本文關(guān)鍵詞：LPS誘導(dǎo)雞幾個炎癥反應(yīng)相關(guān)基因的表達調(diào)控研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：雞大腸桿菌病是影響禽業(yè)生產(chǎn)的主要疾病之一,能夠引起不同品系、不同日齡雞多種組織臟器發(fā)生炎癥反應(yīng),給養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大經(jīng)濟損失。本研究以大腸桿菌脂多糖(LPS)作用于海蘭褐雛雞、AA+肉雛雞以及成年產(chǎn)蛋母雞,分析炎癥反應(yīng)相關(guān)基因akirin2、PPARγ、NYGGF4以及mi RNA的表達特性,為深入理解炎癥反應(yīng)分子機制和分子診斷標記物候選基因的篩選提供理論參考。主要研究方法和實驗結(jié)果如下:為深入研究雛雞炎癥反應(yīng)中相關(guān)基因的表達特性和調(diào)控關(guān)系,本實驗分別以AA+肉仔雞和海蘭褐蛋雛雞為研究對象,采用LPS腹腔接種雛雞,72h后收集血液、肝臟、胸腺、法氏囊和脾臟等組織,利用RT-PCR定量分析炎癥相關(guān)基因akirin2、PPARγ和幾種mi RNA的轉(zhuǎn)錄活性變化。結(jié)果表明:在LPS接種的肉仔雞中,akirin2和PPARγ基因在肝臟和法氏囊中均顯著下調(diào)(P0.01);在LPS接種的海蘭褐雛雞中,akirin2基因在胸腺中表達顯著上調(diào)(P0.01),而PPARγ基因在各組織中表達均差異不顯著;此外,mi R-146a(P0.05)、mi R-21(P0.01)和mi R-155(P0.01)在LPS接種的2個品系雛雞肝臟中表達均顯著下調(diào)。雛雞接種LPS后,在紅細胞中,海蘭褐雛雞的mi R-155、mi R-146a、mi R-181a和mi R-21的表達活性均降低,而AA+肉雞卻呈現(xiàn)相反的表達趨勢。在白細胞中,mi R-155和mi R-21表達均上調(diào),其中,mi R-146a和mi R-181a在海蘭褐雞中均顯著下調(diào)(P0.05),但在AA+肉雞中均顯著上調(diào)(P0.05)。在血漿中,2個品系雛雞的mi R-146a和mi R-181a表達活性均顯著下調(diào)(P0.05)。為深入研究雞NYGGF4基因的功能,首先對四個品系雞的NYGGF4基因進行生物信息學(xué)分析,然后分析該基因的組織表達特性,最后驗證該基因是否與炎癥反應(yīng)相關(guān)。實驗結(jié)果表明:在四個品系雞NYGGF4基因編碼區(qū)內(nèi)存在8個SNP位點。14日齡海蘭褐雛雞NYGGF4基因在腦中的表達量最高,而在AA+肉雞的肺和脂肪組織中表達量最高,在其他組織中兩個品系雞都具有相似的表達特性。在炎癥反應(yīng)中,NYGGF4基因在海蘭褐雞和AA+肉雞的肝臟和法氏囊中的表達活性表現(xiàn)出相反的變化。為深入研究成雞輸卵管炎的分子機制,本研究利用LPS制備海蘭褐成年母雞泄殖腔上行性感染急性炎癥反應(yīng)模型,并定量分析炎性組織相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄活性變化。實驗結(jié)果表明:正常母雞akirin2基因在輸卵管各區(qū)段均高表達,而PPARγ基因僅在陰道和卵巢組織中具有較高表達活性。炎癥反應(yīng)中,akirin2基因在子宮、直腸和盲腸扁桃體中轉(zhuǎn)錄活性均顯著上調(diào),PPARγ基因僅在子宮中轉(zhuǎn)錄活性顯著上調(diào)(P0.01),而在直腸(P0.01)和盲腸扁桃體中轉(zhuǎn)錄活性下調(diào)。本研究表明,akirin2、PPARγ和NYGGF4基因是影響炎癥反應(yīng)的重要調(diào)控基因,研究這些基因在炎癥反應(yīng)中的表達與調(diào)控關(guān)系,對于深入理解炎癥反應(yīng)分子機制具有重要的理論意義。此外,某些mi RNAs在炎癥反應(yīng)中的體液循環(huán)中變化顯著,可能成為炎癥診斷分子標記物的重要靶基因之一。
【關(guān)鍵詞】：雞 炎癥反應(yīng) akirin2 PPARγ mi RNA NYGGF4
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S858.31
【目錄】：

• 摘要9-11
• Abstract11-13
• 第1章 緒論13-25
• 1.1 細菌脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）13-14
• 1.1.1 LPS與炎癥反應(yīng)13-14
• 1.1.2 LPS與禽業(yè)生產(chǎn)14
• 1.2 Akirin2基因的研究進展14-15
• 1.2.1 Akirin基因簡介14
• 1.2.2 Akirin2基因在免疫與炎癥中的作用14-15
• 1.3 PPARγ 基因研究進展15-16
• 1.3.1 PPARγ 基因簡介15-16
• 1.3.2 PPARγ 基因在炎癥反應(yīng)中的作用16
• 1.4 NYGGF4基因研究進展16-17
• 1.4.1 NYGGF4基因的發(fā)現(xiàn)及命名16-17
• 1.4.2 NYGGF4基因的表達特性及功能17
• 1.5 microRNA的研究進展17-23
• 1.5.1 microRNA簡介17-18
• 1.5.2 miRNA的生物學(xué)功能18
• 1.5.3 miRNA與免疫18
• 1.5.4 miR-155研究進展18-19
• 1.5.5 miR-146a研究進展19-21
• 1.5.6 miR-21研究進展21-22
• 1.5.7 miR-181a研究進展22-23
• 1.6 研究的目的和意義23-25
• 第2章 LPS誘導(dǎo)不同品系雛雞炎癥反應(yīng)相關(guān)基因的表達調(diào)控研究25-38
• 2.1 實驗材料25-27
• 2.1.1 實驗動物25
• 2.1.2 大腸桿菌LPS25
• 2.1.3 引物25-26
• 2.1.4 試劑26
• 2.1.5 主要儀器設(shè)備26-27
• 2.2 試驗方法27-30
• 2.2.1 雛雞免疫27
• 2.2.2 總RNA的提取27
• 2.2.3 cDNA的合成27-28
• 2.2.4 PCR擴增目的基因28-30
• 2.2.5 PCR產(chǎn)物電泳30
• 2.2.6 統(tǒng)計分析30
• 2.3 實驗結(jié)果30-35
• 2.3.1 臨床癥狀30-31
• 2.3.2 總RNA提取結(jié)果31
• 2.3.3 LPS誘導(dǎo)不同品系雛雞akirin2和PPARγ 基因的表達分析31-35
• 2.4 討論35-37
• 2.5 本章小結(jié)37-38
• 第3章 LPS誘導(dǎo)不同品系雛雞血液相關(guān)miRNA的表達調(diào)控研究38-48
• 3.1 實驗材料38
• 3.1.1 實驗動物38
• 3.1.2 引物38
• 3.2 實驗方法38-41
• 3.2.1 雞血分離38-39
• 3.2.2 白細胞分類計數(shù)測定39
• 3.2.3 總RNA的提取39
• 3.2.4 RT-PCR39-41
• 3.2.5 PCR產(chǎn)物電泳41
• 3.2.6 統(tǒng)計分析41
• 3.3 實驗結(jié)果41-45
• 3.3.1 血細胞計數(shù)分析41
• 3.3.2 LPS誘導(dǎo)相關(guān)miRNA的表達分析41-45
• 3.4 討論45-47
• 3.4.1 LPS誘導(dǎo)不同品系雛雞紅細胞中miRNA的表達活性分析45-46
• 3.4.2 LPS誘導(dǎo)不同品系雛雞白細胞中miRNA的表達活性分析46
• 3.4.3 LPS誘導(dǎo)不同品系雛雞血漿中miRNA的表達活性分析46-47
• 3.5 本章小結(jié)47-48
• 第4章 不同品系雞NYGGF4基因克隆與表達分析48-67
• 4.1 實驗材料48-49
• 4.1.1 實驗動物48
• 4.1.2 質(zhì)粒與菌種48
• 4.1.3 酶和生化試劑48-49
• 4.1.4 引物49
• 4.2 實驗方法49-53
• 4.2.1 T-A克隆49-52
• 4.2.2 生物信息學(xué)分析52-53
• 4.2.3 半定量RT-PCR組織表達譜分析53
• 4.2.4 炎癥和免疫反應(yīng)模型的組織表達譜分析53
• 4.3 實驗結(jié)果53-64
• 4.3.1 AA+肉仔雞和三黃雞NYGGF4基因的克隆53-57
• 4.3.2 生物信息學(xué)分析57-61
• 4.3.3 不同品系雞NYGGF4基因表達譜分析61-63
• 4.3.4 炎癥反應(yīng)模型中各組織NYGGF4基因的轉(zhuǎn)錄活性分析63-64
• 4.4 討論64-66
• 4.4.1 不同品系雞NYGGF4基因編碼序列的比較64-65
• 4.4.2 不同品系雞NYGGF4二級結(jié)構(gòu)預(yù)測及差異比較65
• 4.4.3 不同品系雞NYGGF4基因組織表達譜分析65-66
• 4.4.4 LPS炎癥模型中NYGGF4基因的表達分析66
• 4.5 本章小結(jié)66-67
• 第5章 雞輸卵管與大腸炎癥反應(yīng)相關(guān)基因的表達調(diào)控分析67-78
• 5.1 實驗材料67-68
• 5.1.1 實驗動物67
• 5.1.2 引物67-68
• 5.1.3 酶和生化制劑68
• 5.2 實驗方法68-70
• 5.2.1 實驗分組與樣品采集68
• 5.2.2 總RNA的提取68
• 5.2.3 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成cDNA68-69
• 5.2.4 PCR擴增目的基因69-70
• 5.2.5 PCR產(chǎn)物電泳70
• 5.2.6 統(tǒng)計分析70
• 5.3 實驗結(jié)果70-74
• 5.3.1 臨床癥狀與病理變化70-71
• 5.3.2 總RNA提取結(jié)果71-72
• 5.3.3 母雞卵巢和輸卵管各部分組織akirin2和PPARγ 基因的轉(zhuǎn)錄活性分析72-73
• 5.3.4 炎癥反應(yīng)模型中各組織akirin2和PPARγ 的轉(zhuǎn)錄活性分析73-74
• 5.3.5 Akirin2下游靶基因的轉(zhuǎn)錄活性分析74
• 5.4 討論74-77
• 5.4.1 母雞卵巢和輸卵管各部分組織akirin2和PPARγ 基因的轉(zhuǎn)錄活性分析75
• 5.4.2 炎癥反應(yīng)模型中各組織akirin2和PPARγ 的轉(zhuǎn)錄活性分析75-76
• 5.4.3 Akirin2下游靶基因的轉(zhuǎn)錄活性分析76-77
• 5.5 本章小結(jié)77-78
• 結(jié)論78-79
• 參考文獻79-93
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文93-95
• 致謝95

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本文編號：298143