為研究巴馬小型豬精原干細(xì)胞(SSCs)的體外分化體系,本研究對巴馬小型豬SSCs進(jìn)行了分離、純化和鑒定,并初步探索了其在體外誘導(dǎo)單倍體細(xì)胞和類胚胎干細(xì)胞的方法。. (1)對3～4周齡的巴馬小型豬SSCs的分離純化方法進(jìn)行了摸索。結(jié)果發(fā)現(xiàn),采用膠原酶、透明質(zhì)酸酶和胰蛋白酶三步酶解法消化豬的曲精細(xì)管可以得到大量的睪丸細(xì)胞,培養(yǎng)60h后,通過鼠尾膠原Ⅳ和laminin進(jìn)行差異貼壁法可純化得到大量A型精原干細(xì)胞。用終濃度為15μg.ml-1的絲裂霉素C避光處理STO細(xì)胞2h, STO細(xì)胞的生長完全被抑制,死細(xì)胞較少,適合用作飼養(yǎng)層。 (2)對巴馬小型豬SSCs體外培養(yǎng)特征及精原干細(xì)胞特性進(jìn)行了研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn),將巴馬小型豬SSCs接種在STO飼養(yǎng)層上1d之后,SSCs的生長狀態(tài)良好,呈圓形或橢圓形,在培養(yǎng)了3～5d之后,部分SSCs開始形成小集落和結(jié)構(gòu)緊密的克隆。克隆表達(dá)CDH1和UCHL1表面分子標(biāo)記蛋白,同時也表達(dá)豬生殖細(xì)胞特有的凝集素蛋白DBA。 (3)從細(xì)胞水平和組織塊水平對巴馬小型豬SSCs的體外誘導(dǎo)分化進(jìn)行初步研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn),SSCs在支持體系為睪丸體細(xì)胞,培養(yǎng)條件為32℃、5%CO...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞（中英文對照表）
第一部分 文獻(xiàn)綜述——精原干細(xì)胞的研究進(jìn)展
    前言
    1 SSCs的起源和精子發(fā)生
        1.1 SSCs的起源
        1.2 精子發(fā)生
    2 SSCs的生物學(xué)特性
        2.1 SSCs的形態(tài)學(xué)特征
        2.2 SSCs的發(fā)育微環(huán)境
        2.3 SSCs的分子標(biāo)記
        2.4 SSCs的自我更新和分化
    3 SSCs的分離、培養(yǎng)和鑒定
        3.1 SSCs的分離和純化
        3.2 SSCs的原代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)及細(xì)胞系的建立
        3.3 SSCs體外培養(yǎng)的影響因素
        3.4 SSCs的鑒定
    4 SSCs體外誘導(dǎo)精子的研究進(jìn)展
        4.1 SSCs誘導(dǎo)精子的意義
        4.2 SSCs誘導(dǎo)精子的方法
        4.3 SSCs誘導(dǎo)精子研究成果
        4.4 SSCs誘導(dǎo)精子存在的問題
    5 SSCs向類胚胎干細(xì)胞轉(zhuǎn)換的研究
    6 SSCs的應(yīng)用前景
        6.1. SSCs在研究精子發(fā)生機(jī)制方面的應(yīng)用
        6.2 SSCs在生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動物和珍貴動物保種上的應(yīng)用
        6.3 SSCs在男性不育方面的應(yīng)用
        6.4 SSCs在再生醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用
    7 本實(shí)驗(yàn)研究目的及意義
第二部分 實(shí)驗(yàn)部分
    前言
    第一章 巴馬小型豬SSCs體外分離、培養(yǎng)及鑒定
        1 材料與方法
            1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3 分析與討論
        4 結(jié)論
    第二章 巴馬小型豬SSCs體外誘導(dǎo)分化精子細(xì)胞的初步研究
        前言
        1 巴馬小型豬SSCs的誘導(dǎo)分化
            1.1 材料與方法
                1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
                1.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2 巴馬小型豬睪丸組織塊的誘導(dǎo)分化
            2.1 材料與方法
                2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
                2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3 分析與討論
        4 結(jié)論
    第三章 巴馬小型豬睪丸類胚胎干細(xì)胞的誘導(dǎo)及鑒定
        前言
        1 材料和方法
            1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3 討論與分析
        4 結(jié)論
總結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文情況



本文編號：3796244