為研究巴馬小型豬精原干細胞(SSCs)的體外分化體系,本研究對巴馬小型豬SSCs進行了分離、純化和鑒定,并初步探索了其在體外誘導單倍體細胞和類胚胎干細胞的方法。. (1)對3～4周齡的巴馬小型豬SSCs的分離純化方法進行了摸索。結果發(fā)現(xiàn),采用膠原酶、透明質酸酶和胰蛋白酶三步酶解法消化豬的曲精細管可以得到大量的睪丸細胞,培養(yǎng)60h后,通過鼠尾膠原Ⅳ和laminin進行差異貼壁法可純化得到大量A型精原干細胞。用終濃度為15μg.ml-1的絲裂霉素C避光處理STO細胞2h, STO細胞的生長完全被抑制,死細胞較少,適合用作飼養(yǎng)層。 (2)對巴馬小型豬SSCs體外培養(yǎng)特征及精原干細胞特性進行了研究。結果發(fā)現(xiàn),將巴馬小型豬SSCs接種在STO飼養(yǎng)層上1d之后,SSCs的生長狀態(tài)良好,呈圓形或橢圓形,在培養(yǎng)了3～5d之后,部分SSCs開始形成小集落和結構緊密的克隆�？寺”磉_CDH1和UCHL1表面分子標記蛋白,同時也表達豬生殖細胞特有的凝集素蛋白DBA。 (3)從細胞水平和組織塊水平對巴馬小型豬SSCs的體外誘導分化進行初步研究。結果發(fā)現(xiàn),SSCs在支持體系為睪丸體細胞,培養(yǎng)條件為32℃、5%CO...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞（中英文對照表）
第一部分 文獻綜述——精原干細胞的研究進展
    前言
    1 SSCs的起源和精子發(fā)生
        1.1 SSCs的起源
        1.2 精子發(fā)生
    2 SSCs的生物學特性
        2.1 SSCs的形態(tài)學特征
        2.2 SSCs的發(fā)育微環(huán)境
        2.3 SSCs的分子標記
        2.4 SSCs的自我更新和分化
    3 SSCs的分離、培養(yǎng)和鑒定
        3.1 SSCs的分離和純化
        3.2 SSCs的原代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)及細胞系的建立
        3.3 SSCs體外培養(yǎng)的影響因素
        3.4 SSCs的鑒定
    4 SSCs體外誘導精子的研究進展
        4.1 SSCs誘導精子的意義
        4.2 SSCs誘導精子的方法
        4.3 SSCs誘導精子研究成果
        4.4 SSCs誘導精子存在的問題
    5 SSCs向類胚胎干細胞轉換的研究
    6 SSCs的應用前景
        6.1. SSCs在研究精子發(fā)生機制方面的應用
        6.2 SSCs在生產轉基因動物和珍貴動物保種上的應用
        6.3 SSCs在男性不育方面的應用
        6.4 SSCs在再生醫(yī)學方面的應用
    7 本實驗研究目的及意義
第二部分 實驗部分
    前言
    第一章 巴馬小型豬SSCs體外分離、培養(yǎng)及鑒定
        1 材料與方法
            1.1 實驗材料
            1.2 實驗方法
        2 實驗結果
        3 分析與討論
        4 結論
    第二章 巴馬小型豬SSCs體外誘導分化精子細胞的初步研究
        前言
        1 巴馬小型豬SSCs的誘導分化
            1.1 材料與方法
                1.1.1 實驗材料
                1.1.2 實驗方法
            1.2 實驗結果
        2 巴馬小型豬睪丸組織塊的誘導分化
            2.1 材料與方法
                2.1.1 實驗材料
                2.1.2 實驗方法
            2.2 實驗結果
        3 分析與討論
        4 結論
    第三章 巴馬小型豬睪丸類胚胎干細胞的誘導及鑒定
        前言
        1 材料和方法
            1.1 實驗材料
            1.2 實驗方法
        2 實驗結果
        3 討論與分析
        4 結論
總結論
參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表論文情況



本文編號：3796244