發(fā)布時(shí)間：2017-04-02 07:13

  本文關(guān)鍵詞：E種腸道病毒HY12小鼠感染模型及感染小鼠抗體消長(zhǎng)規(guī)律，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：牛腸道病毒(Bovine enterovirus,BEV)感染是近年來國(guó)內(nèi)新發(fā)的一種以呼吸道和消化道癥狀為主要特征的傳染病,給養(yǎng)牛業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。根據(jù)國(guó)際病毒分類委員會(huì)(ICTV)最新分類,牛腸道病毒分為E和F兩個(gè)種。腸道病毒感染牛可使其呈現(xiàn)呼吸道和消化道癥狀,包括發(fā)熱、咳嗽、呼吸困難、腹瀉、脫水,甚至死亡。由于該病在國(guó)內(nèi)為新發(fā)疫病,缺乏有關(guān)本病診斷、病毒的致病機(jī)理等方面的研究。本研究應(yīng)用所分離的E種腸道病毒HY12,以不同感染途徑、感染劑量實(shí)驗(yàn)感染不同品系的小鼠,建立病毒感染小鼠模型。將病毒接種不同品系小鼠,確定了HY12病毒對(duì)3日齡ICR乳鼠易感。應(yīng)用PCR和病毒分離技術(shù),確定了實(shí)驗(yàn)感染小鼠的帶毒、排毒時(shí)間可長(zhǎng)達(dá)18天。以不同劑量的HY12病毒接種3日齡ICR乳鼠,發(fā)現(xiàn)病毒感染小鼠的最低劑量為2×106 TCID50。應(yīng)用滴鼻、消化道灌服、腹腔注射、皮下注射和肌肉注射途徑接種HY12病毒,以RT-PCR、病理組織學(xué)及免疫組織化學(xué)等技術(shù)進(jìn)行觀察、檢測(cè),發(fā)現(xiàn)不同途徑接種病毒均可導(dǎo)致小鼠感染。通過病理組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn),感染小鼠的小腸、肺臟、肝臟、腦、腎臟均出現(xiàn)程度不同的細(xì)胞病變及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果揭示,感染小鼠的大部分組織中可檢測(cè)到HY12病毒抗原,且主要分布在小腸、肺臟和腦組織。該發(fā)現(xiàn)為HY12病毒的致病機(jī)制及病毒在宿主體內(nèi)的帶毒時(shí)間以及免疫學(xué)等方面研究打下基礎(chǔ)。本研究進(jìn)一步確定病毒實(shí)驗(yàn)感染的小鼠抗體消長(zhǎng)規(guī)律。應(yīng)用表達(dá)純化的HY12重組VP2蛋白作為包被抗原,建立了檢測(cè)HY12感染小鼠血清抗體的間接ELISA方法,并對(duì)各步的條件進(jìn)行了優(yōu)化,同時(shí)與中和實(shí)驗(yàn)進(jìn)行比較分析,表明建立的檢測(cè)BEV抗體方法具有很高的特異性、敏感性。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,板內(nèi)陽性血清和陰性血清樣品變異系數(shù)分別為3.8%和5.2%;板間陽性和陰性樣品檢測(cè)百分率變異系數(shù)分別為4%和4.3%,表明建立的檢測(cè)E種腸道病毒抗體的間接ELISA具有良好的重復(fù)性。應(yīng)用建立的方法檢測(cè)了HY12感染小鼠的抗體消長(zhǎng)規(guī)律,確定了小鼠感染病毒后一周開始產(chǎn)生抗體,感染至6周時(shí),抗體水平達(dá)到最高,隨后逐漸降低。本研究為E種腸道病毒感染的診斷和血清流行病學(xué)研究提供了特異、敏感和快速的抗體檢測(cè)方法。綜上所述,本研究建立了HY12病毒感染的小鼠模型,確定了病毒感染小鼠的病毒體內(nèi)分布及帶毒、排毒時(shí)間,建立了檢測(cè)E種腸道病毒抗體的間接ELISA方法及確定了小鼠感染病毒的抗體消長(zhǎng)規(guī)律。該結(jié)果將為E種腸道病毒的致病機(jī)理與病毒感染誘導(dǎo)的免疫機(jī)理及其疫苗研制、牛腸道病毒感染的診斷和血清流行病學(xué)研究提供技術(shù)手段與理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：HY12 免疫組化 致病機(jī)理 ELISA 動(dòng)物模型 牛腸道病毒 BEV E種腸道病毒
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.65
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮寫詞表10-11
• 引言11-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-22
• 1.1 牛腸道病毒感染及流行病學(xué)概況12
• 1.2 牛腸道病毒分類及理化學(xué)特性12-13
• 1.3 小RNA病毒科病毒感染動(dòng)物模型研究現(xiàn)狀13-16
• 1.4 小RNA病毒科病毒診斷方法的相關(guān)進(jìn)展16-22
• 第二章 E種腸道病毒HY12感染ICR乳鼠模型的研究22-41
• 2.1 材料22-25
• 2.2 方法25-29
• 2.3 結(jié)果29-39
• 2.4 討論39-40
• 2.5 小結(jié)40-41
• 第三章 E種腸道病毒HY12抗體檢測(cè)方法及病毒感染小鼠抗體消長(zhǎng)規(guī)律41-51
• 3.1 材料41-42
• 3.2 方法42-44
• 3.3 結(jié)果44-49
• 3.4 討論49-50
• 3.5 小結(jié)50-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-61
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介61-63
• 作者簡(jiǎn)介63-64
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文64-65
• 致謝65

【相似文獻(xiàn)】

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7 陳姝蒙;丁崢嶸;趙智嫻;羅梅;田炳均;湯晶晶;張杰;陸林;;云南省2012年邊境地區(qū)健康兒童腸道病毒監(jiān)測(cè)及基因特征分析[J];中國(guó)病毒病雜志;2013年03期

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本文編號(hào)：282088