發(fā)布時(shí)間：2017-05-07 17:08

  本文關(guān)鍵詞：大熊貓犬瘟熱和小熊貓犬細(xì)小病毒病病原調(diào)查及犬細(xì)小病毒免疫血清與疫苗的研制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：犬瘟熱(Canine distemper,CD)是由犬瘟熱病毒(Canine distemper virus,CDV)引起的一種急性、高度接觸性傳染病,臨床上以厭食、雙相熱、結(jié)膜炎、嚴(yán)重胃腸炎和神經(jīng)癥狀為主要典型特征。犬細(xì)小病毒病(canine parvovirus,CP)是由犬細(xì)小病毒(Canine Parvovirus,CPV)引起的一種急性、出血性腸炎或非化膿性心肌炎為主要特征的傳染病。CDV和CPV的易感宿主范圍不斷擴(kuò)大,可在大量物種間進(jìn)行種內(nèi)和種間傳播。近些年來(lái),大熊貓感染CDV和小熊貓感染CPV均有報(bào)道。目前尚無(wú)針對(duì)大熊貓和小熊貓的特異性免疫CDV血清、免疫CPV血清,以及相應(yīng)的疫苗。本研究采用PCR檢測(cè)和基因序列測(cè)定、細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)、病毒回歸動(dòng)物試驗(yàn)、病毒滅活試驗(yàn)、免疫接種、中和試驗(yàn)等方法,調(diào)查了陜西樓觀臺(tái)大熊貓繁育基地大熊貓犬瘟熱和福州熊貓世界小熊貓犬細(xì)小病毒病的流行現(xiàn)狀,對(duì)導(dǎo)致樓觀臺(tái)大熊貓死亡的犬瘟熱病毒和導(dǎo)致福州熊貓世界小熊貓死亡的犬細(xì)小病毒進(jìn)行分離鑒定、犬細(xì)小病毒滅活疫苗研制及免疫效果評(píng)估。研究獲得如下結(jié)果:1.陜西樓觀臺(tái)大熊貓CDV抗凝血檢出率為16%,棉拭子檢出率為28%;采集陜西樓觀臺(tái)犬瘟熱死亡大熊貓的心臟、肺、肝病料,預(yù)處理后接種Vero細(xì)胞,盲傳到第5代時(shí),vero細(xì)胞出現(xiàn)圓縮、聚集、脫落等病變;PCR擴(kuò)增CDV N蛋白基因,得到一個(gè)287bp擴(kuò)增片段,測(cè)序結(jié)果顯示其與已發(fā)表的CDV山東毒株(亞洲-I型)的相似性為98%;細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)測(cè)得該毒株的TCID50為10-5.2/mL;幼犬感染該毒株后,出現(xiàn)體溫升高、鼻頭發(fā)干、拉稀、眼鼻分泌出水樣分泌物等癥狀。證明成功分離到導(dǎo)致樓觀臺(tái)大熊貓死亡的犬瘟熱病毒株,命名為L(zhǎng)G株。2.福州熊貓世界小熊貓外周血中CPV檢出率為10.0%,棉試子中CPV檢出率為10%。導(dǎo)致小熊貓死亡的CPV陽(yáng)性樣品經(jīng)過(guò)處理后接種到F81細(xì)胞上,盲傳到第5代時(shí)細(xì)胞產(chǎn)生病變(CPE)明顯,病變細(xì)胞出現(xiàn)拉網(wǎng)、圓縮、崩解、脫落。PCR擴(kuò)增VP2基因,得到一個(gè)452 bp目的片段。測(cè)序結(jié)果顯示其與CPV-北京毒株的同源性為100%。表明導(dǎo)致小熊貓死亡的CPV毒株分離成功,命名為CPV FZ株。3.細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)增CPV毒株,測(cè)定病毒TCID50為10-5.6/50μL。甲醛滅活完全,滅活疫苗與篩選的轉(zhuǎn)移因子鋁膠鹽佐劑混合滅活疫苗,免疫犬3次后獲得免疫血清中和抗體能效價(jià)為1:28.6。免疫犬攻毒后未發(fā)病,其中和抗體效價(jià)為1:211。結(jié)論:成功分離出CDV強(qiáng)毒LG株和CPV強(qiáng)毒FZ株;建立了CPV的滅活疫苗制備方法及相應(yīng)的免疫程序,免疫試驗(yàn)證明疫苗免疫效果良好;獲得了相應(yīng)的滅活疫苗和免疫血清。上述結(jié)果為大熊貓和小熊貓2種疫病的免疫防控提供了參考依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：大熊貓 小熊貓 犬瘟熱病毒 犬細(xì)小病毒
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.93
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-11
• 文獻(xiàn)綜述11-21
• 第一章 犬瘟熱及犬細(xì)小病毒病研究進(jìn)展11-21
• 1.1 犬瘟熱研究進(jìn)展11-16
• 1.1.1 流行病學(xué)11-12
• 1.1.2 病原學(xué)12-14
• 1.1.3 診斷及治療14-15
• 1.1.4 預(yù)防15-16
• 1.2 犬細(xì)小病毒病研究進(jìn)展16-19
• 1.2.1 流行病學(xué)16-17
• 1.2.2 病原學(xué)17-18
• 1.2.3 診斷及治療18-19
• 1.2.4 預(yù)防19
• 1.3 本研究的目的及意義19-21
• 試驗(yàn)研究21-49
• 第二章 陜西樓觀臺(tái)大熊貓犬瘟熱、福州熊貓世界小熊貓犬細(xì)小病毒病病原調(diào)查及病原的分離鑒定21-38
• 2.1 材料21-22
• 2.1.1 動(dòng)物21
• 2.1.2 細(xì)胞株21
• 2.1.3 主要試劑21-22
• 2.1.4 主要儀器22
• 2.1.5 主要溶液及配方22
• 2.2 方法22-27
• 2.2.1 福州熊貓世界小熊貓犬細(xì)小病毒病、陜西樓觀臺(tái)大熊貓繁育基地大熊貓犬瘟熱分子病原調(diào)查22-25
• 2.2.2 大熊貓?jiān)慈翢岵《荆–DV）分離與鑒定25-26
• 2.2.3 小熊貓?jiān)慈?xì)小病毒（CPV）分離與鑒定26-27
• 2.3 結(jié)果27-36
• 2.3.1 大熊貓犬瘟熱分子病原調(diào)查結(jié)果27-30
• 2.3.2 大熊貓犬瘟熱分離鑒定結(jié)果30-31
• 2.3.3 小熊貓犬細(xì)小病毒（CPV）分子病原調(diào)查結(jié)果31-34
• 2.3.4 小熊貓犬細(xì)小病毒VP2基因PCR測(cè)序結(jié)果34
• 2.3.5 小熊貓犬細(xì)小病毒分離鑒定結(jié)果34-36
• 2.4 討論36-37
• 2.5 小結(jié)37-38
• 第三章 CPV疫苗研制及免疫效果評(píng)估38-49
• 3.1 材料38-39
• 3.1.1 材料38-39
• 3.2 方法39-41
• 3.2.1 犬細(xì)小病毒（CPV）細(xì)胞毒TCID_(50)測(cè)定39
• 3.2.2 犬細(xì)小病毒（CPV）細(xì)胞毒滅活39
• 3.2.3 犬細(xì)小病毒（CPV）細(xì)胞毒疫苗滅活效果檢驗(yàn)39-40
• 3.2.4 犬細(xì)小病毒（CPV）細(xì)胞毒疫苗免疫效果評(píng)估40-41
• 3.2.5 犬細(xì)小病毒（CPV）高免血清制備41
• 3.3 結(jié)果41-47
• 3.3.1 CPV TCID_(50)測(cè)定結(jié)果41-42
• 3.3.2 CPV滅活效果檢驗(yàn)42-44
• 3.3.3 CPV TCID_(50)測(cè)定驗(yàn)證結(jié)果44-45
• 3.3.4 中和試驗(yàn)結(jié)果45-47
• 3.3.5 抗CPV高免血清制備47
• 3.4 討論47-48
• 3.5 小結(jié)48-49
• 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 致謝55-56
• 作者簡(jiǎn)介56

【相似文獻(xiàn)】

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