本文關鍵詞：綿羊妊娠早期骨髓表達ISG15研究和PIBF的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：免疫器官由中樞免疫器官和周圍免疫器官兩部分組成,其中中樞免疫器官包括骨髓和胸腺。骨髓是T淋巴細胞的出生地,骨髓的重要功能就是生成各種細胞的干細胞,這些干細胞通過分化再生成各種血細胞如紅細胞、白細胞、血小板等,因此,骨髓不但是造血器官,對于維持機體的生命和免疫力也非常重要。為探索綿羊妊娠早期對中樞免疫器官骨髓的影響,本試驗以繁殖機能正常的綿羊為試驗動物,研究妊娠早期綿羊骨髓表達ISG15和PIBF因子的的變化規(guī)律。首先對綿羊埋植孕激素海綿栓,進行同期發(fā)情處理,進而試情并配種(對照組不配種)。然后采集發(fā)情后第16天未配種的,以及配種后第13、16和25天妊娠的綿羊骨髓(通過屠宰解剖,確定配種后第13、16和25天妊娠的綿羊,即看到孕體的存在)。將不同妊娠天數(shù)的骨髓分別置于2mL冷凍管中保存在-196℃液氮中,帶回實驗室檢測mRNA的表達和蛋白印跡分析。另外采集不同妊娠天數(shù)的綿羊骨髓,用PBS液沖洗后將骨髓塊放入4%多聚甲醛的PBS溶液中固定,用于免疫組織化學檢測。得到了如下結果:1、利用實時熒光定量PCR法檢測和蛋白印跡分析發(fā)現(xiàn),妊娠早期綿羊骨髓中的ISG15 mRNA和蛋白的表達量從未妊娠到妊娠期逐漸升高,ISG15 mRNA和蛋白在妊娠16天羊骨髓中的表達量高于未妊娠16天,妊娠13天和妊娠25天。而且在妊娠16天表達量達最高。然后,到妊娠25天表達量則會逐漸降低。通過免疫組織化學檢測確認,ISG15蛋白在妊娠16天羊骨髓中的染色強度高于未妊娠16天,妊娠13天和妊娠25天,而且主要在骨髓間質的細胞質表達。總之,綿羊妊娠早期ISG15 mRNA和蛋白表達量的增加與孕體來源的干擾素tau有關。2、mRNA和蛋白水平進行了PIBF因子表達的檢測,證明在妊娠16天羊骨髓中mRNA的表達量高于未妊娠16天,妊娠13天和妊娠25天。而且在妊娠16天表達量達最高。然而,到妊娠25天mRNA表達量則會逐漸降低,蛋白水平的表達與mRNA水平的表達基本一致,在妊娠13天、妊娠16天和妊娠25天羊骨髓中的表達,在未妊娠16天的骨髓中不表達。妊娠16天和25天骨髓PIBF蛋白的表達量顯著高于妊娠13天,妊娠16天和妊娠25天的骨髓中PIBF蛋白的表達明顯,基本沒有差異�？傊�,在綿羊妊娠早期,孕體來源的干擾素tau通過血液循環(huán),作用于骨髓,使骨髓間質的細胞上調表達ISG15 mRNA和蛋白;同時結果表明,妊娠早期PIBF也上調表達,可能是干擾素tau通過血液循環(huán)抑制黃體的退化,使黃體持續(xù)產生孕酮,從而誘導PIBF蛋白上調表達,調節(jié)骨髓的免疫功能,使綿羊胚胎免受母體免疫系統(tǒng)的排除,有利于妊娠的繼續(xù)。
【關鍵詞】：妊娠 骨髓 干擾素刺激基因15 KDa蛋白 孕酮誘導阻斷因子
【學位授予單位】：河北工程大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S826
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-12
• 英文縮略表12-13
• 第一章 文獻綜述13-23
• 1.1 引言13-14
• 1.2 妊娠早期的胚胎識別14-20
• 1.2.1 胚胎妊娠識別14-15
• 1.2.2 妊娠識別的分子調控機制15
• 1.2.3 反芻動物妊娠識別信號--IFN-τ15
• 1.2.4 反芻動物IFN-τ 的產生15-17
• 1.2.5 IFN-τ 的子宮內作用17-19
• 1.2.6 IFN-τ 的子宮外作用19
• 1.2.7 IFN-τ 誘導產生ISG1519-20
• 1.2.8 IFN-τ 的抗黃體溶解機制20
• 1.3 免疫耐受機制的研究進展20-22
• 1.3.1 孕酮在早期妊娠對機體的免疫耐受作用20-21
• 1.3.2 孕酮誘導阻斷因子介導的妊娠免疫耐受作用21
• 1.3.3 PIBF通過干擾素信號通路參與子宮內的免疫調節(jié)21
• 1.3.4 孕酮介導其它調節(jié)基因參與免疫21-22
• 1.4 本研究的技術路線和目的、意義22-23
• 1.4.1 本研究技術路線22
• 1.4.2 研究目的與意義22-23
• 第二章 ISG15在綿羊骨髓中的表達23-40
• 2.1 試驗材料與方法23-24
• 2.1.1 試驗動物23
• 2.1.2 主要儀器和設備23
• 2.1.3 主要試劑和耗材23-24
• 2.2 試驗方法24-25
• 2.3 樣品采集與處理25-26
• 2.4 實時熒光定量PCR檢測基因相對表達水平26-28
• 2.4.1 實時熒光定量PCR的引物序列26-27
• 2.4.2 總RNA的提取和RNA濃度及純度檢測27
• 2.4.3 cDNA的合成27-28
• 2.4.4 實時熒光定量PCR28
• 2.4.5 PCR產物凝膠電泳28
• 2.5 免疫組織化學染色28-30
• 2.5.1 免疫組織化學染色溶液配制：28-29
• 2.5.2 免疫組織化學染色方法29-30
• 2.6 蛋白免疫印跡分析30-34
• 2.6.1 Western-Blot所用溶液配制30-32
• 2.6.2 ISG15一抗的制備32-33
• 2.6.3 提取骨髓總蛋白33
• 2.6.4 蛋白定量33
• 2.6.5 SDS-PAGE電泳33-34
• 2.7 數(shù)據(jù)分析34
• 2.8 結果與分析34-38
• 2.8.1 總RNA提取與PCR擴增電泳34-35
• 2.8.2 實時熒光定量PCR目的片段擴增產物鑒定35
• 2.8.3 實時熒光定量PCR結果35-36
• 2.8.4 免疫組織化學結果36-37
• 2.8.5 蛋白免疫印跡分析結果37-38
• 2.9 討論38-40
• 第三章 PIBF在綿羊骨髓中的表達40-46
• 3.1 試驗材料與方法40
• 3.1.1 試驗動物40
• 3.1.2 主要儀器和設備40
• 3.1.3 主要試劑和藥品40
• 3.2 試驗方法與步驟40
• 3.3 樣品采集與處理40
• 3.4 實時熒光定量PCR檢測基因相對表達水平40-41
• 3.4.1 實時熒光定量PCR的引物序列40-41
• 3.4.2 總RNA的提取和RNA濃度及純度檢測41
• 3.4.3 cDNA的合成41
• 3.4.4 實時熒光定量PCR41
• 3.4.5 PCR產物凝膠電泳41
• 3.5 蛋白免疫印跡分析41-42
• 3.5.1 Western-Blot所用溶液配制：41
• 3.5.2 Trizol法提取骨髓總蛋白41
• 3.5.3 蛋白定量（BCA）41-42
• 3.5.4 SDS-PAGE電泳42
• 3.6 數(shù)據(jù)分析42
• 3.7 結果與分析42-44
• 3.7.1 總RNA提取與PCR擴增電泳42
• 3.7.2 實時熒光定量PCR目的片段擴增產物鑒定42
• 3.7.3 實時熒光定量PCR結果42-43
• 3.7.4 蛋白免疫印跡分析結果43-44
• 3.8 討論44-46
• 第四章 全文總結46-47
• 4.1 本研究的主要結論和創(chuàng)新46
• 4.2 下一步研究計劃46-47
• 致謝47-48
• 參考文獻48-55
• 作者簡介55
• 攻讀碩士學位期間的成果55-56

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 姚佳;孕酮與干擾素-τ對體外培養(yǎng)的牛子宮內膜細胞基因組表達譜的影響[D];四川農業(yè)大學;2011年

  本文關鍵詞：綿羊妊娠早期骨髓表達ISG15研究和PIBF的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：298549