發(fā)布時間：2017-04-11 03:04

  本文關鍵詞：LPS誘導雞幾個炎癥反應相關基因的表達調控研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：雞大腸桿菌病是影響禽業(yè)生產的主要疾病之一,能夠引起不同品系、不同日齡雞多種組織臟器發(fā)生炎癥反應,給養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大經濟損失。本研究以大腸桿菌脂多糖(LPS)作用于海蘭褐雛雞、AA+肉雛雞以及成年產蛋母雞,分析炎癥反應相關基因akirin2、PPARγ、NYGGF4以及mi RNA的表達特性,為深入理解炎癥反應分子機制和分子診斷標記物候選基因的篩選提供理論參考。主要研究方法和實驗結果如下:為深入研究雛雞炎癥反應中相關基因的表達特性和調控關系,本實驗分別以AA+肉仔雞和海蘭褐蛋雛雞為研究對象,采用LPS腹腔接種雛雞,72h后收集血液、肝臟、胸腺、法氏囊和脾臟等組織,利用RT-PCR定量分析炎癥相關基因akirin2、PPARγ和幾種mi RNA的轉錄活性變化。結果表明:在LPS接種的肉仔雞中,akirin2和PPARγ基因在肝臟和法氏囊中均顯著下調(P0.01);在LPS接種的海蘭褐雛雞中,akirin2基因在胸腺中表達顯著上調(P0.01),而PPARγ基因在各組織中表達均差異不顯著;此外,mi R-146a(P0.05)、mi R-21(P0.01)和mi R-155(P0.01)在LPS接種的2個品系雛雞肝臟中表達均顯著下調。雛雞接種LPS后,在紅細胞中,海蘭褐雛雞的mi R-155、mi R-146a、mi R-181a和mi R-21的表達活性均降低,而AA+肉雞卻呈現相反的表達趨勢。在白細胞中,mi R-155和mi R-21表達均上調,其中,mi R-146a和mi R-181a在海蘭褐雞中均顯著下調(P0.05),但在AA+肉雞中均顯著上調(P0.05)。在血漿中,2個品系雛雞的mi R-146a和mi R-181a表達活性均顯著下調(P0.05)。為深入研究雞NYGGF4基因的功能,首先對四個品系雞的NYGGF4基因進行生物信息學分析,然后分析該基因的組織表達特性,最后驗證該基因是否與炎癥反應相關。實驗結果表明:在四個品系雞NYGGF4基因編碼區(qū)內存在8個SNP位點。14日齡海蘭褐雛雞NYGGF4基因在腦中的表達量最高,而在AA+肉雞的肺和脂肪組織中表達量最高,在其他組織中兩個品系雞都具有相似的表達特性。在炎癥反應中,NYGGF4基因在海蘭褐雞和AA+肉雞的肝臟和法氏囊中的表達活性表現出相反的變化。為深入研究成雞輸卵管炎的分子機制,本研究利用LPS制備海蘭褐成年母雞泄殖腔上行性感染急性炎癥反應模型,并定量分析炎性組織相關基因的轉錄活性變化。實驗結果表明:正常母雞akirin2基因在輸卵管各區(qū)段均高表達,而PPARγ基因僅在陰道和卵巢組織中具有較高表達活性。炎癥反應中,akirin2基因在子宮、直腸和盲腸扁桃體中轉錄活性均顯著上調,PPARγ基因僅在子宮中轉錄活性顯著上調(P0.01),而在直腸(P0.01)和盲腸扁桃體中轉錄活性下調。本研究表明,akirin2、PPARγ和NYGGF4基因是影響炎癥反應的重要調控基因,研究這些基因在炎癥反應中的表達與調控關系,對于深入理解炎癥反應分子機制具有重要的理論意義。此外,某些mi RNAs在炎癥反應中的體液循環(huán)中變化顯著,可能成為炎癥診斷分子標記物的重要靶基因之一。
【關鍵詞】：雞 炎癥反應 akirin2 PPARγ mi RNA NYGGF4
【學位授予單位】：哈爾濱師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S858.31
【目錄】：

• 摘要9-11
• Abstract11-13
• 第1章 緒論13-25
• 1.1 細菌脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）13-14
• 1.1.1 LPS與炎癥反應13-14
• 1.1.2 LPS與禽業(yè)生產14
• 1.2 Akirin2基因的研究進展14-15
• 1.2.1 Akirin基因簡介14
• 1.2.2 Akirin2基因在免疫與炎癥中的作用14-15
• 1.3 PPARγ 基因研究進展15-16
• 1.3.1 PPARγ 基因簡介15-16
• 1.3.2 PPARγ 基因在炎癥反應中的作用16
• 1.4 NYGGF4基因研究進展16-17
• 1.4.1 NYGGF4基因的發(fā)現及命名16-17
• 1.4.2 NYGGF4基因的表達特性及功能17
• 1.5 microRNA的研究進展17-23
• 1.5.1 microRNA簡介17-18
• 1.5.2 miRNA的生物學功能18
• 1.5.3 miRNA與免疫18
• 1.5.4 miR-155研究進展18-19
• 1.5.5 miR-146a研究進展19-21
• 1.5.6 miR-21研究進展21-22
• 1.5.7 miR-181a研究進展22-23
• 1.6 研究的目的和意義23-25
• 第2章 LPS誘導不同品系雛雞炎癥反應相關基因的表達調控研究25-38
• 2.1 實驗材料25-27
• 2.1.1 實驗動物25
• 2.1.2 大腸桿菌LPS25
• 2.1.3 引物25-26
• 2.1.4 試劑26
• 2.1.5 主要儀器設備26-27
• 2.2 試驗方法27-30
• 2.2.1 雛雞免疫27
• 2.2.2 總RNA的提取27
• 2.2.3 cDNA的合成27-28
• 2.2.4 PCR擴增目的基因28-30
• 2.2.5 PCR產物電泳30
• 2.2.6 統(tǒng)計分析30
• 2.3 實驗結果30-35
• 2.3.1 臨床癥狀30-31
• 2.3.2 總RNA提取結果31
• 2.3.3 LPS誘導不同品系雛雞akirin2和PPARγ 基因的表達分析31-35
• 2.4 討論35-37
• 2.5 本章小結37-38
• 第3章 LPS誘導不同品系雛雞血液相關miRNA的表達調控研究38-48
• 3.1 實驗材料38
• 3.1.1 實驗動物38
• 3.1.2 引物38
• 3.2 實驗方法38-41
• 3.2.1 雞血分離38-39
• 3.2.2 白細胞分類計數測定39
• 3.2.3 總RNA的提取39
• 3.2.4 RT-PCR39-41
• 3.2.5 PCR產物電泳41
• 3.2.6 統(tǒng)計分析41
• 3.3 實驗結果41-45
• 3.3.1 血細胞計數分析41
• 3.3.2 LPS誘導相關miRNA的表達分析41-45
• 3.4 討論45-47
• 3.4.1 LPS誘導不同品系雛雞紅細胞中miRNA的表達活性分析45-46
• 3.4.2 LPS誘導不同品系雛雞白細胞中miRNA的表達活性分析46
• 3.4.3 LPS誘導不同品系雛雞血漿中miRNA的表達活性分析46-47
• 3.5 本章小結47-48
• 第4章 不同品系雞NYGGF4基因克隆與表達分析48-67
• 4.1 實驗材料48-49
• 4.1.1 實驗動物48
• 4.1.2 質粒與菌種48
• 4.1.3 酶和生化試劑48-49
• 4.1.4 引物49
• 4.2 實驗方法49-53
• 4.2.1 T-A克隆49-52
• 4.2.2 生物信息學分析52-53
• 4.2.3 半定量RT-PCR組織表達譜分析53
• 4.2.4 炎癥和免疫反應模型的組織表達譜分析53
• 4.3 實驗結果53-64
• 4.3.1 AA+肉仔雞和三黃雞NYGGF4基因的克隆53-57
• 4.3.2 生物信息學分析57-61
• 4.3.3 不同品系雞NYGGF4基因表達譜分析61-63
• 4.3.4 炎癥反應模型中各組織NYGGF4基因的轉錄活性分析63-64
• 4.4 討論64-66
• 4.4.1 不同品系雞NYGGF4基因編碼序列的比較64-65
• 4.4.2 不同品系雞NYGGF4二級結構預測及差異比較65
• 4.4.3 不同品系雞NYGGF4基因組織表達譜分析65-66
• 4.4.4 LPS炎癥模型中NYGGF4基因的表達分析66
• 4.5 本章小結66-67
• 第5章 雞輸卵管與大腸炎癥反應相關基因的表達調控分析67-78
• 5.1 實驗材料67-68
• 5.1.1 實驗動物67
• 5.1.2 引物67-68
• 5.1.3 酶和生化制劑68
• 5.2 實驗方法68-70
• 5.2.1 實驗分組與樣品采集68
• 5.2.2 總RNA的提取68
• 5.2.3 逆轉錄反應合成cDNA68-69
• 5.2.4 PCR擴增目的基因69-70
• 5.2.5 PCR產物電泳70
• 5.2.6 統(tǒng)計分析70
• 5.3 實驗結果70-74
• 5.3.1 臨床癥狀與病理變化70-71
• 5.3.2 總RNA提取結果71-72
• 5.3.3 母雞卵巢和輸卵管各部分組織akirin2和PPARγ 基因的轉錄活性分析72-73
• 5.3.4 炎癥反應模型中各組織akirin2和PPARγ 的轉錄活性分析73-74
• 5.3.5 Akirin2下游靶基因的轉錄活性分析74
• 5.4 討論74-77
• 5.4.1 母雞卵巢和輸卵管各部分組織akirin2和PPARγ 基因的轉錄活性分析75
• 5.4.2 炎癥反應模型中各組織akirin2和PPARγ 的轉錄活性分析75-76
• 5.4.3 Akirin2下游靶基因的轉錄活性分析76-77
• 5.5 本章小結77-78
• 結論78-79
• 參考文獻79-93
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表學術論文93-95
• 致謝95

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