豬帶絳蟲(Ts)是一種重要的人畜共患寄生蟲,硫氧還蛋白過(guò)氧化物酶(TPx)是豬帶絳蟲及其幼蟲重要的功能蛋白。為研究TsTPx蛋白的功能和篩選豬囊蟲高效免疫靶標(biāo),提取豬帶絳蟲成蟲總RNA,經(jīng)RT-PCR擴(kuò)增tstpx基因,測(cè)序分析后構(gòu)建原核表達(dá)載體pET-30a(+)-tstpx,轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá),用鎳離子親和層析純化TsTPx蛋白并進(jìn)行生物學(xué)特性分析,包括抗氧化功能和抗原性。結(jié)果如下:SDS-PAGE分析表明,表達(dá)的TsTPx蛋白約25ku,主要以可溶性形式存在于菌體裂解上清中。抗氧化功能分析表明,在金屬催化氧化(MCO)體系中,TsTPx蛋白對(duì)質(zhì)粒DNA超螺旋結(jié)構(gòu)的保護(hù)率與質(zhì)量濃度呈正相關(guān),20μg·mL-1時(shí)可100%保護(hù),電泳圖譜中被氧化的開環(huán)慢遷移帶完全消失;H2O2還原體系中,TsTPx蛋白對(duì)H2O2的還原率與質(zhì)量濃度呈正相關(guān),100μg·mL-1時(shí),在含二硫蘇糖醇(DTT)體系中,還原率達(dá)69.9%,在不含DTT體系中為54.5%�？乖苑治�:Western blotting顯示TsTPx蛋白可被豬帶絳蟲囊尾蚴階段陽(yáng)性血清識(shí)別,具有良好...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)蟲體、菌種、質(zhì)粒及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 引物的設(shè)計(jì)與合成
    1.3 PCR擴(kuò)增
    1.4 TsTPx原核表達(dá)載體的構(gòu)建
    1.5 TsTPx蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及純化
    1.6 TsTPx蛋白的抗氧化功能分析
        1.6.1 TsTPx蛋白的質(zhì)粒超螺旋結(jié)構(gòu)保護(hù)試驗(yàn)
        1.6.2 TsTPx蛋白的H2O2還原試驗(yàn)
    1.7 TsTPx蛋白的抗原性分析
        1.7.1 Western blot分析
        1.7.2 動(dòng)物免疫試驗(yàn)及抗體效價(jià)檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 PCR擴(kuò)增
    2.2 重組表達(dá)載體的構(gòu)建和鑒定
    2.3 TsTPx蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及純化
    2.4 TsTPx的抗氧化功能分析
    2.5 TsTPx蛋白的抗原性分析
3 討論
4 結(jié)論



本文編號(hào)：3769908