奶牛乳腺纖維化是一種以細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix,ECM)過度沉積和肌成纖維細(xì)胞過度增殖為特征的疾病。金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是導(dǎo)致奶牛慢性乳腺炎的主要病原菌之一,其持續(xù)感染引起乳腺結(jié)構(gòu)損傷,進(jìn)而發(fā)展為纖維化,甚至乳腺硬化。本課題組前期的研究均未涉及到調(diào)控ECM降解代謝的內(nèi)容,也未見國內(nèi)外的相關(guān)研究報道。因此,本文通過體內(nèi)和體外研究S.aureus誘導(dǎo)乳腺纖維化過程中MMPs/TIMPs與uPA系統(tǒng)的表達(dá)以及其相關(guān)通路,以探討S.aureus誘導(dǎo)乳腺纖維化的分子機制。本試驗采用0、105、106、108 CFU/mL熱滅活的S.aureus菌液作用于體外培養(yǎng)的BMFBs和BMECs,于6 h、12 h、24 h、48 h提取細(xì)胞的總RNA和總蛋白,通過qPCR、Western blot 方法檢測 MMP-1、-2、-3、-9、-13、TIMP-1、-2、uPA、uPAR、PAI-1和COL I mRNA和蛋白的表達(dá)水平,并通過膠原酶譜試驗檢測細(xì)胞液上清液中MMP-2和-9的活性;篩選106 CFU/mL熱滅...

【文章頁數(shù)】：179 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 引言
    1.1 組織器官纖維化的機制
    1.2 S.aureus與奶牛乳腺纖維化
    1.3 MMPs/TIMPs的簡介
        1.3.1 MMPs的結(jié)構(gòu)和分類
        1.3.2 MMPs的調(diào)控
        1.3.3 MMPs在纖維化中的生物學(xué)作用
    1.4 uPA系統(tǒng)簡介
        1.4.1 uPA的結(jié)構(gòu)特點
        1.4.2 uPAR的結(jié)構(gòu)特點
        1.4.3 PAI的結(jié)構(gòu)特點
        1.4.4 uPA系統(tǒng)的生物學(xué)功能
    1.5 轉(zhuǎn)錄組學(xué)在乳腺纖維化研究中的應(yīng)用
    1.6 MAPK信號通路
        1.6.1 MAPK信號通路概述
        1.6.2 MAPKs的組成
    1.7 本研究的目的及意義
        1.7.1 本研究的目的
        1.7.2 本研究的意義
2 研究一 S.aureus對BMFBs MMPs/TIMPs和uPA系統(tǒng)表達(dá)及其信號通路的影響
    2.1 S.aureus對BMFBs MMPs/TIMPs和uPA系統(tǒng)表達(dá)的影響
        2.1.1 試驗材料與儀器
        2.1.2 試驗方法
        2.1.3 試驗結(jié)果
        2.1.4 分析與小結(jié)
    2.2 熱滅活S.aureus作用BMFBs的轉(zhuǎn)錄組測序
        2.2.1 試驗材料與儀器
        2.2.2 試驗方法
        2.2.3 試驗結(jié)果
        2.2.4 分析與小結(jié)
    2.3 MAPK通路在S.aureus誘導(dǎo)BMFBs MMP-2、TIMP-1/2和uPA/PAI-1的表達(dá)的影響
        2.3.1 試驗材料與儀器
        2.3.2 試驗方法
        2.3.3 試驗結(jié)果
        2.3.4 分析與小結(jié)
    2.4 討論
        2.4.1 S.aureus對BMFBs MMPs/TIMPs表達(dá)的影響
        2.4.2 S.aureus對BMFBs uPA系統(tǒng)表達(dá)的影響
        2.4.3 轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析S.aureus誘導(dǎo)BMFBs纖維化相關(guān)基因的表達(dá)
        2.4.4 MAPKs信號通路S. aureus誘導(dǎo)MMPs/TIMPs和uPA系統(tǒng)的作用
3 研究二 S. aureus誘導(dǎo)BMECs MMPs/TIMPs和uPA系統(tǒng)表達(dá)的影響
    3.1 材料
        3.1.1 試驗材料
        3.1.2 主要試劑和試劑盒
        3.1.3 主要儀器與設(shè)備
    3.2 試驗方法
        3.2.1 熱滅活S.aureus菌液的制備
        3.2.2 BMECs的復(fù)蘇與培養(yǎng)
        3.2.3 不同濃度熱滅活的菌液處理細(xì)胞
        3.2.4 熒光定量PCR檢測MMPs/TIMPs、uPA系統(tǒng)和COL Ⅰ mRNA表達(dá)情況
        3.2.5 Western blot檢測MMPs/TIMPs,uPA系統(tǒng)和COL Ⅰ蛋白表達(dá)情況
        3.2.6 數(shù)據(jù)分析與處理
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 qPCR擴增產(chǎn)物基因特異性檢測結(jié)果
        3.3.2 S.aureus對BMECs MMPs表達(dá)的影響
        3.3.3 S.aureus對BMECs TIMPs表達(dá)的影響
        3.3.4 S.aureus對BMECs uPA系統(tǒng)表達(dá)的影響
        3.3.5 S.aureus對BMECs COL Ⅰ mRNA和蛋白表達(dá)的影響
        3.3.6 S.aureus對BMECs MMP-2/MMP-9活性的影響
        3.3.7 BMECs中MMPs/TIMPs、uPA系統(tǒng)與COL Ⅰ之間相關(guān)趨勢分析
    3.4 討論
        3.4.1 S.aureus對BMECs MMPs/TIMPs表達(dá)的影響
        3.4.2 S.aureus對BMECs uPA系統(tǒng)表達(dá)的影響
    3.5 分析與小結(jié)
4 研究三 S.aureus誘導(dǎo)小鼠乳腺纖維化MMPs/TIMPs和uPA系統(tǒng)表達(dá)的影響
    4.1 試驗材料與儀器
        4.1.1 S.aureus菌株
        4.1.2 實驗動物
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 主要儀器
    4.2 試驗方法
        4.2.1 菌液的制備
        4.2.2 感染小鼠試驗
        4.2.3 Masson三色染色
        4.2.4 S.aureus感染小鼠乳腺組織中MMPs/TIMPs和uPA/PAI-1的表達(dá)及定位
        4.2.5 熒光定量PCR檢測小鼠乳腺組織中MMPs/TIMPs,uPA系統(tǒng)mRNA表達(dá)情況
        4.2.6 試驗結(jié)果處理
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 小鼠乳腺組織Masson三色染色結(jié)果
        4.3.2 S.aureus對小鼠乳腺組織中MMPs/TIMP-1和uPA/PAI-1 mRNA的表達(dá)結(jié)果
        4.3.3 S.aureus誘導(dǎo)小鼠乳腺MMPs/TIMP-1和uPA/PAI-1的表達(dá)分布結(jié)果
    4.4 討論
        4.4.1 S.aureus對小鼠乳腺組織中MMP-1、-3、-13/TIMP-1表達(dá)的影響
        4.4.2 S.aureus對小鼠乳腺組織中uPA/PAI-1表達(dá)的影響
    4.5 分析與小結(jié)
5 全文討論
    5.1 S.aureus對MMPs/TIMPs及uPA系統(tǒng)表達(dá)的影響
    5.2 S.aureus對uPA系統(tǒng)表達(dá)的影響
    5.3 MAPKs信號通路在段aureus促進(jìn)BMFBs MMP-2/TIMP-1、-2及uPA/PAI-1表達(dá)的作用
6 全文結(jié)論
7 創(chuàng)新點
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡介



本文編號：3796209