本文關鍵詞：牛蛙皮膚抗菌肽Catesbeianin-1在PichiaPink中表達條件的優(yōu)化及其粗提物對產(chǎn)蛋后期雞的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：兩棲類脊椎動物由于是從水生過渡到陸生,因而具有水生與陸生的雙重特性。它們的皮膚具有免疫防御的作用,在抵御環(huán)境病原微生物的侵襲方面具有重要作用,皮膚表面含有大量的粘液,在粘液中含有大量的抗菌活性物質(zhì),而抗菌肽正是其中最主要的物質(zhì)之一,它們分子結構特殊、功能復雜多樣�？咕脑谧匀唤缰袕V泛存在,具有較好的生物學活性,分子量小,大多是2000~7000bp左右,由20~60個氨基酸組成。由于抗生素的濫用,造成了大量的耐藥菌株出現(xiàn),不僅為生產(chǎn)業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失,也造成了對環(huán)境的嚴重污染。越來越多的研究表明,抗菌肽具有廣譜抗菌,不易使細菌產(chǎn)生耐藥性,不會造成藥物的殘留等優(yōu)點,受到人們的廣泛關注。畢赤酵母表達系統(tǒng)近年來發(fā)展較為迅速,多用于進行外源蛋白的表達。該系統(tǒng)的優(yōu)點:具有醇氧化酶1(AOX1)基因的啟動子,以甲醇為唯一碳源進行發(fā)酵表達,在有氧條件下進行高密度發(fā)酵,表達的外源蛋白具有生物學活性等。而Pichia Pink表達系統(tǒng)是在巴斯德畢赤酵母表達系統(tǒng)的基礎上發(fā)展起來的又一種真核重組蛋白表達系統(tǒng)。該系統(tǒng)除了上述優(yōu)點外,其內(nèi)的菌株屬于蛋白酶缺陷型,減少了外源蛋白的降解,另外,其內(nèi)含有高拷貝數(shù)表達載體,能進行外源蛋白的高效表達。本實驗室利用Pichia Pink表達系統(tǒng)成功構建酵母重組牛蛙抗菌肽Catesbeianin-1。本研究在前期研究的基礎上,以擋板瓶對重組酵母進行發(fā)酵表達,探索最適發(fā)酵條件。研究表明,該重組酵母的發(fā)酵溫度為28℃,發(fā)酵初始濃度OD600約為0.2,種子菌培養(yǎng)12h,甲醇添加量為2.5%,能有效縮短發(fā)酵時間,蛋白分泌表達量最高,使用發(fā)酵成本最低,其中重組酵母表達的粗蛋白含量約為5.0 mg/ml。對分泌表達的抗菌肽Catesbeianin-1進行革蘭氏陰性菌抑菌活性檢測,發(fā)現(xiàn)對大腸桿菌O157和O78、腸炎沙門菌CMCC50041等10種菌具有較好的抑菌活性。為了研究抗菌肽Catesbeianin-1粗提物對產(chǎn)蛋后期雞的影響,對380日齡產(chǎn)蛋雞進行飼喂實驗。發(fā)現(xiàn)飼喂了抗菌肽Catesbeianin-1粗提物的蛋雞產(chǎn)蛋率提高了約3.0%,同時增加了蛋殼的厚度,在一定程度上提高了蛋品質(zhì),同時蛋雞的免疫能力也得到了一定程度的提高。本研究為基因工程抗菌肽作為飼料添加劑的臨床應用提供了參考依據(jù)和理論基礎。
【關鍵詞】：畢赤酵母 抗菌肽 優(yōu)化表達 產(chǎn)蛋后期雞
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S831.5
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 英文縮寫詞表8-10
• 引言10-11
• 第一篇 文獻綜述11-22
• 第1章 抗菌肽的研究進展11-22
• 1.1 抗菌肽的來源11-13
• 1.2 抗菌肽的結構特點13-14
• 1.3 抗菌肽的生物學功能14-17
• 1.4 抗菌肽的作用機制17-19
• 1.5 抗菌肽在動物生產(chǎn)上的應用19-21
• 1.6 畢赤酵母表達外源蛋白的制約因素21-22
• 第二篇 研究內(nèi)容22-48
• 第1章 酵母重組抗菌肽Catesbeianin-1 搖瓶發(fā)酵條件的優(yōu)化22-34
• 1.1 材料與方法22-26
• 1.2 結果26-31
• 1.3 討論31-33
• 1.4 小結33-34
• 第2章 抗菌肽Catesbeiania-1 粗提物對產(chǎn)蛋后期雞的作用34-48
• 2.1 材料與方法34-38
• 2.2 結果38-44
• 2.3 討論44-46
• 2.4 小結46-48
• 結論48-49
• 參考文獻49-57
• 導師簡介57-58
• 作者簡介58-59
• 致謝59

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 董曉慶;曲桂娟;陳玉珂;張東鳴;;抗菌肽在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的研究進展[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2015年23期

2 陳奕彬;胡娟;楊憲寬;劉麗杰;趙會宏;;抗菌肽在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應用研究進展[J];飼料工業(yè);2015年12期

3 李孟孟;王文策;楊琳;;抗菌肽的研究進展及應用[J];中國家禽;2015年06期

4 田穎;劉文舉;崔宇;王翔宇;柏明娜;馮鑫;張永宏;潘英樹;韓文瑜;牛淑玲;;抗菌肽對海蘭褐商品蛋雞產(chǎn)蛋后期生產(chǎn)性能和血液生化指標的影響[J];中國家禽;2014年17期

5 李波;韓文瑜;宋智娟;李希;關靜姝;陳勇;;抗菌肽的免疫調(diào)節(jié)活性及其在動物生產(chǎn)中的應用[J];中國飼料;2014年04期

6 李冠楠;夏雪娟;隆耀航;李姣蓉;武婧潔;朱勇;;抗菌肽的研究進展及其應用[J];動物營養(yǎng)學報;2014年01期

7 孟艷莉;李勇;白修云;張u&寅;李曉華;鄭紅松;劉旭明;袁正東;;不同免疫增強劑對青年蛋雞生長性能和免疫功能的影響[J];華北農(nóng)學報;2013年S1期

8 邱富娜;劉金娥;馬俊;王書麗;;綠色飼料添加劑抗菌肽研究進展[J];畜牧與飼料科學;2013年02期

9 崔紹鵬;周旋;朱熬;肖向紅;張晶鈺;;東北林蛙皮膚抗菌肽基因在畢赤酵母中表達條件的優(yōu)化[J];野生動物;2013年01期

10 呂尊周;袁肖笑;朱志剛;尹兆正;;抗菌肽粗提物對蛋雞產(chǎn)蛋性能、蛋品質(zhì)、血清生化指標和腸道菌群的影響[J];中國畜牧雜志;2012年15期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 馮新;重組鱟素的規(guī)�；苽浼捌潴w內(nèi)外生物學效應與作用機制[D];吉林大學;2011年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 江麗娜;牛蛙抗菌肽在畢赤酵母中表達及其主要生物學活性[D];吉林大學;2009年

2 付常皓;重組巴曲酶在畢赤酵母中的表達及發(fā)酵研究[D];吉林大學;2009年

  本文關鍵詞：牛蛙皮膚抗菌肽Catesbeianin-1在PichiaPink中表達條件的優(yōu)化及其粗提物對產(chǎn)蛋后期雞的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：280507