發(fā)布時間：2022-11-12 13:40

　　奶牛乳腺炎是制約世界奶牛養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的重要疾病。該病主要由病原微生物（細(xì)菌、真菌、支原體等）黏附于乳腺組織引起,其臨床治療以抗生素療法為主,因此這易引起的細(xì)菌耐藥性增加,且抗生素殘留嚴(yán)重威脅人類健康。中藥毒性低、副作用小,用于臨床治療乳腺炎前景良好。靛玉紅是青黛、大青葉等中藥的主要有效成分,具有抗炎、抗腫瘤之功效,但因其水溶性差、生物利用度低、口服不易吸收等特性,臨床應(yīng)用受限。6-溴-靛玉紅-3’-肟（BIO,又稱6BIO）是靛玉紅的衍生物之一,抗癌功效與靛玉紅相似,水溶性優(yōu)于靛玉紅。研究表明BIO對乳腺癌、膀胱癌的治療有重要作用,但其對于乳腺炎的治療效果尚未見報(bào)道。為研究BIO在治療乳腺炎方面的作用,本研究構(gòu)建了體外和小鼠體內(nèi)乳腺炎模型,通過研究經(jīng)BIO干預(yù)后,促炎因子、抑炎因子水平變化,評估BIO對乳腺炎的調(diào)節(jié)作用。通過進(jìn)一步檢測BIO對TLR4-NF-κB和TLR4-MAPKs通路的調(diào)控作用,確定BIO對乳腺炎的調(diào)控機(jī)制。檢測細(xì)胞凋亡率、凋亡相關(guān)信號通路變化,確定BIO在炎癥過程中抑制乳腺上皮細(xì)胞凋亡的機(jī)制,為BIO用于臨床防控奶牛乳腺炎提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:1.BIO試... 

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表(Abbreviation)
1 前言
    1.1 研究問題由來
    1.2 文獻(xiàn)綜述
        1.2.1 奶牛乳腺炎病原微生物及主要防治方法
        1.2.2 奶牛乳腺炎與天然免疫
        1.2.3 中藥防治奶牛乳腺炎作用機(jī)制研究進(jìn)展
        1.2.4 靛玉紅及其衍生物的作用研究
2 研究目的與意義
3 材料與方法
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 試驗(yàn)動物
        3.1.2 試劑及耗材
        3.1.3 試驗(yàn)儀器
        3.1.4 工作液配置
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 MMECs提取
        3.2.2 BIO對MMECs活性影響
        3.2.3 BIO抑炎濃度確定
        3.2.4 體外模型構(gòu)建
        3.2.5 體內(nèi)模型的構(gòu)建
        3.2.6 qRT-PCR試驗(yàn)
        3.2.7 ELISA檢測相關(guān)炎性因子
        3.2.8 MMECs總蛋白的提取
        3.2.9 BCA測定蛋白濃度
        3.2.10 相關(guān)蛋白westernblot檢測
        3.2.11 小鼠乳腺炎模型的評價(jià)
        3.2.12 病理切片制作及觀察
        3.2.13 組織勻漿上清的制備
        3.2.14 試驗(yàn)小鼠血清的處理
        3.2.15 試驗(yàn)小鼠MPO檢測
        3.2.16 流式細(xì)胞術(shù)
4 結(jié)果與分析
    4.1 篩選BIO工作濃度
        4.1.1 不同濃度BIO對細(xì)胞活性影響
        4.1.2 BIO最佳抑炎濃度的確定
    4.2 BIO抑制LPS誘致的MMECs炎性反應(yīng)
        4.2.1 BIO對COX-2表達(dá)的影響
        4.2.2 BIO對促炎因子IL-6、IL-1β和TNF-α表達(dá)的影響
        4.2.3 BIO對IL-10表達(dá)的影響
    4.3 BIO抑制LPS對小鼠乳腺的損傷
        4.3.1 乳腺大體組織學(xué)觀察
        4.3.2 乳腺病理組織學(xué)觀察
        4.3.3 乳腺損傷評分
        4.3.4 乳腺組織中促炎因子的表達(dá)
        4.3.5 MPO活性檢測
    4.4 BIO抑制TLR4-NF-κB及TLR4-MAPKs活性
        4.4.1 BIO對TLR4的影響
        4.4.2 BIO對NF-κB活性的影響
        4.4.3 BIO對MAPKs活性的影響
    4.5 BIO對細(xì)胞凋亡的影響
        4.5.1 BIO對細(xì)胞凋亡率的影響
        4.5.2 BIO對凋亡通路蛋白轉(zhuǎn)錄水平的影響
        4.5.3 BIO對凋亡通路蛋白的蛋白水平影響
5 討論
    5.1 BIO抑制LPS誘導(dǎo)的小鼠乳腺炎的模型
        5.1.1 小鼠乳腺炎模型的構(gòu)建
        5.1.2 BIO濃度的選擇
    5.2 BIO促炎因子表達(dá)的影響
    5.3 BIO對IL-10的影響
    5.4 BIO對COX-2、MPO表達(dá)的影響
    5.5 BIO對NF-κB及MAPKs的影響
    5.6 BIO對凋亡的影響
6 結(jié)論
7 創(chuàng)新與不足
    7.1 創(chuàng)新點(diǎn)
    7.2 不足之處
    7.3 進(jìn)一步研究的建議/設(shè)想
參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表的論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]靛玉紅對神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251的增殖抑制及Bcl-2表達(dá)的影響[J]. 張濤,易昊天,王幫華,王澤夏,寧志豐,胡美純.  湖北科技學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2017(06)
[2]中藥抗炎作用研究概況[J]. 張昕,魏江存,闕祖亮,陳勇.  中國民族民間醫(yī)藥. 2017(21)
[3]二硫化二砷和靛玉紅對骨髓增生異常綜合征細(xì)胞MUTZ-1凋亡及其相關(guān)蛋白的影響[J]. 楊秀鵬,周慶兵,麻柔,王洪志,胡曉梅,許勇鋼.  疑難病雜志. 2017(11)
[4]牛乳腺炎無乳鏈球菌PI-2a菌毛島輔助蛋白AP1、BP主要抗原域串聯(lián)表達(dá)及其免疫活性鑒定[J]. 布日額,王金良,吳金花,錫林高娃,陳金龍,孫立杰,王華,朝洛蒙.  中國病原生物學(xué)雜志. 2017(07)
[5]奶牛乳腺炎發(fā)病原因、危害及防治措施[J]. 許輝堂.  中國畜禽種業(yè). 2017(04)
[6]中藥防治奶牛乳腺炎的臨床應(yīng)用及作用機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 賴金倫,劉玉輝,陳穎鈺,胡長敏,郭愛珍.  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2017(02)
[7]中草藥治療奶牛乳腺炎的研究進(jìn)展[J]. 劉來欽.  中國畜牧獸醫(yī)文摘. 2016(08)
[8]新生兒無乳鏈球菌敗血癥合并腦膜炎12例臨床分析[J]. 楊歡歡,李菁.  臨床兒科雜志. 2016(03)
[9]IL-1β在痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎中的致炎作用及臨床意義[J]. 曹建梅,王曉霞,郭景煜,丁旭東.  中華臨床醫(yī)師雜志(電子版). 2016(05)
[10]NOD1/NOD2介導(dǎo)的信號通路在小鼠金黃色葡萄球菌性乳腺炎中的作用[J]. 徐丹丹,楊彬,孫志鵬,武瑞.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2015(07)

博士論文
[1]奶牛乳腺炎葡萄球菌種類、毒力基因及抗性基因與耐藥性的調(diào)查分析[D]. 徐佳.揚(yáng)州大學(xué) 2016
[2]中藥復(fù)方更年春對β-淀粉樣蛋白致PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[D]. 王文君.復(fù)旦大學(xué) 2009
[3]動物乳腺炎的人工誘導(dǎo)及黃芪多糖等對乳腺的保護(hù)研究[D]. 鐘凱.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005

碩士論文
[1]6-溴靛玉紅-3-肟對山羊乳腺上皮細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[D]. 楊姣.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2014



本文編號：3706472