端不同組織的相對(duì)表達(dá)水平分析
3 討 論



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