牦牛BoLA-DRB1、DRB2基因多態(tài)性及序列變異特征研究
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【摘要】:主要組織相容性復(fù)合體(Major Histocompatibility Complex,MHC),是緊密連鎖、高度多態(tài)且呈單體型遺傳的基因家族,其編碼的MHC分子在抗原識(shí)別與呈遞、免疫應(yīng)答與調(diào)控等方面起著重要作用。牛MHC命名為牛白細(xì)胞抗原(Bovine Lymphocyte Antigen,Bo LA),同其多種疾病和生產(chǎn)性能相關(guān)。DRB1和DRB2基因?qū)貰o LA家族Ⅱ類基因。本研究應(yīng)用PCR-SSCP技術(shù),檢測(cè)甘南牦牛、青海牦牛、天祝白牦牛、大通牦牛和普通牛DRB1基因第1內(nèi)含子、第2外顯子、第2內(nèi)含子及DRB2基因第1內(nèi)含子、第2內(nèi)含子、第3外顯子突變,分析其多態(tài)性和序列變異特征。主要研究結(jié)果為:(1)牦牛及普通牛DRB1基因第1內(nèi)含子、第2外顯子多態(tài)性較豐富。第1內(nèi)含子區(qū)檢測(cè)到A、B、C、D四種等位基因和7種基因型,其中等位基因B頻率0.361~0.481為優(yōu)勢(shì)等位基因;等位基因序列測(cè)定和比對(duì)發(fā)現(xiàn)4處SNPs及1個(gè)插入/缺失突變。第2外顯子區(qū)檢測(cè)到A1-I1 9種等位基因和11種基因型,青海牦牛和天祝白牦牛等位基因A1頻率0.188和0.279分別為優(yōu)勢(shì)等位基因,而甘南牦牛、大通牦牛與普通牛等位基因B1頻率0.251~0.285為優(yōu)勢(shì)等位基因;等位基因序列測(cè)定和比對(duì)發(fā)現(xiàn)18處SNPs。DRB1基因第1內(nèi)含子、第2外顯子區(qū)PIC值0.575~0.860為高度多態(tài)。(2)牦牛及普通牛不同類群間DRB2基因第2內(nèi)含子多態(tài)性有所差異。第2內(nèi)含子區(qū)檢測(cè)到A2、B2、C2、D2和E2 5種等位基因和8種基因型,其中等位基因A2頻率0.533~0.689為優(yōu)勢(shì)等位基因;等位基因序列測(cè)定和比對(duì)發(fā)現(xiàn)7處SNPs。甘南牦牛、天祝白牦牛及青海牦牛PIC值0.525~0.571為高度多態(tài),大通牦牛和普通牛PIC值0.428~0.459表現(xiàn)為中度多態(tài)。DRB2基因第1內(nèi)含子及第3外顯子未發(fā)現(xiàn)多態(tài)性。(3)甘南牦牛在DRB1基因和DRB2基因檢測(cè)區(qū)域均偏離Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)(P0.01),而青海牦牛僅在DRB1基因檢測(cè)區(qū)域偏離Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)(P0.01)。(4)牦牛及普通牛DRB1和DRB2基因檢測(cè)區(qū)域存在單倍型連鎖不平衡現(xiàn)象。兩基因檢測(cè)區(qū)域發(fā)現(xiàn)25種“DRB1 intron 1-exon 2”單倍型、20種“DRB1 intron 1-DRB2 intron2”單倍型、18種“DRB1 exon 2-DRB2 inron 2”單倍型和71種“DRB1 intron 1-exon 2-DRB2intron 2”單倍型,單倍型數(shù)量均少于理論值,單倍型頻率為0.004~0.117;各類型單倍型的D、為0.247~0.581,r2為0.155~0.195,均存在連鎖不平衡現(xiàn)象。(5)牦牛DRB1基因第2外顯子區(qū)堿基序列與普通牛同源性最高,系統(tǒng)進(jìn)化情況與它們親緣關(guān)系遠(yuǎn)近一致。
【關(guān)鍵詞】:牦牛 普通牛 DRB1基因 DRB2基因 多態(tài)性 單倍型
【學(xué)位授予單位】:甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號(hào)】:S823.85
【目錄】:
- 摘要4-6
- Summary6-10
- 第一章 文獻(xiàn)綜述10-18
- 1 牦牛分子遺傳研究10-13
- 1.1 牦牛遺傳多態(tài)性及系統(tǒng)發(fā)育研究10-11
- 1.2 牦牛重要生產(chǎn)性狀分子遺傳研究11-13
- 2 牛主要組織相容性抗原(Bo LA)的研究13-17
- 2.1 MHC概述13-14
- 2.2 牛主要組織相容性抗原(Bo LA)14-16
- 2.3 牛Bo LA-DRB1和Bo LA-DRB2基因研究概況16-17
- 3 研究目的及意義17-18
- 第二章 材料與方法18-27
- 1 試驗(yàn)材料18
- 2 儀器設(shè)備及試劑18-20
- 2.1 主要儀器設(shè)備18-19
- 2.2 主要試驗(yàn)試劑及配制方法19-20
- 3 試驗(yàn)方法20-27
- 3.1 牦�;蚪MDNA提取及檢測(cè)20-22
- 3.2 引物設(shè)計(jì)與PCR擴(kuò)增22
- 3.3 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠檢測(cè)22-23
- 3.4 PCR-SSCP檢測(cè)23-24
- 3.5 等位基因序列測(cè)定24
- 3.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析24-27
- 第三章 結(jié)果與分析27-43
- 1 PCR擴(kuò)增結(jié)果27-28
- 2 PCR-SSCP分析28-29
- 2.1 DRB1基因第1內(nèi)含子、第2外顯子及第2內(nèi)含子SSCP檢測(cè)28-29
- 2.2 DRB2基因第1內(nèi)含子、第2內(nèi)含子及第3外顯子SSCP檢測(cè)29
- 3 DRB1及DRB2基因等位基因序列比對(duì)29-43
- 3.1 DRB1基因等位基因序列比對(duì)29-32
- 3.2 DRB2基因第2內(nèi)含子等位基因序列比對(duì)32-33
- 3.3 DRB1及DRB2基因多態(tài)性分析33-37
- 3.4 DRB1及DRB2基因單倍型連鎖分析37-42
- 3.5 DRB1基因第2外顯子核苷酸序列同源性與系統(tǒng)發(fā)育分析42-43
- 第四章 討論43-47
- 1 牦牛及普通牛DRB1、DRB2基因多態(tài)性豐富43-44
- 2 DRB1基因第2外顯子多態(tài)性在不同物種間差異較大44-45
- 3 甘南牦牛DRB1及DRB2基因檢測(cè)區(qū)偏離Hardy-Weinberg平衡45
- 4 DRB1及DRB2基因之間存在單倍型連鎖不平衡現(xiàn)象45-46
- 5 牦牛DRB1基因第2外顯子序列同源性與系統(tǒng)發(fā)育分析46-47
- 第五章 結(jié)論47-48
- 參考文獻(xiàn)48-54
- 致謝54-55
- 作者簡介55-56
- 導(dǎo)師簡介56-57
【參考文獻(xiàn)】
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本文編號(hào):280535
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