為獲取雙峰駝免疫球蛋白M(IgM)重鏈恒定區(qū)的表達(dá)產(chǎn)物及抗體,首先在GenBank找出收錄的雙峰駝IgM、IgA、IgE、IgG重鏈恒定區(qū)基因序列,比對IgM與IgA、IgE和IgG的氨基酸序列,選取一段差異較大的蛋白序列片段,轉(zhuǎn)換成相對應(yīng)的基因片段,PCR擴增選取的基因片段,插入pET-28a(+)載體構(gòu)建重組載體,轉(zhuǎn)化進(jìn)大腸埃希菌BL21,并誘導(dǎo)重組蛋白表達(dá),SDS-PAGE鑒定重組蛋白,后利用純化的蛋白免疫家兔,制備抗血清,ELISA和Western blot鑒定獲得的血清。結(jié)果顯示,成功構(gòu)建了載體pET-28a-IgM,誘導(dǎo)表達(dá)的目的蛋白分子質(zhì)量為18.7 ku,與預(yù)期相符。ELISA方法檢測抗血清效價為1∶32 000,Western blot結(jié)果顯示該血清能特異性識別原核表達(dá)蛋白,說明雙峰駝IgM兔抗血清的成功制備。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 細(xì)胞和實驗動物
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 主要儀器
    1.2 方法
        1.2.1 IgM片段的選取與質(zhì)粒構(gòu)建
        1.2.2 重組蛋白的表達(dá)與鑒定
        1.2.3 重組蛋白的純化與復(fù)性
        1.2.4 兔抗雙峰駝IgM抗血清制備
        1.2.5 兔抗雙峰駝IgM抗血清效價測定
        1.2.6 兔抗雙峰駝IgM抗血清的Western blot鑒定
2 結(jié)果
    2.1 雙峰駝IgM基因片段的選取及分析
    2.2 重組載體的構(gòu)建與鑒定
    2.3 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
    2.4 重組蛋白的純化
    2.5 多克隆抗體的效價檢測
    2.6 多克隆抗體的Western blot的鑒定
3 討論



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