腸道是應(yīng)激反應(yīng)的中心器官。當(dāng)機體受內(nèi)外環(huán)境不利因素刺激時,極易導(dǎo)致腸道結(jié)構(gòu)及功能的損傷,誘發(fā)全身腸源性應(yīng)激綜合征甚至危及生命,因此健康有序的腸道結(jié)構(gòu)和功能的穩(wěn)定對維持動物生長、發(fā)育、繁殖以及免疫功能具有重要意義。線粒體作為細(xì)胞呼吸和能量產(chǎn)生的重要場所,其內(nèi)膜呼吸鏈的氧化磷酸化是活性氧自由基(ROS)產(chǎn)生的主要來源,線粒體介導(dǎo)的選擇性自噬在降解受損或多余線粒體、維護線粒體數(shù)量和質(zhì)量的平衡以及細(xì)胞氧化損傷調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)沉默信息調(diào)節(jié)因子1(SIRT1)與線粒體自噬密切相關(guān),并參與了細(xì)胞氧化損傷過程,但SIRT1調(diào)節(jié)線粒體自噬在腸道氧化損傷中的作用有待闡明。本研究主要探討SIRT1與豬腸上皮細(xì)胞線粒體自噬的關(guān)系,分析SIRT1對豬腸上皮細(xì)胞氧化損傷的影響,為闡明腸道氧化損傷的分子機理及抗氧化產(chǎn)品的研發(fā)提供思路與科學(xué)依據(jù)。主要研究內(nèi)容:1.氧化應(yīng)激對豬腸上皮細(xì)胞氧化損傷、線粒體自噬及SIRT1/PGC-1α通路的影響用濃度為300μM H2O2處理IPEC-1細(xì)胞12 h,收取細(xì)胞樣品。分別用DCFH-DA與JC-1探針檢測細(xì)胞線粒體內(nèi)活性氧自由基水平及膜電位變化情況;q PCR和...

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要縮略語表(Abbreviations)
1 文獻綜述
    1.1 研究問題的由來
    1.2 腸上皮細(xì)胞黏膜屏障及緊密連接簡介
    1.3 氧化應(yīng)激對腸道結(jié)構(gòu)及功能的影響
        1.3.1 氧化應(yīng)激簡介及其危害
        1.3.2 氧化應(yīng)激對腸道結(jié)構(gòu)及功能損傷的影響
    1.4 氧化應(yīng)激與線粒體自噬概述
        1.4.1 細(xì)胞自噬與線粒體自噬
        1.4.2 氧化應(yīng)激對線粒體自噬的影響作用
    1.5 SIRT1在腸道氧化損傷中的作用
        1.5.1 SIRT1與氧化應(yīng)激
        1.5.2 SIRT1在腸道損傷中的作用
        1.5.3 SIRT1與線粒體自噬
    1.6 研究目的和意義
2 實驗材料
    2.1 引物及核苷酸序列
    2.2 細(xì)胞
    2.3 主要試劑和藥品
    2.4 主要培養(yǎng)基和緩沖液
    2.5 主要儀器
3 實驗方法
    3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
    3.2 細(xì)胞總RNA提取和反轉(zhuǎn)錄
        3.2.1 提取細(xì)胞總RNA
        3.2.2 反轉(zhuǎn)錄
    3.3 熒光定量PCR(qPCR)
    3.4 細(xì)胞總蛋白提取
    3.5 BCA法測定蛋白濃度
    3.6 蛋白免疫印跡(Western Blot)
        3.6.1 SDS-PAGE電泳
        3.6.2 轉(zhuǎn)膜
        3.6.3 雜交
        3.6.4 顯影
    3.7 細(xì)胞活性氧(ROS)水平檢測
    3.8 線粒體膜電位檢測
    3.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
4 結(jié)果與分析
    4.1 氧化應(yīng)激對豬腸上皮細(xì)胞損傷的影響
        4.1.1 氧化應(yīng)激對細(xì)胞ROS產(chǎn)生及線粒體膜電位水平的影響
        4.1.2 氧化應(yīng)激對豬腸上皮細(xì)胞黏膜屏障的影響
    4.2 氧化應(yīng)激對豬腸上皮細(xì)胞線粒體自噬的影響
    4.3 氧化應(yīng)激對豬腸上皮細(xì)胞SIRT1/PGC-1α通路的影響
    4.4 激活劑與抑制劑對豬腸上皮細(xì)胞SIRT1/PGC-1α通路的影響
    4.5 激活SIRT1可增強氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的豬腸上皮細(xì)胞線粒體自噬水平
    4.6 SIRT1對豬腸上皮細(xì)胞氧化損傷的修復(fù)作用
        4.6.1 激活SIRT1對細(xì)胞中ROS及線粒體膜電位的影響
        4.6.2 激活SIRT1對細(xì)胞黏膜屏障的影響
5 討論
    5.1 氧化應(yīng)激對豬腸道損傷的影響
    5.2 氧化應(yīng)激與線粒體自噬的聯(lián)系
    5.3 SIRT1抗氧化應(yīng)激作用與線粒體自噬的聯(lián)系
    5.4 SIRT1對豬腸上皮細(xì)胞氧化損傷的作用
6 結(jié)論
參考文獻
附錄
    攻讀碩士學(xué)位期間已發(fā)表論文
致謝



本文編號：3795533