本文關(guān)鍵詞：克氏偽裸頭絳蟲(chóng)的鑒定及其遺傳變異研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：克氏偽裸頭絳蟲(chóng)(Pseudanoplocephala crawfordi)是一種重要的人獸共患絳蟲(chóng),該絳蟲(chóng)最初發(fā)現(xiàn)于斯里蘭卡野豬體內(nèi),之后相繼發(fā)現(xiàn)于印度、中國(guó)、日本的豬體內(nèi),其主要寄生在豬小腸內(nèi),引起仔豬生長(zhǎng)發(fā)育受阻、消瘦、腹痛和腹瀉甚至死亡,降低飼料轉(zhuǎn)化率,對(duì)養(yǎng)殖業(yè)造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。人可因誤食含有該絳蟲(chóng)幼蟲(chóng)的赤擬谷盜等昆蟲(chóng)而感染,目前國(guó)內(nèi)已有21例人感染的報(bào)道。準(zhǔn)確鑒定該絳蟲(chóng)和明確其種群遺傳特征是制定預(yù)防和控制克氏偽裸頭絳蟲(chóng)對(duì)人和動(dòng)物危害有效措施的關(guān)鍵�；诖�,本論文從以下四個(gè)方面研究了克氏偽裸頭絳蟲(chóng)的鑒定方法和遺傳變異特點(diǎn)。1.通過(guò)對(duì)采自陜西楊凌自然感染的豬體內(nèi)的克氏偽裸頭絳蟲(chóng)不同染色和形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn),蘇木精染液對(duì)成蟲(chóng)的頭節(jié)、頸節(jié)、幼節(jié)和成節(jié)效果較好,而齊氏石碳酸品紅染液對(duì)孕卵節(jié)片較為理想。通過(guò)觀察蟲(chóng)體標(biāo)本,初步鑒定為克氏偽裸頭絳蟲(chóng)。2.擴(kuò)增克氏偽裸頭絳蟲(chóng)核糖體DNA內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS rDNA)并克隆、測(cè)序和序列分析,發(fā)現(xiàn)克氏偽裸頭絳蟲(chóng)ITS全長(zhǎng)為1586 bp,其中ITS1為757 bp,5.8S為201 bp,ITS2為628 bp。分別基于ITS1和ITS2構(gòu)建絳蟲(chóng)種系發(fā)育樹(shù),可見(jiàn)克氏偽裸頭絳蟲(chóng)與膜殼屬絳蟲(chóng)聚在一起,表明克氏偽裸頭絳蟲(chóng)可能屬于膜殼屬。3.擴(kuò)增克氏偽裸頭絳蟲(chóng)細(xì)胞色素C氧化酶亞基1基因部分片段(pcox1)和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脫氫酶亞單位1基因(nad1)部分片段(pnad1),并測(cè)序和序列分析,發(fā)現(xiàn)pcox1和pnad1長(zhǎng)度分別為380 bp和458 bp。分別基于pcox1和pnad1構(gòu)建進(jìn)化樹(shù),發(fā)現(xiàn)pcox1可能不適合作為分子標(biāo)記,而pnad1適合作為遺傳標(biāo)記來(lái)研究絳蟲(chóng)的種系發(fā)育。4.測(cè)定和分析了克氏偽裸頭絳蟲(chóng)線粒體全基因組,發(fā)現(xiàn)該絳蟲(chóng)線粒體全基因組全長(zhǎng)14192 bp,共編碼36個(gè)基因,其中12個(gè)蛋白編碼基因,2個(gè)核糖體RNA基因和22個(gè)轉(zhuǎn)移RNA�；虻呐帕许樞蚺c縮小膜殼絳蟲(chóng)完全一致,而與其他絳蟲(chóng)僅有有2個(gè)tNAR基因排列順序相顛倒。基于12個(gè)蛋白編碼基因氨基酸序列重建絳蟲(chóng)種系發(fā)育樹(shù),表明克氏偽裸頭絳蟲(chóng)可能屬于膜殼屬,并與縮小膜殼絳蟲(chóng)親緣關(guān)系最近。5.擴(kuò)增和測(cè)定了河南洛陽(yáng)、濟(jì)源和陜西楊凌地區(qū)豬的克氏偽裸頭絳蟲(chóng)分離株線粒體cox3基因的部分片段(pcox3)、nad4基因的部分片段(pnad4)和cytb基因的部分片段(pcytb),然后通過(guò)合并pcox3、pnad4和pcytb三段序列重建了克氏偽裸頭絳蟲(chóng)與其它絳蟲(chóng)的種群遺傳關(guān)系。發(fā)現(xiàn)克氏偽裸頭絳蟲(chóng)pcox3、pnad4和pcytb擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度分別為503 bp、604 bp和690 bp;克氏偽裸頭絳蟲(chóng)線粒體三段基因pcox3、pnad4和pcytb的不同地域種內(nèi)序列差異分別為0~1.83%、0~1.52%和0~1.51%;基于合并cox3、nad4和cytb三段基因重構(gòu)種系發(fā)育樹(shù)發(fā)現(xiàn),不同地區(qū)克氏偽裸頭絳蟲(chóng)分離株聚在一起,并與縮小膜殼絳蟲(chóng)形成姊妹支,而所有的克氏偽裸頭絳蟲(chóng)分離株又形成兩個(gè)小的分支。表明克氏偽裸頭絳蟲(chóng)可能存在兩個(gè)種群,并且與縮小膜殼絳蟲(chóng)親緣關(guān)系最近。
【關(guān)鍵詞】：克氏偽裸頭絳蟲(chóng) 鑒定 遺傳變異 線粒體基因組
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.7
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-13
• 文獻(xiàn)綜述13-19
• 第一章 克氏偽裸頭絳蟲(chóng)研究概況13-19
• 1.1 克氏偽裸頭絳蟲(chóng)13-14
• 1.1.1 分類學(xué)地位13
• 1.1.2 形態(tài)學(xué)和生活史13
• 1.1.3 生活史13-14
• 1.2 克氏偽裸頭絳蟲(chóng)病14-15
• 1.2.1 流行病學(xué)研究14
• 1.2.2 診斷14
• 1.2.3 防治14-15
• 1.3 寄生蟲(chóng)分子分類的研究15-16
• 1.3.1 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 限制性片斷長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR RFLP）15
• 1.3.2 長(zhǎng)PCR（Long-range PCR）擴(kuò)增技術(shù)15-16
• 1.4 絳蟲(chóng)分類學(xué)和分子遺傳學(xué)研究16-18
• 1.4.1 形態(tài)學(xué)分類研究16
• 1.4.2 分子生物學(xué)分類及遺傳學(xué)研究16-18
• 1.4.2.1 核糖體基因特點(diǎn)及在蠕蟲(chóng)研究中的應(yīng)用16-17
• 1.4.2.2 線粒體基因特點(diǎn)及在蠕蟲(chóng)蟲(chóng)研究中的應(yīng)用17-18
• 1.5 本研究的目的和意義18-19
• 試驗(yàn)研究19-48
• 第二章 克氏偽裸頭絳蟲(chóng)形態(tài)學(xué)觀察19-23
• 2.1 材料與方法19-20
• 2.1.1 材料19
• 2.1.1.1 蟲(chóng)種19
• 2.1.1.2 主要試劑19
• 2.1.1.3 溶液及其配制19
• 2.1.1.4 主要儀器19
• 2.1.2 方法19-20
• 2.1.2.1 蟲(chóng)體采集及處理19-20
• 2.1.2.2 染色鏡檢20
• 2.1.2.3 形態(tài)學(xué)觀察20
• 2.2 結(jié)果20-22
• 2.2.1 克氏偽裸頭絳蟲(chóng)標(biāo)本的制作20
• 2.2.2 頭節(jié)的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)20-21
• 2.2.3 體節(jié)（幼節(jié)、成節(jié)和孕節(jié)）的形態(tài)學(xué)觀察21-22
• 2.3 討論22
• 2.4 小結(jié)22-23
• 第三章 克氏偽裸頭絳蟲(chóng)ITS、cox1和nad1基因的擴(kuò)增與種系發(fā)育分析23-34
• 3.1 材料與方法23-29
• 3.1.1 材料23-24
• 3.1.1.1 蟲(chóng)種23
• 3.1.1.2 主要試劑23
• 3.1.1.3 溶液及其配制23-24
• 3.1.1.4 主要儀器24
• 3.1.2 方法24-29
• 3.1.2.1 蟲(chóng)體鑒定和DNA提取24-25
• 3.1.2.2 樣品ITS rDNA的擴(kuò)增25-26
• 3.1.2.3 PCR產(chǎn)物的檢測(cè)26
• 3.1.2.4 PCR產(chǎn)物純化回收26-27
• 3.1.2.5 純化PCR產(chǎn)物的連接27
• 3.1.2.6 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化27-28
• 3.1.2.7 轉(zhuǎn)化子菌液鑒定28
• 3.1.2.8 測(cè)序及進(jìn)化分析28-29
• 3.2 結(jié)果29-32
• 3.2.1 ITS擴(kuò)增結(jié)果29
• 3.2.2 cox1和nad1基因PCR擴(kuò)增結(jié)果29-30
• 3.2.3 克氏偽裸頭絳蟲(chóng)ITS rDNA序列分析30
• 3.2.4 克氏偽裸頭絳蟲(chóng)pcox1和pnad1基因序列分析30
• 3.2.5 基于ITS rDNA序列的種系發(fā)育分析30-31
• 3.2.6 基于pcox1和pnad1基因的種系發(fā)育關(guān)系分析31-32
• 3.3 討論32-33
• 3.4 小結(jié)33-34
• 第四章 克氏偽裸頭絳蟲(chóng)線粒體基因組分析34-42
• 4.1 材料與方法34-37
• 4.1.1 材料34
• 4.1.1.1 蟲(chóng)種34
• 4.1.1.2 主要試劑34
• 4.1.1.3 溶液配制34
• 4.1.1.4 主要儀器34
• 4.1.2 方法34-37
• 4.1.2.1 樣品處理、鑒定及DNA提取34
• 4.1.2.2 引物設(shè)計(jì)34-35
• 4.1.2.3 克氏偽裸頭絳蟲(chóng)線粒體基因組長(zhǎng)PCR擴(kuò)增方法35-36
• 4.1.2.4 PCR產(chǎn)物的回收36
• 4.1.2.5 純化PCR產(chǎn)物的連接36
• 4.1.2.6 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化36
• 4.1.2.7 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的克隆及菌液PCR鑒定36
• 4.1.2.8 克氏偽裸頭絳蟲(chóng)線粒體基因組序列分析36-37
• 4.1.2.9 基于線粒體基因組的線蟲(chóng)系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)重構(gòu)37
• 4.2 結(jié)果37-41
• 4.2.1 細(xì)頸線蟲(chóng)線粒體基因組的組成37
• 4.2.2 蛋白質(zhì)編碼基因分析37-38
• 4.2.3 基于線粒體基因組的線蟲(chóng)系統(tǒng)進(jìn)化分析38-41
• 4.3 討論41
• 4.4 小結(jié)41-42
• 第五章 克氏偽裸頭絳蟲(chóng)線粒體cox3、nad4和cytb基因多態(tài)性研究42-48
• 5.1 材料與方法42-43
• 5.1.1 材料42-43
• 5.1.1.1 蟲(chóng)種42
• 5.1.1.2 主要試劑、溶液和儀器42-43
• 5.1.2 方法43
• 5.1.2.1 樣品處理、鑒定及DNA提取43
• 5.1.2.2 樣品cox3、nad4和cytb基因的擴(kuò)增43
• 5.1.2.3 序列分析及系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)重構(gòu)43
• 5.2 結(jié)果43-46
• 5.2.1 克氏偽裸頭絳蟲(chóng)cox3、nad4和cytb基因PCR擴(kuò)增結(jié)果43-45
• 5.2.2 測(cè)序結(jié)果及序列分析45
• 5.2.3 種群系統(tǒng)進(jìn)化分析45-46
• 5.3 討論46-47
• 5.4 小結(jié)47-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-54
• 附錄54-59
• 附錄1 克氏偽裸頭絳蟲(chóng)ITS序列54-55
• 1.1 克氏偽裸頭絳蟲(chóng)ITS1序列54
• 1.2 克氏偽裸頭絳蟲(chóng) 5.8 S序列54
• 1.3 克氏偽裸頭絳蟲(chóng)ITS2序列54-55
• 附錄2 克氏偽裸頭絳蟲(chóng)線粒體基因組序列55-59
• 2.1 克氏偽裸頭絳蟲(chóng)線粒體基因組序列55-59
• 致謝59-60
• 作者簡(jiǎn)介60

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 宋海騰;柯婷雅;林遠(yuǎn)清;歐海濤;謝燕波;李明;陳麗萍;;犬埃立克氏體病的診療[J];中國(guó)工作犬業(yè);2009年11期

2 江紹琳;江紹玫;曾令聰;史小玲;簡(jiǎn)敏菲;;污染水域克氏鰲蝦體內(nèi)重金屬選擇性富集研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2006年24期

3 唐然;袁夢(mèng)龍;吳菁;陳明;張維;林敏;;一株耐輻射考克氏菌的分離與鑒定[J];核農(nóng)學(xué)報(bào);2010年02期

4 何鑒星,姜茹琴,張欣雪,李增書(shū),趙國(guó)忠;比克氏棉漸滲到陸地棉的花色基因的遺傳分析[J];遺傳學(xué)報(bào);2000年04期

5 魏桂蘭,許成棟,趙松華,張瑩,陳瑛;對(duì)貴州發(fā)酵米粉與新玉米中椰毒伯克氏菌的調(diào)查[J];山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報(bào);2001年01期

6 胡傳炯,周啟,周平貞;馬桑弗蘭克氏菌的生物學(xué)特性的多樣性[J];土壤;1998年03期

7 鄭婷;;弗蘭克氏菌在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用[J];畜牧與飼料科學(xué);2010年02期

8 曾王勇,柏學(xué)亮,馬慶生;弗蘭克氏菌轉(zhuǎn)化研究初報(bào)[J];西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);1992年02期

9 翁順太,郭維植,蔡武衛(wèi),王伙聰,鄭立鋒,陳勤;一起由克氏葡萄球菌引起豚鼠感染病例[J];中國(guó)人獸共患病雜志;2005年10期

10 趙振英;黃家彬;劉惠昌;朱寶琴;楊惠凡;;不同非豆科樹(shù)木科屬來(lái)源的弗蘭克氏菌的比較研究[J];微生物學(xué)報(bào);1988年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 葉盛;陳賢斌;朱丹化;李則群;吳哲褒;諸葛啟釧;;拉克氏裂囊腫的診斷和治療[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)分會(huì)第九次學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 劉瓊;在書(shū)中輕叩心靈的柴扉[N];中華讀書(shū)報(bào);2005年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 王會(huì)寶;克氏偽裸頭絳蟲(chóng)的鑒定及其遺傳變異研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

2 王娜媛;弗蘭克氏菌與紅榿木共生體系的研究[D];南京林業(yè)大學(xué);2011年

3 鐘鳴;伯克氏菌E264連續(xù)吸附耦合發(fā)酵生產(chǎn)Thailandepsin A的研究[D];上海交通大學(xué);2011年

4 呂梅;兩種榿木的繁殖和弗蘭克氏菌的分離培養(yǎng)與回接研究[D];南京林業(yè)大學(xué);2005年

5 李娟娟;玫瑰考克氏菌（Kocuria rosea）KDF3及其胞外蛋白酶KRP3在腐乳中的應(yīng)用研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：克氏偽裸頭絳蟲(chóng)的鑒定及其遺傳變異研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：348378