達(dá)氟沙星(Danofloxacin,DAN)是20世紀(jì)80年代開(kāi)發(fā)的一種氟喹諾酮藥物,屬于第三代喹諾酮類(lèi)抗菌藥。其抗菌譜廣,可以有效抑制革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性菌、衣原體、支原體、螺旋體及某些厭氧菌。DAN的作用機(jī)制是通過(guò)抑制細(xì)菌DNA螺旋酶和拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅳ的活性,阻礙細(xì)菌DNA的合成而致其死亡。DAN因其抑菌的廣譜性和有效性,常作為飼料添加劑、疫病預(yù)防與治療藥物得到廣泛應(yīng)用。然而,DAN的濫用會(huì)帶來(lái)一系列的副作用,如導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性增加和藥物殘留等,嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康和動(dòng)物源食品安全。目前各國(guó)政府都對(duì)其制定了限量標(biāo)準(zhǔn),以保證動(dòng)物性食品安全和人類(lèi)健康。本研究自主設(shè)計(jì)方案合成了 DAN的免疫原以免疫小鼠,并將陽(yáng)性小鼠的脾臟細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0融合。融合后的雜交瘤細(xì)胞經(jīng)“篩選-克隆-篩選-克隆-篩選-克隆-篩選”過(guò)程,共獲得了 6株細(xì)胞株。將該細(xì)胞株擴(kuò)充培養(yǎng)后進(jìn)行保種并制備腹水,腹水經(jīng)純化后共獲得6種高質(zhì)量的抗DAN的單克隆抗體。這6種抗DAN單克隆抗體分別為3A10-A1-C6-H1、3A10-A1-C6-G9、3A10-A1-C6-H9、3A10-A1-F1-D12、3A10-B4-D...

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語(yǔ)索引
第1章 引言
    1.1 概述
    1.2 達(dá)氟沙星的理化性質(zhì)
    1.3 達(dá)氟沙星的作用機(jī)制
    1.4 達(dá)氟沙星的限量標(biāo)準(zhǔn)
    1.5 達(dá)氟沙星的應(yīng)用現(xiàn)狀
    1.6 達(dá)氟沙星檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展
        1.6.1 高效液相色譜法
        1.6.2 液相-質(zhì)譜聯(lián)用法
        1.6.3 毛細(xì)管電泳法
        1.6.4 熒光分光光度法
        1.6.5 旋光法
        1.6.6 免疫層析檢測(cè)技術(shù)
        1.6.7 酶聯(lián)免疫吸附法
    1.7 研究?jī)?nèi)容及意義
第2章 抗達(dá)氟沙星單克隆抗體的制備及評(píng)價(jià)
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)材料試劑
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 達(dá)氟沙星免疫原與包被原的制備
        2.3.2 小鼠免疫及血清評(píng)價(jià)方案
        2.3.3 細(xì)胞融合
        2.3.4 腹水制備
        2.3.5 單克隆抗體純化
        2.3.6 抗體評(píng)價(jià)
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 免疫原表征
        2.4.2 小鼠免疫應(yīng)答
        2.4.3 陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株的篩選
        2.4.4 抗體濃度測(cè)定
        2.4.5 抗體評(píng)價(jià)工作點(diǎn)的優(yōu)化
        2.4.6 抗體標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        2.4.7 抗體特異性的評(píng)價(jià)
    2.5 小結(jié)及展望
第3章 基于三角銀納米片的PELISA靈敏檢測(cè)氟喹諾酮類(lèi)藥物*
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料試劑
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 三角銀納米片(AgNPRs)的合成
        3.3.2 生物素化單克隆抗體的制備
        3.3.3 生物素化葡萄糖氧化酶的制備
        3.3.4 基于AgNPRs的pELISA
        3.3.5 基于TMB的ELISA
        3.3.6 pELISA的特異性分析
        3.3.7 回收率分析
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 檢測(cè)原理
        3.4.2 GOx催化刻蝕AgNPRs的表征
        3.4.3 Biotin-mAb、Biotin-GOx的表征
        3.4.4 關(guān)鍵參數(shù)的優(yōu)化
        3.4.5 基于AgNPRs刻蝕的pELISA的性能分析
        3.4.6 基于AgNPRs刻蝕的pELISA在牛奶基質(zhì)中的性能分析
    3.5 結(jié)論
第4章 結(jié)論與展望
    4.1 結(jié)論
        4.1.1 抗DAN單克隆抗體的制備及評(píng)價(jià)
        4.1.2 基于AgNPRs的pELISA靈敏檢測(cè)DAN
    4.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄1 儀器設(shè)備
附錄2 實(shí)驗(yàn)試劑
個(gè)人簡(jiǎn)介
攻讀學(xué)位期間的研究成果



本文編號(hào)：3796374