為了獲得豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)nsp4的抗體,根據(jù)HP-PRRSV TA-12株(Gen Bank Accession No.HQ416720)的nsp4基因序列,設(shè)計(jì)并合成一對(duì)引物。用RT-PCR擴(kuò)增后克隆到原核表達(dá)載體p ET-28a(+)中,構(gòu)建重組質(zhì)粒p ET28a-nsp4,轉(zhuǎn)化至Trasseta(DE3),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)重組蛋白獲得了高效可溶性表達(dá),大小約為26 k Da。經(jīng)鎳離子親和柱(Ni+-NTA)純化獲得了高純度重組蛋白,將純化的nsp4蛋白免疫新西蘭大白兔制備了多克隆抗體。ELISA檢測(cè)抗體效價(jià)可達(dá)106,Western blotting和IFA檢測(cè)結(jié)果表明所制備的多克隆抗體具有良好的免疫反應(yīng)特異性,能夠識(shí)別PRRSV感染宿主細(xì)胞中的nsp4蛋白。本研究成功制備了針對(duì)nsp4的多克隆抗體,為進(jìn)一步研究nsp4的功能及PRRSV致病機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 毒株、菌株與載體
    1.2 主要試劑
    1.3 引物的設(shè)計(jì)與合成
    1.4 病毒RNA提取及RT-PCR
    1.5 重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.6 重組蛋白表達(dá)、純化及SDS-PAGE分析
    1.7 Western blotting鑒定結(jié)果
    1.8 nsp4蛋白多抗血清的制備
    1.9 ELISA效價(jià)的測(cè)定
    1.1 0 多抗血清特異性檢測(cè)
        1.1 0. 1 Western blotting分析
        1.1 0. 2 IFA
2 結(jié)果與分析
    2.1 目的基因的獲取
    2.2 表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
    2.3 nsp4重組蛋白的表達(dá)
    2.4 nsp4的純化
    2.5 重組蛋白nsp4抗血清的ELISA效價(jià)測(cè)定
    2.6 多抗血清特異性檢測(cè)
        2.6.1 Western blotting鑒定結(jié)果
        2.6.2 IFA結(jié)果
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