本文關(guān)鍵詞：牛多殺性巴氏桿菌菌影疫苗的制備及其免疫效力分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：牛巴氏桿菌病又稱(chēng)為牛出血性敗血癥,是由多殺性巴氏桿菌感染引起的一種急性傳染病,急性型呈出血性敗血癥迅速死亡;慢性病例的病變多限于局部器官,通常表現(xiàn)為皮下結(jié)締組織、關(guān)節(jié)、臟器的化膿性病灶。目前用于預(yù)防牛多殺性巴氏桿菌病的疫苗主要為強(qiáng)毒株的滅活菌苗,弱毒活菌疫苗和亞單位疫苗,由于傳統(tǒng)的細(xì)菌全菌體滅活疫苗的免疫效果不理想,不能提供較強(qiáng)的保護(hù)力,弱毒活菌疫苗由于其本身存在活的多殺性巴氏桿菌,在宿主動(dòng)物機(jī)體中存在毒力返強(qiáng)的風(fēng)險(xiǎn)。因此研制一種安全有效的疫苗對(duì)控制牛巴氏桿菌病具有重要意義。本試驗(yàn)以pHH43質(zhì)粒為模板,通過(guò)PCR擴(kuò)增含噬菌體PhiX174的裂解基因E和CI857-PL-PR啟動(dòng)阻遏系統(tǒng)組成的溫敏裂解盒CI857-PL-PR-E,再將裂解盒插入到pPBA1100載體中,構(gòu)建裂解質(zhì)粒pPBA1100-E。利用電轉(zhuǎn)化的方法將其轉(zhuǎn)入牛多殺性巴氏桿菌中,將含有裂解質(zhì)粒的牛多殺性巴氏桿菌在37℃條件下培養(yǎng)至OD600nm值約為0.4時(shí),將培養(yǎng)溫度升至42℃進(jìn)行誘導(dǎo),制備牛多殺性巴氏桿菌菌影,分別計(jì)算誘導(dǎo)前細(xì)菌數(shù)和誘導(dǎo)后細(xì)菌數(shù)計(jì)算裂解效率,其裂解效率可達(dá)99.997%。經(jīng)電鏡觀(guān)察發(fā)現(xiàn)裂解后的細(xì)菌保留了細(xì)菌的基本形態(tài)結(jié)構(gòu),內(nèi)容物幾乎全部釋放到菌體外,僅留下細(xì)菌空殼,在菌體中間可見(jiàn)明顯的孔洞。應(yīng)用制備的菌影疫苗對(duì)小鼠進(jìn)行免疫接種,分析菌影疫苗對(duì)小鼠的免疫效力。將100只5周齡的雌性BALB/c小白鼠,隨機(jī)分成4組:菌影組、菌影+佐劑組、滅活苗組和PBS對(duì)照組,每組25只,實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)1周后,間隔兩周連續(xù)接種兩次。在免疫前采血分離血清做陰性血清,在一免2周后,二免2周后采血分離血清利用間接ELISA方法檢測(cè)小鼠血清中IgG抗體的水平,同時(shí)使用細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒檢測(cè)二免兩周后各組小鼠血清中IL-4、和IFN-γ的含量;然后從二免后3周開(kāi)始連續(xù)數(shù)周采集血液,每次間隔一周,檢測(cè)小鼠血清中IgG抗體的消長(zhǎng)趨勢(shì)。每次免疫兩周后每組處死5只小白鼠,無(wú)菌取出脾臟,從脾臟中分離淋巴細(xì)胞,檢測(cè)免疫后CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化。在二免2周后用牛多殺性巴氏桿菌對(duì)小鼠進(jìn)行攻毒,攻毒后記錄小鼠的存活率。從體液以及細(xì)胞免疫水平對(duì)牛多殺性巴氏桿菌菌影疫苗的免疫效力進(jìn)行分析。試驗(yàn)結(jié)果顯示,本試驗(yàn)制備的牛多殺性巴氏桿菌菌影疫苗可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生較高水平的體液免疫和細(xì)胞免疫,可為小鼠抵抗牛多殺性巴氏桿菌的攻擊提供較高的保護(hù)力。本試驗(yàn)為進(jìn)一步研究牛多殺性巴氏桿菌菌影疫苗奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：牛多殺性巴氏桿菌 裂解質(zhì)粒 菌影疫苗 保護(hù)效力
【學(xué)位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S852.4
【目錄】：

• 摘要4-6
• abstract6-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-26
• 1.1 多殺性巴氏桿菌的研究概況12-23
• 1.1.1 多殺性巴氏桿菌的流行與危害12
• 1.1.2 多殺性巴氏桿菌的生物學(xué)特性12-13
• 1.1.3 多殺性巴氏桿菌的分型13-16
• 1.1.4 牛巴氏桿菌病的臨床癥狀和病理變化16-17
• 1.1.5 多殺性巴氏桿菌的診斷方法17-19
• 1.1.6 多殺性巴氏桿菌主要的毒力因子19-21
• 1.1.7 多殺性巴氏桿菌疫苗研究進(jìn)展21-23
• 1.2 菌影疫苗23-24
• 1.2.1 菌影疫苗的研究進(jìn)展23-24
• 1.2.2 菌影疫苗的形成機(jī)制24
• 1.2.3 菌影疫苗的優(yōu)勢(shì)24
• 1.3 本研究的目的與意義24-26
• 第二章 材料與方法26-38
• 2.1 材料26-27
• 2.1.1 菌種、質(zhì)粒及試驗(yàn)動(dòng)物26
• 2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備26
• 2.1.3 主要藥品及試劑26-27
• 2.2 方法27-38
• 2.2.1 裂解質(zhì)粒p PBA1100-E的構(gòu)建27-31
• 2.2.2 牛多殺性巴氏桿菌菌影的制備31-33
• 2.2.3 免疫動(dòng)物及攻毒試驗(yàn)33-34
• 2.2.4 小鼠血清中特異性抗體的檢測(cè)34-35
• 2.2.5 CD4+和CD8+ T淋巴細(xì)胞的檢測(cè)35-36
• 2.2.6 血清中細(xì)胞因子的檢測(cè)36-37
• 2.2.7 數(shù)據(jù)處理37-38
• 第三章 試驗(yàn)結(jié)果38-50
• 3.1 裂解質(zhì)粒p PBA1100-E的構(gòu)建38-40
• 3.1.1 裂解盒CI857-PL-PR-E的擴(kuò)增38
• 3.1.2 裂解質(zhì)粒p PBA1100-E的PCR和雙酶切鑒定38-40
• 3.2 細(xì)菌裂解率影響因素的篩選40
• 3.3 裂解質(zhì)粒的裂解水平檢測(cè)40-41
• 3.4 裂解效率計(jì)算結(jié)果41
• 3.5 重組質(zhì)粒p PBA1100-E的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果41-43
• 3.6 菌影的掃描電鏡觀(guān)察結(jié)果43
• 3.7 無(wú)菌檢驗(yàn)43
• 3.8 LD50的測(cè)定結(jié)果43-44
• 3.9 攻毒保護(hù)性試驗(yàn)結(jié)果44
• 3.10 攻毒后臟器荷菌數(shù)的檢測(cè)結(jié)果44
• 3.11 小鼠血清中特異性抗體的檢測(cè)結(jié)果44-47
• 3.12 小鼠脾臟淋巴細(xì)胞中CD4+和CD8+ T細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化47-48
• 3.12.1 脾臟中CD4+T細(xì)胞亞群占總淋巴細(xì)胞百分比的動(dòng)態(tài)變化47
• 3.12.2 脾臟中CD8+ T細(xì)胞亞群占總淋巴細(xì)胞百分比的動(dòng)態(tài)變化47-48
• 3.13 血清中細(xì)胞因子的檢測(cè)48-50
• 3.13.1 血清中 IL-4 含量的測(cè)定結(jié)果48
• 3.13.2 血清中IL-4 含量的測(cè)定48-50
• 第四章 討論50-54
• 4.1 裂解質(zhì)粒p PBA1100-E的溶菌情況50
• 4.2 誘導(dǎo)起始菌液濃度對(duì)細(xì)菌裂解率的影響50-51
• 4.3 牛多殺性巴氏桿菌菌影刺激小鼠機(jī)體產(chǎn)生抗體的水平51
• 4.4 小鼠脾臟淋巴細(xì)胞中CD4+和CD8+T細(xì)胞亞群的動(dòng)態(tài)變化51-52
• 4.5 小鼠血清中細(xì)胞因子含量的檢測(cè)52
• 4.6 牛多殺性巴氏桿菌菌影對(duì)小鼠的保護(hù)作用52-54
• 第五章 結(jié)論54-56
• 附錄56-58
• 參考文獻(xiàn)58-64
• 致謝64-66
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷66

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉正剛;楊開(kāi)建;;淺述牛巴氏桿菌病流行特點(diǎn)及其防治措施[J];湖北畜牧獸醫(yī);2014年06期

2 蔡廣強(qiáng);;多殺性巴氏桿菌毒力因子研究進(jìn)展[J];上海畜牧獸醫(yī)通訊;2013年06期

3 吳憶春;;動(dòng)物用菌影疫苗研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2013年09期

4 康艷紅;;多殺性巴氏桿菌的研究進(jìn)展[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘;2013年06期

5 田亮;康立超;趙文娟;薄新文;馬勛;;牦牛源多殺性巴氏桿菌外膜蛋白OmpH和OmpA重組亞單位疫苗對(duì)小鼠的免疫效果[J];中國(guó)獸醫(yī)科學(xué);2013年02期

6 董洪亮;韓先干;白灝;何亮;劉蕾;劉瑞;柴同杰;丁鏟;劉海文;于圣青;;λpL/pR-cI857溫控系統(tǒng)的改造及其對(duì)大腸桿菌菌蛻制備的影響[J];生物工程學(xué)報(bào);2012年12期

7 樸范澤;;牛巴氏桿菌病的防制[J];獸醫(yī)導(dǎo)刊;2012年08期

8 陸水英;陳維賢;;細(xì)菌分子生物學(xué)分型技術(shù)進(jìn)展[J];國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2012年14期

9 劉懷宇;;畜禽巴氏桿菌病的診斷與防制[J];養(yǎng)殖技術(shù)顧問(wèn);2012年02期

10 王帥濤;宮強(qiáng);彭永剛;程茗;秦翠麗;張敏;牛明福;;禽多殺性巴氏桿菌外膜蛋白和脂多糖的免疫保護(hù)效果[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2011年08期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 符一騏;中國(guó)部分地區(qū)鮑曼不動(dòng)桿菌多位點(diǎn)序列分型及碳青霉烯類(lèi)抗生素耐藥機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 馮思源;牛源多殺性巴氏桿菌粘附相關(guān)基因的體內(nèi)表達(dá)及FimA蛋白功能的研究[D];西南大學(xué);2015年

2 王榮華;洶愛(ài)德華氏菌（Edwardsiella ictaluri）菌蛻疫苗的研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 田秋豐;雞白痢沙門(mén)氏菌菌影（Ghost）疫苗的制備及其免疫效力評(píng)價(jià)[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2014年

4 王淑亞;多殺性巴氏桿菌lon缺失突變株的構(gòu)建及生物學(xué)特性的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

5 張軍虎;豬多殺性巴氏桿菌分離鑒定及其PMT毒素免疫原性研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

6 胡明明;副豬嗜血桿菌菌影（Ghost）的制備及其免疫效力評(píng)價(jià)[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

7 黃先奇;豬源多殺性巴氏桿菌體內(nèi)表達(dá)基因的篩選及間接ELISA方法的建立[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

8 鮑娟;豬源多殺性巴氏桿菌分離物莢膜PCR分型與毒素研究[D];貴州大學(xué);2009年

9 李小姝;非變性滅活基因工程菌蛻疫苗的初步研究[D];西南大學(xué);2007年

10 耿艷紅;豬鏈球菌病原分離株生物學(xué)特性和DNA指紋分析研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

  本文關(guān)鍵詞：牛多殺性巴氏桿菌菌影疫苗的制備及其免疫效力分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號(hào)：366042