禽白血病病毒（ALV）進(jìn)入細(xì)胞啟動(dòng)感染依賴于其囊膜表面蛋白gp85與細(xì)胞受體的結(jié)合。K亞群ALV（ALV-K）是2012年從我國本地蘆花雞中分離到的一個(gè)ALV新亞群。為了鑒定ALV-K的細(xì)胞受體,本研究利用真核細(xì)胞表達(dá)了A和K亞群ALV gp85蛋白,并利用實(shí)驗(yàn)室前期拯救的重組病毒RCAS-A-GFP和RCAS-K-GFP進(jìn)行病毒受體的交叉干擾試驗(yàn),結(jié)果顯示A亞群ALV（ALV-A）gp85蛋白能夠抑制ALV-K的感染,同樣ALV-Kgp85蛋白也能夠抑制ALV-A的感染,存在受體交叉干擾現(xiàn)象,因而推測(cè)二者可能共用細(xì)胞受體。已有研究表明Tva是ALV-A的細(xì)胞受體,本研究利用Co-IP和Pull-down試驗(yàn)檢測(cè)了ALV-Kgp85與Tva的互作,結(jié)果顯示ALV-Kgp85蛋白能與可溶性的Tva（sTva）相互作用。進(jìn)一步的流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示ALV-Kgp85能夠高效結(jié)合Tva,結(jié)合率在90%以上。為進(jìn)一步驗(yàn)證Tva是否能介導(dǎo)ALV-K進(jìn)入細(xì)胞,利用ALV的非易感細(xì)胞HEK293T進(jìn)行了Tva受體重建試驗(yàn),結(jié)果顯示RCAS-K-GFP能夠進(jìn)入表達(dá)Tva的293T細(xì)胞并復(fù)制產(chǎn)生較強(qiáng)的綠色... 

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 病毒、細(xì)胞株及質(zhì)粒
    1.2 主要試劑
    1.3 ALV-K gp85蛋白真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
    1.4 Tva蛋白可溶性及跨膜表達(dá)的檢測(cè)
    1.5 不同亞群ALV gp85-Fc蛋白的真核表達(dá)及gp85-Fc和s Tva蛋白純化效果的檢測(cè)
    1.6 ALV-A和ALV-K的受體交叉干擾試驗(yàn)
    1.7 ALV-K gp85與sTva蛋白相互作用的Pull-down檢測(cè)
    1.8 ALV-K gp85與sTva蛋白相互作用的Co-IP檢測(cè)
    1.9 ALV-K gp85蛋白與跨膜表達(dá)的Tva蛋白結(jié)合的檢測(cè)
    1.1 0 Tva介導(dǎo)RCAS-K-GFP重組病毒進(jìn)入非易感細(xì)胞中的檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 ALV-K gp85真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
    2.2 不同亞群ALV gp85、Tva蛋白可溶性及跨膜表達(dá)的檢測(cè)結(jié)果
    2.3 ALV-A、ALV-K重組病毒的受體交叉干擾試驗(yàn)結(jié)果
    2.4 ALV-K gp85與sTva相互作用的Pull-down和Co-IP檢測(cè)結(jié)果
    2.5 ALV-K gp85與跨膜表達(dá)的Tva結(jié)合的檢測(cè)結(jié)果
    2.6 Tva介導(dǎo)RCAS-K-GFP重組病毒進(jìn)入非易感細(xì)胞的檢測(cè)結(jié)果
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]J亞群禽白血病病毒gp85蛋白的真核表達(dá)純化及其生物學(xué)活性分析[J]. 張瑤,任超琪,于蒙蒙,高祥,管曉璐,祁小樂,王永強(qiáng),劉長軍,王笑梅,高玉龍.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2017(10)
[2]我國地方品種雞分離到的一個(gè)禽白血病病毒新亞群的鑒定[J]. 王鑫,趙鵬,崔治中.  病毒學(xué)報(bào). 2012(06)



本文編號(hào)：3706617