目的:異形吸蟲是一類隸屬于異形科的小型人獸共患寄生蟲,東南亞地區(qū)感染尤為嚴(yán)重,但對(duì)其研究較少,缺乏相應(yīng)的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。本研究通過形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)相結(jié)合的方法對(duì)廣西南寧犬、貓感染異形吸蟲成蟲及淡水魚所感染囊蚴進(jìn)行調(diào)查,并對(duì)東南亞區(qū)域內(nèi)廣泛流行的橫川后殖吸蟲和扇棘單睪吸蟲建立二重PCR檢測(cè)法。方法:對(duì)來源于廣西南寧47副貓和40副犬的心、肝、肺臟和小腸等內(nèi)臟采用蠕蟲學(xué)完全剖檢法進(jìn)行蟲體的收集,鮮活蟲體采用10%的福爾馬林溶液固定后壓片和染色,鏡下觀察其形態(tài)特征;部分蟲體保存于70%的酒精中,用于分子鑒定。來源于廣西橫縣135尾淡水魚樣采用壓片法活檢后再用人工胃液消化法收集囊蚴,初步分類后直接在光學(xué)顯微鏡下觀察、拍照和測(cè)量。提取成蟲和囊蚴的DNA,采用ITS2通用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增、測(cè)序、人工核對(duì)和序列上傳,并利用MEGA5.2軟件進(jìn)行多重比較,之后按照鄰位相連法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。同時(shí)基于Genbank報(bào)道的序列以ITS1為標(biāo)記序列設(shè)計(jì)扇棘單睪吸蟲和橫川后殖吸蟲的特異性引物,進(jìn)行單一和多重PCR條件的優(yōu)化和方法的檢驗(yàn),建立特異性二重PCR檢測(cè)法。結(jié)果:47副貓內(nèi)臟中共獲得6種吸蟲,各種吸蟲的感染...

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號(hào)說明
第一章 綜述
    1.1 異形吸蟲分布范圍
    1.2 異形吸蟲的流行病學(xué)
        1.2.1 宿主及其危害
        1.2.2 感染流行的季節(jié)
        1.2.3 感染者的性別差異
        1.2.4 文化風(fēng)俗的影響
    1.3 人和動(dòng)物的異形吸蟲病
    1.4 鑒別診斷方法
        1.4.1 形態(tài)學(xué)鑒定
        1.4.2 免疫學(xué)診斷
        1.4.3 分子生物學(xué)方法
    1.5 預(yù)防治療
        1.5.1 切斷傳播途徑
        1.5.2 健全法規(guī)防治
        1.5.3 加強(qiáng)輿論和觀念的引導(dǎo)
        1.5.4 強(qiáng)化地區(qū)間國家間疫情監(jiān)測(cè)
    1.6 研究欠缺和展望
        1.6.1 異形吸蟲的感染、流行和分布情況資料尚有缺乏
        1.6.2 異形吸蟲致病力方面仍需深化認(rèn)識(shí)
        1.6.3 科學(xué)研究、人文社科和輿論傳媒的阻擊作用
        1.6.4 蟲種的抗藥性問題
        1.6.5 異形吸蟲全新防控理念和手段的研究
第二章 廣西犬、貓異形吸蟲感染情況調(diào)查及蟲體形態(tài)學(xué)觀察
    2.1 材料與試劑
        2.1.1 試驗(yàn)器材及材料
        2.1.2 試劑及其配制
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 樣品的采集
        2.2.2 樣品剖檢檢查和吸蟲的收集
    2.3 試驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 貓內(nèi)臟中吸蟲感染情況
        2.3.2 犬內(nèi)臟中吸蟲感染情況
        2.3.3 主要犬、貓腸道吸蟲的分類鑒定
    2.4 討論
第三章 淡水魚中吸蟲囊蚴初步調(diào)查及分子生物學(xué)鑒定
    3.1 材料與試劑
        3.1.1 試驗(yàn)材料
        3.1.2 試驗(yàn)器材及試劑
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 囊蚴的收集與觀察方法
        3.2.2 樣品的分子生物學(xué)試驗(yàn)
    3.3 試驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 囊蚴的形態(tài)學(xué)觀察與分子鑒定結(jié)果
        3.3.2 魚中囊蚴的調(diào)查
    3.4 討論
第四章 吸蟲分子生物學(xué)的研究
    4.1 材料與試劑
        4.1.1 試驗(yàn)樣本
        4.1.2 主要試劑及其配制
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 蟲體DNA的抽提
        4.2.2 核糖體ITS2 DNA的PCR擴(kuò)增
    4.3 試驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 吸蟲ITS2序列的PCR擴(kuò)增結(jié)果與測(cè)序
        4.3.2 測(cè)序結(jié)果的初步分析與比對(duì)
        4.3.3 棘隙屬遺傳距離和進(jìn)化發(fā)育
        4.3.4 種系發(fā)育分析
    4.4 討論
第五章 橫川后殖吸蟲、扇棘單睪吸蟲二重PCR檢測(cè)方法的建立
    5.1 材料與試劑
        5.1.1 樣品材料
        5.1.2 試劑
        5.1.3 儀器設(shè)備
    5.2 方法
        5.2.1 蟲體DNA提取
        5.2.2 PCR引物的設(shè)計(jì)
        5.2.3 PCR體系和退火溫度的優(yōu)化
        5.2.4 PCR引物的特異性引物和靈敏性檢測(cè)
        5.2.5 檢測(cè)方法的驗(yàn)證
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 PCR的條件的優(yōu)化結(jié)果
        5.3.2 PCR引物的特異性
        5.3.3 PCR檢測(cè)的敏感性
        5.3.4 檢測(cè)方法的驗(yàn)證與結(jié)果
    5.4 討論
第六章 全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況
申明



本文編號(hào)：3801159