偽狂犬病病毒Qihe547分離株全基因組測序分析
發(fā)布時間:2017-04-06 19:26
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【摘要】:豬偽狂犬病(Pseudorabies,PR)是由偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的豬的急性致死性傳染病。PR廣泛分布于世界各國,是當(dāng)前危害養(yǎng)豬業(yè)的一種最為嚴(yán)重的病毒性疾病,給養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)造成巨額經(jīng)濟損失。20世紀(jì)90年代以來通過基因缺失疫苗的廣泛使用及鑒別診斷方法的應(yīng)用使PR在我國豬場得到有效控制,但自2011年底以來,我國多省份的免疫Bartha-K61疫苗的豬場陸續(xù)暴發(fā)PR,山東各地區(qū)免疫Bartha-K61疫苗的豬場也相繼發(fā)生PR,造成母豬繁殖障礙,新生仔豬出現(xiàn)神經(jīng)癥狀和高死亡率。2014年11月份至2015年3月,本研究從山東4個地區(qū)的5個疑似PR發(fā)病的規(guī)模化豬場采集的病料樣品中分離多株P(guān)RV野毒株,對其中分離自山東齊河地區(qū)的PRV毒株進行了全基因組測序及遺傳變異分析。1、豬偽狂犬病病毒分離和鑒定2014年11月份至2015年3月,樣品采集自山東濟南、齊河、沂水、費縣4個地區(qū)5個疑似PR發(fā)病豬場。將組織樣品勻漿,應(yīng)用熒光定量PCR方法檢測,確定為PRV野毒感染。組織勻漿上清過濾除菌,接種到PK15細(xì)胞上,接種約8h細(xì)胞開始出現(xiàn)變圓、合胞體等典型病變。分離病毒經(jīng)蝕斑純化,在PK15細(xì)胞上連續(xù)傳代增殖,并提取收獲的細(xì)胞培養(yǎng)液的DNA,使用gE基因特異性引物鑒定顯示所分離的PRV毒株為野毒株。將分離5株P(guān)RV分別命名為Qihe547、SDYS1、SDYS2、SDFX、SDJN,其中Qihe547株在PK15細(xì)胞上TCID50達到10-7.0/0.1ml。將PRV分離株細(xì)胞培養(yǎng)液接種體重23從竿貿(mào)魷制嫜鰲⒖幸Ы又植課、硷傂爹o湫土俅倉⒆,
本文編號:289534
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