本文關(guān)鍵詞：BMAL1對豬卵巢顆粒細(xì)胞激素分泌與凋亡的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：在哺乳動物中,伴隨著發(fā)情周期的變化,卵巢中的卵泡不斷地進(jìn)行著生長發(fā)育和閉鎖,這一過程是在下丘腦-垂體性腺軸的調(diào)控作用下完成的。卵巢顆粒細(xì)胞作為卵泡中的主要體細(xì)胞,在卵泡的生長發(fā)育、閉鎖,卵母細(xì)胞的成熟,以及排卵過程中都具有重要作用。卵巢顆粒細(xì)胞的激素合成和凋亡受到很多復(fù)雜機(jī)制的調(diào)控,顆粒細(xì)胞的激素合成以及凋亡與卵巢的功能調(diào)控聯(lián)系緊密。有研究表明,生物鐘系統(tǒng)在維持雌性動物卵巢的正常功能及繁殖性能中發(fā)揮著重要的作用。Bmal1是重要的生物鐘基因,并且已經(jīng)被證實會影響雌性動物內(nèi)分泌功能和繁殖性能。已有相關(guān)研究表明Bmal1在顆粒細(xì)胞發(fā)育的不同階段具有不同的表達(dá)水平,故此推測生物鐘系統(tǒng)可能調(diào)控顆粒細(xì)胞的分化和凋亡以及激素合成,其具體的分子作用機(jī)制也有待探索。本實驗以豬卵巢顆粒細(xì)胞為研究對象,使用siRNA干擾技術(shù)抑制生物鐘基因Bmal1的表達(dá),并使用實時定量PCR(Real-time qPCR)、蛋白印跡(Western Blot)等技術(shù)檢測激素受體基因(Fshr、Lhcgr和Erβ)和激素合成相關(guān)基因(Cyp11a1、Cyp19a1和Star)的表達(dá);通過序列比對尋找上述功能基因啟動子生物鐘調(diào)控元件(E-box、D-box和RORE);使用化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測細(xì)胞培養(yǎng)基中雌二醇(E2)和孕酮(P4)的含量;使用Annexin V染色法檢測細(xì)胞凋亡;還檢測了PI3K/AKT/mTOR信號通路蛋白的表達(dá),最終得出如下結(jié)果:1.在豬卵巢顆粒細(xì)胞中,生物鐘基因Bmal1、Per2和Cry1,以及激素合成相關(guān)基因Cyp11a1的表達(dá)都呈現(xiàn)出節(jié)律性,并且在使用地塞米松處理后,生物鐘基因的節(jié)律性表達(dá)得到加強(qiáng)。2.干擾生物鐘基因Bmal1能下調(diào)部分生物鐘基因,以及顆粒細(xì)胞中激素受體基因(Fshr和Lhcgr)和激素合成基因(Cyp11a1、Cyp19a1和Star)的表達(dá),生物鐘基因以及部分激素合成相關(guān)基因的節(jié)律性表達(dá)也受到影響,這些基因的啟動子區(qū)域都發(fā)現(xiàn)了生物鐘控制元件(E-box或RORE),說明生物鐘系統(tǒng)可能是通過調(diào)控相關(guān)基因啟動子上的生物鐘調(diào)控元件發(fā)揮作用,并最終導(dǎo)致顆粒細(xì)胞分泌的雌激素和孕酮減少。3.干擾Bmal1的表達(dá)促進(jìn)了豬卵巢顆粒細(xì)胞的凋亡,細(xì)胞的早期凋亡率和晚期凋亡率都出現(xiàn)升高。4.干擾Bmal1后PI3K/AKT/mTOR信號通路上蛋白的磷酸化水平都降低,信號通路活性受到抑制。以上結(jié)果表明,生物鐘基因Bmal1以及生物鐘系統(tǒng)對豬卵巢顆粒細(xì)胞激素分泌和凋亡具有調(diào)控作用。干擾Bmal1會使生物鐘系統(tǒng)紊亂,同時導(dǎo)致顆粒細(xì)胞激素分泌量減少以及細(xì)胞凋亡增加,生物鐘系統(tǒng)可能是通過調(diào)控相關(guān)基因啟動子上的生物鐘調(diào)控元件發(fā)揮其調(diào)控作用,也可能通過PI3K/AKT/mTOR信號通路影響豬顆粒細(xì)胞的功能。
【關(guān)鍵詞】：顆粒細(xì)胞 生物鐘 Bmal1 激素 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S828
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-23
• 1.1 卵泡的發(fā)育與顆粒細(xì)胞12-16
• 1.1.1 類固醇激素對卵泡發(fā)育的影響13-14
• 1.1.2 顆粒細(xì)胞對卵泡發(fā)育的調(diào)節(jié)作用14-15
• 1.1.3 PI3K/AKT/mTOR 信號通路與顆粒細(xì)胞15-16
• 1.2 生物鐘系統(tǒng)16-23
• 1.2.1 生物鐘系統(tǒng)的分子機(jī)制16-18
• 1.2.2 生物鐘系統(tǒng)調(diào)控基因表達(dá)18-19
• 1.2.3 生物鐘與生理代謝19-20
• 1.2.4 生物鐘與繁殖20-23
• 前言23-25
• 第二章 豬卵巢顆粒細(xì)胞中基因的表達(dá)節(jié)律25-29
• 2.1 材料與方法25-26
• 2.1.1 實驗材料25
• 2.1.2 實驗方法25-26
• 2.2 結(jié)果與分析26-27
• 2.2.1 分離培養(yǎng)細(xì)胞的鑒定26
• 2.2.2 豬卵巢顆粒細(xì)胞中基因的節(jié)律性表達(dá)26-27
• 2.3 討論27-29
• 第三章 Bmal1對豬卵巢顆粒細(xì)胞激素分泌的影響29-36
• 3.1 材料與方法29-30
• 3.1.1 實驗材料29-30
• 3.1.2 實驗方法30
• 3.1.3 數(shù)據(jù)分析30
• 3.2 結(jié)果與分析30-35
• 3.2.1 siRNA轉(zhuǎn)染效率與干擾效率檢測30-31
• 3.2.2 干擾Bmal1對生物鐘基因和卵巢功能基因表達(dá)的影響31-32
• 3.2.3 干擾Bmal1對卵巢基因節(jié)律性表達(dá)的影響32-34
• 3.2.4 干擾Bmal1對顆粒細(xì)胞激素分泌的影響34
• 3.2.5 卵巢基因生物鐘調(diào)控元件比對34-35
• 3.3 討論35-36
• 第四章 Bmal1對豬卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的影響36-40
• 4.1 材料與方法36-37
• 4.1.1 實驗材料36
• 4.1.2 實驗方法36
• 4.1.3 數(shù)據(jù)分析36-37
• 4.2 結(jié)果與分析37-38
• 4.2.1 Bmal1對顆粒細(xì)胞凋亡的影響37
• 4.2.2 Bmal1對PI3K/AKT/mTOR信號通路的影響37-38
• 4.3 討論38-40
• 結(jié)論40
• 創(chuàng)新點40-41
• 參考文獻(xiàn)41-53
• 附錄53-60
• 致謝60-61
• 個人簡介61

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本文編號：348648