本文關鍵詞：一株莫拉氏菌新種的分離鑒定與特性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：莫拉氏菌(moraxella),是一種革蘭氏陰性菌,有抗褪色傾向,歸屬于莫拉氏菌科。該菌多寄生于人或其它溫血動物的黏膜上,是一種機會性致病菌。莫拉氏菌通常為桿狀或球桿狀。桿菌短而飽滿,接近球形,球形菌通常較小,單個或成對存在。該菌在有氧環(huán)境下生長良好,在缺氧環(huán)境下可微弱生長。菌落不產(chǎn)生色素,通常氧化酶和觸酶陽性。不產(chǎn)酸以及碳水化合物。對青霉素敏感。DNA的G+Cmol%為40.0-47.5。本研究從四川綿陽地區(qū)鴨場分離到一株革蘭氏陰性球菌。該菌伴隨鴨疫里默氏菌被分離。并在此基礎上對其形態(tài)學、培養(yǎng)特性、生長特性、生化特性等進行了考察。其16S rRNA基因序列與莫拉氏菌屬細菌同源性最高可達到97%。初步鑒定為莫拉氏菌屬的一個新種。該分離株在顯微鏡下可見短桿狀,雙球或短鏈狀排列。多數(shù)成對排列,亦有單個排列。在巧克力平板上形成圓形、淡黃色、邊緣整齊、表面光滑、不透明、濕潤、黏稠、扁平、大小均一的菌落。在麥康凱培養(yǎng)基上不生長。API20NE生化實驗表明該菌株不水解明膠尿素和七葉苷。不同化葡萄糖、檸檬酸、苯乙酸、阿拉伯糖、甘露糖、甘露醇、N-乙酰-葡萄糖胺、麥芽糖、葡萄酸鹽、癸酸、己二酸。硝酸鹽還原呈陰性。非發(fā)酵菌實驗表明該菌株與精氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、枸櫞酸鹽、尿素、七葉苷、木糖、氧化酶等反應呈陽性。與硫化氫、葡萄糖、ONPG、蔗糖、麥芽糖、硝酸鹽還原、蛋白胨水的反應呈陰性。對該菌株進行了全基因組序列的測定,經(jīng)序列拼接,得到一條完整的基因組序列,該基因組長度為549960 bp, G+C含量為45.87%�；�16S rRNA系統(tǒng)進化樹的構建。結果表明該分離株處于莫拉氏菌屬的進化分支內,與兔莫拉氏菌、多動物莫拉氏菌同源性較高。最后為測定該菌株與莫拉氏菌屬種內的其它細菌的親緣關系,本研究以該菌株的全基因組序列為研究對象,進行了平均核苷酸同源性分析。結果發(fā)現(xiàn)該菌株的全基因組與莫拉氏菌屬種內細菌的全基因組對比得到ANIb值的范圍為69.23%～74.21%, ANIm值的范圍為84.02%-87.16%。該菌株的甲基萘醌組分為MK-7 (92%)、MK-6 (5%)和MK-8(2%)。菌株極性脂為diphosphatidyl(DPG)、phosphatidyl ethanolamine(PE)、glycolipid(GL)、 unidentified phospholipids(UPL)和undentified aminophospholipids(UAPL)�；谝陨线@些多相性分析結果,建議將該菌株界定為莫拉氏菌屬的一個新種,并命名為Moraxellaanas.sp.nov (RCAD00137)。為了解該分離菌株是否對鴨有致病性,本研究進行了雛鴨攻毒實驗,結果表明該菌對健康雛鴨不致死。小鼠攻毒試驗表明該菌對小鼠不致死。此外,鴨胚感染實驗結果發(fā)現(xiàn)該菌株對鴨胚不致死。采用K-B藥敏紙片擴散法進行藥敏試驗,結果表明該分離菌株對青霉素G、氨芐西林、慶大霉素、氟苯尼考、萘啶酸、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、克林霉素、紅霉素螺旋霉素、阿奇霉素、新諾明、復方新諾明、氯霉素、利福平等抗生素耐藥。對亞胺培南、美羅培南、頭孢他啶等抗生素敏感。該菌株表現(xiàn)出多重耐藥的現(xiàn)象。運用14種抗生素進行最小抑菌濃度的測定,結果菌株對喹諾酮類藥物的最小抑菌濃度均在512μg/ml以上,表現(xiàn)出高度耐藥。對臨床上常用的林可霉類中的林可霉素、克林霉素以及大環(huán)內脂類的阿奇霉素和氨曲南、磺胺甲基異惡唑的最小抑菌濃度值均在512μg/ml以上,同樣表現(xiàn)出了高度耐藥。而對氯霉素(8μg/ml)、羧芐西林(16μg/ml)、萬古霉素(1μg/ml)則表現(xiàn)低水平的耐藥。
【關鍵詞】：鴨莫拉氏菌新種 分離鑒定 生化試驗 16SrRNA 平均核苷酸同源性
【學位授予單位】：四川農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S852.61
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 縮略詞表8-11
• 1 文獻綜述11-19
• 1.1 莫拉氏菌病原學12-16
• 1.2 細菌新種的分離鑒定16-17
• 1.3 平均核苷酸同源性(ANI)17-19
• 1.4 研究的目的及意義19
• 2 實驗材料和方法19-27
• 2.1 實驗材料19-20
• 2.2 實驗方法20-26
• 2.3 動物感染實驗26
• 2.4 鴨胚感染實驗26-27
• 2.5 基于全基因組的平均核苷酸同源性分析27
• 3 實驗結果27-44
• 3.1 16S rDNA基因擴增27-28
• 3.2 16S rRNA基因擴增28-29
• 3.3 選擇性培養(yǎng)結果29-30
• 3.4 形態(tài)學檢查30-32
• 3.4.1 革蘭氏染色30-31
• 3.4.2 黑斯莢膜染色31-32
• 3.5 生化試驗32-33
• 3.5.1 API 20 NE鑒定結果32-33
• 3.5.2 非發(fā)酵菌生化鑒定管試驗33
• 3.6 藥物敏感性的測定33-35
• 3.7 最小抑菌濃度的測定35-36
• 3.8 醌組分及極性脂的測定36-37
• 3.9 全基因組的提取及測序37-44
• 3.9.1 基于16S rRNA基因序列分析及系統(tǒng)發(fā)育樹的構建38-41
• 3.9.2 生長曲線的測定41-43
• 3.9.3 動物感染試驗43
• 3.9.4 鴨胚感染試驗43
• 3.9.5 平均核苷酸同源性分析43-44
• 4 討論44-53
• 4.1 RCAD00137菌株的鑒定44
• 4.2 RCAD00137菌株的特性44-48
• 4.3 RCAD00137菌株藥物敏感性測定48-50
• 4.4 RCAD00137菌株醌組分測定以及極性脂測定50
• 4.5 RCAD00137菌株的致病性50-51
• 4.6 基于全基因組RCAD00137菌株平均核苷酸同源性分析51-53
• 5 結論53-54
• 6 參考文獻54-62
• 致謝62

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本文編號：298446