本文關(guān)鍵詞：5-羥色胺調(diào)控奶牛乳腺上皮細胞（MAC-T）增殖的機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：5-HT被認為是一種重要的泌乳穩(wěn)態(tài)和退化局部調(diào)控因子。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)5-HT通過改變Bax/Bcl-2的值雙向調(diào)控奶牛乳腺上皮細胞(MAC-T)的命運,即短時間5-HT處理,促進MAC-T細胞的增殖,抑制凋亡;而長時間5-HT處理抑制MAC-T細胞的增殖,促進凋亡。但其影響MAC-T細胞增殖的機制尚需進一步明確和確證。5-HT作為乳腺內(nèi)局部產(chǎn)生的活性物質(zhì),其作用與其轉(zhuǎn)運和代謝、受體以及與其他因子的互作有關(guān)。本論文在本實驗室前期研究基礎(chǔ)上,從以上三個方面進一步探尋5-HT調(diào)控細胞增殖的機制。為了驗證5-HT對細胞增殖的調(diào)控是否與轉(zhuǎn)運和代謝過程相關(guān),本研究利用RT-PCR技術(shù)在奶牛乳腺組織中檢測到SERT和5-HT分解酶(Monoamine oxidase,MAO)的表達,但在MAC-T細胞中僅檢測到MAO的表達,未能檢測到SERT的表達。因此,5-HT對MAC-T細胞增殖的調(diào)控與其轉(zhuǎn)運過程無關(guān)。本實驗室前期研究表明MAC-T細胞表達多種亞型的5-HT受體(5-HTR1B,2A,2B,4和7等),并發(fā)現(xiàn)5-HT對MAC-T細胞增殖的促進作用是通過1B、4亞型受體來實現(xiàn)的。本論文對該結(jié)果進行了確證,并對信號通路進行了探索。結(jié)果顯示,單獨5-HT(20μM)處理MAC-T細胞24 h,mTOR蛋白的相對表達量不受影響,但5-HT(20μM)與1B(SB224289)或4亞型(SB204070)受體拮抗劑同時處理MAC-T細胞24 h,mTOR、eEF2和JAK2、STAT5蛋白表達顯著下降,而4EBP1和S6K1蛋白表達變化不明顯。這提示5-HT對MAC-T增殖的誘導(dǎo)作用是通過1B、4亞型受體激活mTOR-eEF2和JAK2-STAT5信號通路來實現(xiàn)的。5-HT在機體中不是單獨起作用,而是與其他因子共同作用。有研究證明催乳素(Prolactin,PRL)可以促進5-HT的分泌,并且研究過程中我們觀察到在正常培養(yǎng)基和在含催乳激素培養(yǎng)基中取得的結(jié)果有一定差異。我們推測,5-HT可能與PRL互作,共同調(diào)控乳腺上皮細胞的功能。因此,本研究對此進行了初步探索,發(fā)現(xiàn)PRL與5-HT共同處理,細胞增殖速度和mTOR的表達水平均顯著高于5-HT或PRL單獨處理組。這表明5-HT與PRL互作,激活mTOR信號通路,促進MAC-T細胞增殖�？傊�,上述結(jié)果提示,(1)5-HT與1B、4亞型受體結(jié)合,激活mTOR-eEF2和/或JAK2-STAT5信號通路,促進MAC-T細胞增殖。(2)5-HT與PRL互作,共同激活mTOR信號通路,促進MAC-T細胞增殖。
【關(guān)鍵詞】：5-HT SERT 5-HTR 乳腺上皮細胞(MAC-T) 增殖 PRL
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S823
【目錄】：

• 英文縮略表5-9
• 中文摘要9-11
• Abstract11-13
• 1 前言13-30
• 1.1 奶牛乳腺發(fā)育及功能研究進展13-17
• 1.1.1 奶牛泌乳周期中乳腺上皮細胞的周期性變化13-14
• 1.1.2 奶牛乳腺上皮細胞增殖凋亡及功能調(diào)控機制研究進展14-17
• 1.2 5-HT對乳腺功能的調(diào)控研究進展17-26
• 1.2.1 5-HT的合成、代謝及失活途徑18-23
• 1.2.2 5-HT受體的研究進展23-25
• 1.2.3 5-HT對乳產(chǎn)量及乳蛋白合成的調(diào)控25-26
• 1.3 調(diào)控奶牛乳腺上皮細胞增殖的信號通路研究26-30
• 1.3.1 mTOR信號通路26-28
• 1.3.2 JAK-STAT信號通路28-30
• 1.4 研究目的及內(nèi)容30
• 2 材料和方法30-47
• 2.1 試驗材料30-32
• 2.1.1 MAC-T細胞與奶牛乳腺組織30
• 2.1.2 主要儀器與試劑30-31
• 2.1.3 主要試劑的配置31-32
• 2.2 試驗方法32-42
• 2.2.1 體外培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細胞系(MAC-T)32-34
• 2.2.2 反轉(zhuǎn)錄、普通PCR和熒光定量PCR34-40
• 2.2.3 Western blot印記分析40-42
• 2.3 奶牛干奶期血清中 5-HT的測定42-44
• 2.4 奶牛乳腺上皮細胞（MAC-T）形態(tài)功能鑒定、MAO、SERT的表達以及五羥色胺受體的表達44
• 2.5 5-HT促進MAC-T細胞增殖的機制研究44-45
• 2.5.1 驗證 5-HT對乳腺上皮細胞增殖的影響44-45
• 2.5.2 5-HT1B、4 亞型受體促進MAC-T細胞增殖的信號通路研究45
• 2.6 5-HT與PRL相互作用對MAC-T細胞增殖的影響及其機制研究45-47
• 2.6.1 5-HT及PRL對乳腺上皮細胞增殖的影響45-47
• 2.6.2 5-HT與PRL相互作用促進MAC-T細胞增殖的機制研究47
• 2.7 統(tǒng)計分析47
• 3 結(jié)果與分析47-64
• 3.1 奶牛乳腺上皮細胞（MAC-T）的鑒定47-49
• 3.1.1 MAC-T細胞形態(tài)學(xué)鑒定47-48
• 3.1.2 MAC-T細胞生長曲線繪制48-49
• 3.1.3 MAC-T細胞骨架蛋白—角蛋白 18 mRNA的檢測49
• 3.2 干奶期奶牛血清中 5-HT濃度測定49-50
• 3.3 5-HT濃度與作用時間對奶牛乳腺上皮細胞MAC-T增殖的影響50-52
• 3.4 5-HT調(diào)控MAC-T細胞增殖的機制研究52-60
• 3.4.1 MAC-T細胞 5-HT轉(zhuǎn)運、代謝相關(guān)基因表達鑒定52-53
• 3.4.2 5-HT受體拮抗劑對MAC-T細胞的影響53-55
• 3.4.3 5-HT通過 1B和4亞型受體調(diào)控細胞增殖的信號機制研究55-60
• 3.5 5-HT與催乳素互作共同調(diào)控MAC-T細胞增殖60-64
• 3.5.1 不同濃度 5-HT和PRL單獨或共同處理對MAC-T細胞增殖的影響60-62
• 3.5.2 不同濃度 5-HT與不同濃度PRL作用對m-TOR蛋白表達的影響62-64
• 4 討論64-68
• 4.1 乳腺上皮細胞系培養(yǎng)的重要性64
• 4.2 MAO、SERT基因的表達64-65
• 4.3 5-HT對細胞增殖的影響65
• 4.4 5-HT通過 1B、4 亞型受體促進細胞增殖65-66
• 4.5 5-HT與催乳素互作共同調(diào)控MAC-T細胞增殖66-68
• 5 結(jié)論、研究展望68-69
• 5.1 結(jié)論68
• 5.2 研究展望68-69
• 參考文獻69-81
• 致謝81-82

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：290981