禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒是一種可引起感染雞只產(chǎn)生免疫抑制和網(wǎng)狀細胞瘤的RNA病毒,感染REV后的雞只由于疫苗免疫后抗體反應(yīng)受到顯著抑制從而易于感染其它疾病,這給養(yǎng)雞業(yè)可能帶來不可估量的損失。近年來,REV感染率有明顯上升的趨勢,利用亞單位疫苗或DNA疫苗防制該病被認(rèn)為是最具潛力的措施,但提高亞單位疫苗和DNA疫苗免疫保護反應(yīng)也是亟待解決的科學(xué)技術(shù)問題,本課題利用CpG ODN/Poly（I:C）制備成新型核酸緩釋佐劑,分別與REV亞單位疫苗抗原/DNA疫苗抗原聯(lián)合免疫接種雛雞,探討了它們對兩種疫苗免疫保護反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用。本研究首先從REV病毒感染細胞中擴增獲得囊膜蛋白gp90基因,分別構(gòu)建了重組原核表達載體pET-32a-gp90和DNA真核表達載體PVAX1-gp90。構(gòu)建的pET-32a-gp90表達載體轉(zhuǎn)化至Rosseta（DE3）菌體內(nèi),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)獲得高表達的重組蛋白產(chǎn)物,利用SDS-PAGE和REV單抗介導(dǎo)的Western blot進行目的蛋白的鑒定分析,經(jīng)鎳柱純化和蛋白定量后用作接種抗原。構(gòu)建的DNA真核表達載體PVAX1-gp90用脂質(zhì)體Lipo3000瞬時轉(zhuǎn)染至雞胚... 

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
1 引言
    1.1 禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒
        1.1.1 病原學(xué)
        1.1.2 流行病學(xué)
        1.1.3 臨床癥狀及病理變化
        1.1.4 診斷方法
        1.1.5 防控現(xiàn)狀
    1.2 畜禽基因工程疫苗的研究進展
        1.2.1 基因工程亞單位疫苗
        1.2.2 DNA疫苗
    1.3 疫苗免疫佐劑概述
        1.3.1 CpG ODN佐劑
        1.3.2 Poly(I: C)佐劑
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 病毒與細胞
        2.1.2 宿主菌、載體與佐劑
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 實驗動物
        2.1.5 主要儀器
        2.1.6 試驗地點
    2.2 兩種免疫原的制備
        2.2.1 REV亞單位疫苗免疫抗原的制備
        2.2.2 REV DNA疫苗免疫抗原的制備
    2.3 動物免疫接種試驗
        2.3.1 CPG/Poly(I:C)佐劑聯(lián)合REV亞單位疫苗免疫雛雞誘導(dǎo)免疫保護性研究
        2.3.2 CPG/Poly(I:C)佐劑聯(lián)合REV DNA疫苗免疫雛雞誘導(dǎo)免疫保護性研究
3 結(jié)果與分析
    3.1 CpG-ODN/Poly(I:C)對REV亞單位疫苗的免疫增強效果研究
        3.1.1 REV-gp90原核表達載體的構(gòu)建與鑒定
        3.1.2 重組gp90蛋白表達純化及western blot分析
        3.1.3 CpG-ODN/Poly(I:C)佐劑聯(lián)合REV亞單位疫苗免疫雛雞誘導(dǎo)保護性研究
    3.2 CpG/Poly(I:C)對DNA疫苗的免疫增強效果研究
        3.2.1 REV-gp90真核表達載體的構(gòu)建與鑒定
        3.2.2 重組真核表達質(zhì)粒PVAX1-gp90在細胞中的表達鑒定
        3.2.3 CpG/Poly(I:C)佐劑聯(lián)合DNA疫苗免疫雛雞誘導(dǎo)免疫保護性研究
4 討論
5 結(jié)論
6 創(chuàng)新點
參考文獻
致謝
攻讀學(xué)位期間取得學(xué)術(shù)成果（論文和專利）


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]2010-2012年廣西雞三種腫瘤病病毒的流行病學(xué)研究及其在商品馬立克活疫苗中污染的檢測[D]. 曾婷婷.廣西大學(xué) 2012
[2]雞Toll樣受體3的克隆及其參與IBDV感染的初步研究[D]. 甘珊珊.廣西民族大學(xué) 2011



本文編號：3706548