目的：本實(shí)驗(yàn)以延邊奶山羊的乳腺上皮細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)材料,確定最合適體外培養(yǎng)延邊奶山羊乳腺上皮細(xì)胞的最佳條件,并探究延邊奶山羊乳腺上皮細(xì)胞在受到外源過(guò)氧化氫給予的氧化應(yīng)激刺激后,加入一定量的亞硒酸鈉以發(fā)揮其對(duì)乳腺上皮細(xì)胞的保護(hù)作用,并確定亞硒酸鈉對(duì)乳腺上皮細(xì)胞的最佳保護(hù)濃度。 方法：(1)分別用組織塊培養(yǎng)法和Ⅰ型膠原酶/透明質(zhì)酸酶消化法兩種方法建立延邊奶山羊乳腺上皮細(xì)胞,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行純化,隨后對(duì)純化后的延邊奶山羊乳腺上皮細(xì)胞的骨架蛋白—角蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)；(2)用體外培養(yǎng)的延邊奶山羊乳腺上皮細(xì)胞傳代后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。過(guò)氧化氫用DMEM/F12培養(yǎng)基分別稀釋為5、50、100、200、500μM,以DMEM/F12培養(yǎng)基作為空白對(duì)照組。過(guò)氧化氫處理4h后,用MTT法觀察過(guò)氧化氫對(duì)乳腺上皮細(xì)胞活力的影響,用Hoechst33342/PI熒光染色法觀察過(guò)氧化氫損傷對(duì)乳腺上皮細(xì)胞的凋亡情況,DCFH-DA檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS含量；(3)將延邊奶山羊乳腺上皮細(xì)胞分為3組：正常組(對(duì)照組1),過(guò)氧化氫損傷組(對(duì)照組2),亞硒酸鈉保護(hù)組。MTT方法檢測(cè)細(xì)胞活力,Hoechst33342/PI雙染、Giemsa...

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
    1.1 活性氧和自由基簡(jiǎn)介
    1.2 ROS所引起的氧化應(yīng)激
    1.3 細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶
    1.4 細(xì)胞培養(yǎng)中的氧化損傷
    1.5 亞硒酸鈉的研究進(jìn)展
    1.6 乳腺組織結(jié)構(gòu)及乳腺上皮細(xì)胞的研究進(jìn)展
    1.7 乳腺生物反應(yīng)器
    1.8 本實(shí)驗(yàn)的目的及意義
實(shí)驗(yàn)一 延邊奶山羊乳腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系的建立及鑒定
    1 材料與方法
    2 結(jié)果與分析
    3 討論
    4 小結(jié)
實(shí)驗(yàn)二 過(guò)氧化氫誘導(dǎo)延邊奶山羊乳腺上皮細(xì)胞氧化損傷模型的建立
    1 材料與方法
    2 結(jié)果與分析
    3 討論
    4 小結(jié)
實(shí)驗(yàn)三 亞硒酸鈉對(duì)延邊奶山羊乳腺上皮細(xì)胞過(guò)氧化氫所致氧化損傷的保護(hù)作用
    1 材料與方法
    2 結(jié)果與分析
    3 討論
    4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
碩士期間論文發(fā)表情況



本文編號(hào)：4003534