本文關(guān)鍵詞：牛副流感病毒3型全基因組測(cè)序及反向遺傳質(zhì)粒系統(tǒng)建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza-3 virus,BPIV3)隸屬于副黏病毒科呼吸道病毒屬。BPIV3是牛呼吸道綜合征(bovine respiratory disease complex,BRDC)的主要病原,大多數(shù)牛感染BPIV3會(huì)表現(xiàn)出急性臨床癥狀,對(duì)舍飼育肥牛的危害極大,全球的養(yǎng)牛業(yè)因此蒙受重大的經(jīng)濟(jì)損失。截至目前,BPIV3已報(bào)道3種基因型,即A、B及C型,在世界范圍內(nèi)的多個(gè)地區(qū)均有這3種基因型毒株的分離報(bào)道。對(duì)我國BPIV3流行病學(xué)調(diào)查表明,該病毒已在我國廣泛流行,黑龍江、山東和內(nèi)蒙古自治區(qū)等地亦有該病毒的分離報(bào)道,已進(jìn)行基因鑒定毒株的基因型主要為A型及C型。本研究對(duì)2014年分離于寧夏地區(qū)的一株BPIV3毒株進(jìn)行全基因組測(cè)序并進(jìn)行同源性及進(jìn)化樹分析,參考GenBank上標(biāo)準(zhǔn)序列設(shè)計(jì)5對(duì)引物,覆蓋病毒基因組全長。將RT-PCR產(chǎn)物連接于pMD#174;18-T載體后轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌,將陽性質(zhì)粒進(jìn)行核苷酸測(cè)序,測(cè)序結(jié)果通過分子生物學(xué)軟件進(jìn)行拼接,并與GenBank上參考序列進(jìn)行比較及構(gòu)建進(jìn)化樹。結(jié)果表明,分離毒株為C基因型牛副流感病毒3型,命名為NX49。NX49株全基因組長為15474bp,提交到GenBank的序列號(hào)為KT071671。理化分析結(jié)果表明,NX49毒株對(duì)高溫、酸及脂溶劑均敏感,高溫孵育下Mg2+對(duì)該病毒無保護(hù)力;血凝實(shí)驗(yàn)表明,NX49對(duì)豚鼠紅細(xì)胞凝集效價(jià)僅為1∶4,且僅在4℃孵育時(shí)出現(xiàn)凝集反應(yīng);第6代病毒的滴度約為108.0TCID50/m L。同源性分析結(jié)果表明,NX49與中國山東C型分離株SD0835具有最高的同源性,為99.3%;與中國內(nèi)蒙古A型分離株NM09的同源性為82.5%;與澳大利亞B型分離株Q5592的同源性為81.4%。NX49與SD0835同屬一個(gè)進(jìn)化分枝,但由于地域及時(shí)間上的不同可能造成他們之間在基因水平上存在差異。另外,本研究以BPIV3標(biāo)準(zhǔn)毒株BN-1為親本構(gòu)建BPIV3反向遺傳質(zhì)粒系統(tǒng),利用RT-PCR方法分段擴(kuò)增BPIV3全基因組序列,利用合適的酶切位點(diǎn)將各片段克隆至真核表達(dá)載體pCI-neo并分別在病毒基因組的3始

本文編號(hào)：365656