研究在利用世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)推薦的TaqMan熒光定量PCR方法基礎(chǔ)上,增加內(nèi)標(biāo)物TaqMan熒光,通過(guò)優(yōu)化反應(yīng)體系及條件,進(jìn)行Real-time PCR擴(kuò)增,建立了一種快速、準(zhǔn)確、特異性好的非洲豬瘟病毒核酸雙重TaqMan探針熒光定量PCR技術(shù),并進(jìn)行敏感性、穩(wěn)定性和特異性評(píng)價(jià)及比較。結(jié)果顯示:熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好,R²值可達(dá)到1,敏感性最低能檢測(cè)到28個(gè)拷貝數(shù)/μL,比常規(guī)PCR方法高40～80倍;通過(guò)5份標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒重復(fù)檢測(cè)3次,每一個(gè)樣品重復(fù)檢測(cè)Ct值一致,穩(wěn)定性良好,變異系數(shù)范圍0.70%～2.51%;同時(shí)每一個(gè)樣品反應(yīng)體系中內(nèi)標(biāo)物(pUC57-actin)Ct值一致,變異系數(shù)范圍0.25%～3.44%,因此雙重驗(yàn)證了該方法的穩(wěn)定性;特異性試驗(yàn)證明與豬瘟病毒(CSFV)、豬圓環(huán)病毒(PCV2)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、豬偽狂犬病毒(PRV)、豬細(xì)小病毒(PPV)基因組無(wú)交叉反應(yīng)。該方法具有提升準(zhǔn)確率和判斷監(jiān)測(cè)體系內(nèi)是否存在干擾物的優(yōu)點(diǎn),可以防止樣品出現(xiàn)假陰性;適合于血清樣品、組織樣品和疫苗樣品的非洲豬瘟病毒核酸檢測(cè)。

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)試劑
    1.2 試驗(yàn)儀器
    1.3 病毒
    1.4 非洲豬瘟病毒陽(yáng)性質(zhì)粒合成和引物合成
    1.5 內(nèi)標(biāo)質(zhì)粒合成和引物合成
    1.6 雙重Taq Man實(shí)時(shí)熒光定量PCR體系的建立與優(yōu)化
    1.7 雙重Taq Man實(shí)時(shí)熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    1.8 雙重Taq Man實(shí)時(shí)熒光定量PCR敏感性試驗(yàn)、特異性試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)
        1.8.1 特異性試驗(yàn)
        1.8.2 敏感性試驗(yàn)
        1.8.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)
2 結(jié)果與分析
    2.1 雙重Taq Man實(shí)時(shí)熒光定量PCR體系的建立與優(yōu)化
    2.2 雙重Taq Man實(shí)時(shí)熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    2.3 雙重Taq Man實(shí)時(shí)熒光定量PCR特異性試驗(yàn)、敏感性試驗(yàn)和穩(wěn)定性試驗(yàn)
        2.3.1 特異性試驗(yàn)
        2.3.2 敏感性試驗(yàn)
        2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)
3 討論
4 結(jié)論



本文編號(hào)：3791443