本文關(guān)鍵詞：維生素C通過(guò)影響DNA甲基化對(duì)牛顆粒細(xì)胞細(xì)胞周期及凋亡的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：在哺乳動(dòng)物的卵巢中,細(xì)胞周期的有序進(jìn)行可以保護(hù)細(xì)胞避免凋亡。顆粒細(xì)胞作為卵泡內(nèi)非常重要的一種體細(xì)胞,通過(guò)間隙連接或旁分泌等方式對(duì)卵母細(xì)胞的發(fā)育及成熟起支持、調(diào)控和營(yíng)養(yǎng)等作用。維生素C(Vitamin C,VC)又稱L-抗壞血酸,作為一種重要的維生素,在防止細(xì)胞老化、抑制細(xì)胞凋亡中具有重要作用。最新研究發(fā)現(xiàn),維生素C不僅能有效清除細(xì)胞內(nèi)的活性氧自由基(Reactive Oxygen Species,ROS)及其產(chǎn)物,還可通過(guò)參與DNA去甲基化及組蛋白修飾過(guò)程,進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞內(nèi)表觀遺傳修飾。研究表明,維生素C可以抑制牛顆粒細(xì)胞凋亡,但其作用機(jī)制除與維生素C可去除細(xì)胞內(nèi)ROS外,是否與維生素C通過(guò)影響相關(guān)基因DNA甲基化及細(xì)胞周期有關(guān)尚不明確。因此,本研究首先分離牛顆粒細(xì)胞,并采用ITS+培養(yǎng)體系進(jìn)行體外培養(yǎng),采用流式細(xì)胞術(shù)明確維生素C及羥基脲(Hydroxyurea,HU)最適添加濃度、維生素C對(duì)細(xì)胞周期的作用和維生素C及HU對(duì)細(xì)胞內(nèi)ROS水平的影響。結(jié)果表明,隨著維生素C的添加濃度的增加,顆粒細(xì)胞凋亡率逐漸降低,在細(xì)胞可以接受的添加濃度范圍內(nèi),100μM的維生素C可有效抑制顆粒細(xì)胞凋亡;1 m M的HU可以顯著抑制顆粒細(xì)胞周期的進(jìn)行。而在添加HU時(shí)同時(shí)添加維生素C,可以有效緩解HU對(duì)顆粒細(xì)胞細(xì)胞周期的抑制作用,而維生素C的這種促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)行、抑制顆粒細(xì)胞凋亡的作用并非是通過(guò)降低細(xì)胞內(nèi)ROS水平實(shí)現(xiàn)的。隨后,本研究進(jìn)一步通過(guò)q RT-PCR方法檢測(cè)了維生素C對(duì)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡相關(guān)基因m RNA表達(dá)水平的影響,再通過(guò)亞硫酸氫鹽測(cè)序(Bisulfite Sequencing PCR,BSP)方法檢測(cè)維生素C對(duì)其中關(guān)鍵基因DNA甲基化水平的影響,以探討維生素C對(duì)顆粒細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制。結(jié)果顯示,維生素C可通過(guò)調(diào)節(jié)CDK4、CDK6、CCNA、CCNB、P21和RRM1基因的表達(dá)對(duì)促進(jìn)顆粒細(xì)胞周期的正常進(jìn)行,并通過(guò)調(diào)控BCL2、BAX和P53的表達(dá)抑制細(xì)胞凋亡。而在此過(guò)程中,CCNB和CDK4的DNA甲基化水平受到維生素C的影響。本研究為進(jìn)一步了解維生素C的生物學(xué)功能、有效利用維生素C提供了新思路,并對(duì)深入解析顆粒細(xì)胞凋亡的機(jī)制提供了理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：維生素C 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞周期 DNA甲基化
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S816
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮寫(xiě)詞表10-12
• 前言12-13
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述13-27
• 第1章 維生素C的研究進(jìn)展13-18
• 1 維生素C概述13-14
• 2 維生素C的功能14-17
• 3 展望17-18
• 第2章 顆粒細(xì)胞凋亡及其相關(guān)機(jī)制18-24
• 1 顆粒細(xì)胞及其對(duì)卵母細(xì)胞的作用18-19
• 2 顆粒細(xì)胞凋亡及其相關(guān)機(jī)制19-24
• 第3章 細(xì)胞周期的研究進(jìn)展24-27
• 1 細(xì)胞周期概述24
• 2 細(xì)胞周期相關(guān)蛋白及其調(diào)控作用24-27
• 第二篇 研究?jī)?nèi)容27-60
• 第1章 維生素C對(duì)牛顆粒細(xì)胞細(xì)胞周期的影響以及在顆粒細(xì)胞凋亡中的作用27-39
• 1 材料與方法27-31
• 2 結(jié)果31-36
• 3 討論36-38
• 4 小結(jié)38-39
• 第2章 維生素C對(duì)牛顆粒細(xì)胞細(xì)胞周期和凋亡相關(guān)基因表達(dá)水平變化及DNA甲基化水平變化的影響39-60
• 1 材料與方法39-48
• 2 結(jié)果48-57
• 3 討論57-58
• 4 小結(jié)58-60
• 結(jié)論60-61
• 參考文獻(xiàn)61-73
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介73-74
• 作者簡(jiǎn)介74-75
• 致謝75

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本文編號(hào)：282503