本文關(guān)鍵詞：丙酸睪酮對(duì)小鼠睪丸BNNF、NGF、NT-3和NT-4神經(jīng)營養(yǎng)素表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：哺乳動(dòng)物的繁殖活動(dòng)除了下丘腦-垂體-性腺軸的激素調(diào)控外,也受多種細(xì)胞因子的調(diào)節(jié),其中包括神經(jīng)營養(yǎng)素。神經(jīng)營養(yǎng)素(Neurotrophins)是在神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)的一類蛋白家族,是神經(jīng)細(xì)胞存活和發(fā)育的主要調(diào)節(jié)因子。神經(jīng)營養(yǎng)素家族包括神經(jīng)生長因子(NGF),腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF),神經(jīng)營養(yǎng)素3(NT-3)和神經(jīng)營養(yǎng)素4(NT-4)。它們主要是在腦和神經(jīng)組織表達(dá),對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的分化和神經(jīng)元存活具有重要作用。雄激素主要是由睪丸合成和分泌,與動(dòng)物生殖有著極其密切的關(guān)系,能夠影響精子發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn),神經(jīng)營養(yǎng)因子和雄激素在動(dòng)物生殖調(diào)控中發(fā)揮著重要作用。然而在雄性生殖調(diào)控中,雄激素和神經(jīng)營養(yǎng)素之間的關(guān)系并不明確。本文以小鼠為研究對(duì)象,探究丙酸睪酮對(duì)小鼠睪丸神經(jīng)營養(yǎng)素表達(dá)的影響,以揭示雄激素與神經(jīng)營養(yǎng)素在雄性生殖中的調(diào)節(jié)關(guān)系,研究內(nèi)容如下:1、丙酸睪酮對(duì)小鼠睪丸神經(jīng)營養(yǎng)素表達(dá)的影響用丙酸睪酮處理小鼠0、6、12和24h后,收集睪丸,觀察睪丸形態(tài)變化,檢測(cè)睪丸中神經(jīng)營養(yǎng)素m RNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)變化。小鼠睪丸切片HE染色結(jié)果顯示,高劑量丙酸睪酮嚴(yán)重破壞了睪丸結(jié)構(gòu),精子發(fā)生出現(xiàn)異常。神經(jīng)營養(yǎng)素定量結(jié)果表明,丙酸睪酮處理小鼠,12小時(shí)后發(fā)生明顯作用,能促進(jìn)睪丸中BDNF、NT-3和NT-4的表達(dá),而抑制NGF的表達(dá)。2、丙酸睪酮對(duì)TM4和GC-1spg細(xì)胞神經(jīng)營養(yǎng)素表達(dá)的影響。用丙酸睪酮處理TM4和GC-1spg細(xì)胞,通過CCK8法檢測(cè)細(xì)胞活力變化,運(yùn)用熒光定量來檢測(cè)神經(jīng)營養(yǎng)素m RNA的變化,利用細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)神經(jīng)營養(yǎng)素蛋白質(zhì)的表達(dá)變化。細(xì)胞活力實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,丙酸睪酮對(duì)TM4和GC-1spg細(xì)胞活性無明顯影響。熒光定量與細(xì)胞免疫熒光結(jié)果表明,丙酸睪酮處理TM4細(xì)胞,使BDNF和NT4的表達(dá)在12h降低,到24h又恢復(fù)到正常水平,而NGF和NT-3的表達(dá)在12h后受到抑制。對(duì)于GC-1spg細(xì)胞,丙酸睪酮處理使BDNF和NGF的表達(dá)在6h到12h降低,24h后表達(dá)升高,最終BDNF表達(dá)水平高于正常,而NGF表達(dá)回到正常水平;NT-3的表達(dá)量在6h下降,12h升高,而在24h又下降,出現(xiàn)回復(fù)現(xiàn)象,NT-4的表達(dá)則在6h后受到了抑制。綜上所述,我們的研究結(jié)果表明,高劑量的丙酸睪酮會(huì)嚴(yán)重破壞睪丸的正常結(jié)構(gòu),使精子發(fā)生異常,出現(xiàn)雄性不育。丙酸睪酮能夠調(diào)節(jié)睪丸中神經(jīng)營養(yǎng)素的表達(dá),參與調(diào)控雄性生殖。
【關(guān)鍵詞】：丙酸睪酮 小鼠 睪丸 神經(jīng)營養(yǎng)素 表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S814
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-12
• 中英文對(duì)照表12-13
• 前言13-15
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述15-27
• 第1章 雄激素與雄性動(dòng)物生殖15-23
• 1.1 雄激素15
• 1.2 雄激素受體15-17
• 1.3 雄激素與雄性動(dòng)物生殖17-21
• 1.3.1 雄激素的生物作用17-18
• 1.3.2 睪丸的結(jié)構(gòu)與功能18-20
• 1.3.3 雄激素與雄性生殖20-21
• 1.4 雄激素與神經(jīng)營養(yǎng)素21
• 1.5 雄激素的應(yīng)用21-23
• 第2章 神經(jīng)營養(yǎng)素研究進(jìn)展23-27
• 2.1 腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）23-24
• 2.2 神經(jīng)生長因子(NGF)24-25
• 2.3 神經(jīng)營養(yǎng) 3（NT-3）和神經(jīng)營養(yǎng)素 4（NT-4）25-27
• 第二篇 研究內(nèi)容27-57
• 第1章丙酸睪酮對(duì)小鼠睪丸神經(jīng)營養(yǎng)素表達(dá)的影響27-47
• 1.1 材料27-29
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物27
• 1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器27-28
• 1.1.3 主要試劑28
• 1.1.4 主要試劑配制28-29
• 1.2 方法29-40
• 1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及處理29
• 1.2.2 小鼠睪丸組織石蠟切片制備29
• 1.2.3 小鼠睪丸組織HE染色29-30
• 1.2.4 小鼠睪丸總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄30-31
• 1.2.5 物設(shè)計(jì)與合成31-32
• 1.2.6 目的基因克隆32-35
• 1.2.7 熒光定量35-36
• 1.2.8 小鼠睪丸總蛋白提取及濃度測(cè)定36-37
• 1.2.9 蛋白免疫印跡37-40
• 1.2.10數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)40
• 1.3 結(jié)果分析40-44
• 1.3.1 小鼠睪丸形態(tài)變化40-41
• 1.3.2 小鼠睪丸總RNA提取41-42
• 1.3.3 目的基因擴(kuò)增及測(cè)序42
• 1.3.4 小鼠睪丸神經(jīng)營養(yǎng)素mRNA表達(dá)42-43
• 1.3.5 小鼠睪丸神經(jīng)營養(yǎng)素蛋白表達(dá)43-44
• 1.4 討論44-46
• 1.5 小結(jié)46-47
• 第2章 丙酸睪酮對(duì)TM3、TM4及GC-1spg細(xì)胞神經(jīng)營養(yǎng)素表達(dá)的影響47-57
• 2.1 材料47-48
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料47
• 2.1.2 主要儀器47
• 2.1.3 主要試劑47
• 2.1.4 主要試劑配制47-48
• 2.2 方法48-49
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及處理48
• 2.2.2 CCK8測(cè)細(xì)胞活力48-49
• 2.2.3 細(xì)胞免疫熒光49
• 2.2.4 RNA提取與反轉(zhuǎn)錄、目的基因擴(kuò)增及測(cè)序和熒光定量49
• 2.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)49
• 2.3 結(jié)果分析49-54
• 2.3.1 丙酸睪酮對(duì)TM4和GC-1spg細(xì)胞活力的影響49-50
• 2.3.2 TM4和GC-1spg細(xì)胞神經(jīng)營養(yǎng)素蛋白表達(dá)50
• 2.3.3 丙酸睪酮對(duì)TM4和GC-1spg細(xì)胞神經(jīng)營養(yǎng)素mRNA表達(dá)的影響50-52
• 2.3.4 丙酸睪酮對(duì)TM4和GC-1spg細(xì)胞神經(jīng)營養(yǎng)素蛋白表達(dá)的影響52-54
• 2.4 討論54-56
• 2.5 小結(jié)56-57
• 結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-70
• 導(dǎo)師簡介70-71
• 作者簡介71-72
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文及科研成果72-73
• 致謝73

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：丙酸睪酮對(duì)小鼠睪丸BNNF、NGF、NT-3和NT-4神經(jīng)營養(yǎng)素表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：364480