本論文通過3個試驗,研究了不同鐵源及鐵水平對體外原代培養(yǎng)肉雞雞胚肝細(xì)胞鐵含量、含鐵關(guān)鍵酶活性及其基因表達(dá)以及鐵蛋白基因表達(dá)的影響,從細(xì)胞及分子水平探討了不同鐵源在肉雞肝細(xì)胞中代謝利用的機制。試驗一旨在成功構(gòu)建穩(wěn)定、可靠的肉雞胚肝細(xì)胞原代培養(yǎng)模型,為下一步不同水平鐵和不同形態(tài)鐵的試驗奠定基礎(chǔ)。選用健康的14胚齡愛拔益加(AA)肉雞雞胚為本試驗的細(xì)胞供體,Leibovitz’s L-15培養(yǎng)液為基礎(chǔ)培養(yǎng)液進(jìn)行體外培養(yǎng)。結(jié)果表明:分離的肝細(xì)胞純度較高、分化完全、功能健全,細(xì)胞活力好;細(xì)胞形態(tài)學(xué)、培養(yǎng)液乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase,LDH)活性及MTT細(xì)胞持續(xù)活力結(jié)果基本相一致,即肝細(xì)胞原代培養(yǎng)細(xì)胞活力保持最佳的時間范圍是在細(xì)胞培養(yǎng)的第3至6天。本試驗成功建立了肉雞雞胚肝細(xì)胞原代培養(yǎng)模型,可用于后續(xù)的試驗。試驗二是在試驗一的基礎(chǔ)上,研究探討了不同水平無機鐵在不同孵育時間下對原代培養(yǎng)肉雞雞胚肝細(xì)胞鐵含量、含鐵關(guān)鍵酶活性及其基因表達(dá)以及鐵蛋白基因表達(dá)影響,確定了雞胚肝細(xì)胞培養(yǎng)最適的鐵添加水平和鐵作用時間,為下一步不同形態(tài)鐵源的試驗奠定基礎(chǔ)。本試驗采用5×3兩因子完全隨機設(shè)...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 鐵在動物機體中的貯存和利用
    1.2 鐵的生物學(xué)功能
        1.2.1 參與載體組成、轉(zhuǎn)運和貯存營養(yǎng)素的功能
        1.2.2 抗氧化功能
        1.2.3 參與機體免疫
        1.2.4 參與電子傳遞
    1.3 機體中含鐵關(guān)鍵酶及功能蛋白
    1.4 有機鐵的結(jié)構(gòu)與特性
    1.5 有機鐵的生物學(xué)活性研究進(jìn)展
        1.5.1 研究現(xiàn)狀
        1.5.2 研究方法
            1.5.2.1 自然飼喂法
            1.5.2.2 靜脈注射法
            1.5.2.3 細(xì)胞培養(yǎng)法
        1.5.3 評價指標(biāo)
    1.6 動物肝細(xì)胞分離與其體外原代培養(yǎng)研究進(jìn)展
        1.6.1 肝細(xì)胞分離
        1.6.2 肝細(xì)胞體外培養(yǎng)
        1.6.3 肝細(xì)胞供體的年齡
    1.7 立題依據(jù)與試驗?zāi)康?br>    1.8 試驗內(nèi)容
第二章 原代培養(yǎng)肉雞雞胚肝細(xì)胞模型構(gòu)建(試驗一)
    2.1 試驗?zāi)康?br>    2.2 材料與方法
        2.2.1 試驗設(shè)計與處理
        2.2.2 試驗儀器與材料
        2.2.3 試劑的配制
        2.2.4 雞胚肝細(xì)胞消化分離
        2.2.5 肝細(xì)胞純化
        2.2.6 細(xì)胞計數(shù)及細(xì)胞活力檢測
        2.2.7 肝細(xì)胞原代培養(yǎng)
        2.2.8 形態(tài)學(xué)鑒定
        2.2.9 肝細(xì)胞染色鑒定
        2.2.10 樣品采集與制備
        2.2.11 樣品分析
        2.2.12 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果
        2.3.2 PAS糖原染色結(jié)果
        2.3.3 細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH活性
        2.3.4 MTT細(xì)胞持續(xù)活力測定
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 不同鐵水平及孵育時間對原代培養(yǎng)肉雞雞胚肝細(xì)胞含鐵關(guān)鍵酶活性及其基因表達(dá)的影響(試驗二)
    3.1 試驗?zāi)康?br>    3.2 材料與方法
        3.2.1 試驗設(shè)計與處理
        3.2.2 試驗試劑
        3.2.3 試劑配制
        3.2.4 雞胚肝細(xì)胞鐵孵育液處理
        3.2.5 樣品采集與制備
        3.2.6 樣品分析
        3.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 添加鐵水平和孵育時間對肉雞雞胚肝細(xì)胞鐵含量的影響
        3.3.2 添加鐵水平和孵育時間對肉雞雞胚肝細(xì)胞含鐵關(guān)鍵酶活性的影響
        3.3.3 添加鐵水平和孵育時間對肉雞雞胚肝細(xì)胞中含鐵關(guān)鍵酶及鐵蛋白的mRNA表達(dá)水平的影響
        3.3.4 添加鐵水平和孵育時間對肉雞雞胚肝細(xì)胞含鐵關(guān)鍵酶及鐵蛋白的蛋白表達(dá)水平的影響
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 不同形態(tài)鐵源對原代培養(yǎng)肉雞雞胚肝細(xì)胞含鐵關(guān)鍵酶活性及基因表達(dá)的影響(試驗三)
    4.1 試驗?zāi)康?br>    4.2 材料與方法
        4.2.1 試驗設(shè)計與處理
        4.2.2 試驗試劑
        4.2.3 試劑配制
        4.2.4 原代雞胚肝細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及處理
        4.2.5 樣品采集與制備
        4.2.6 樣品分析
        4.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 添加鐵源和鐵水平對肉雞雞胚肝細(xì)胞鐵含量的影響
        4.3.2 添加鐵源和鐵水平對肉雞雞胚肝細(xì)胞含鐵酶活性的影響
        4.3.3 添加鐵源和鐵水平對肉雞雞胚肝細(xì)胞含鐵酶及鐵蛋白mRNA表達(dá)水平的影響
        4.3.4 添加鐵源和鐵水平對肉雞雞胚肝細(xì)胞含鐵酶及鐵蛋白的蛋白表達(dá)水平的影響
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第五章 全文結(jié)論及有待進(jìn)一步研究的問題
    5.1 主要結(jié)論
    5.2 創(chuàng)新點
    5.3 有待進(jìn)一步研究的問題
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號：3769969