本文關(guān)鍵詞：興義鴨MEF2A、MEF2B、MEF2C和MEF2D基因克隆與組織時(shí)空表達(dá)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本研究以0至150日齡興義鴨為研究素材,利用RT-PCR結(jié)合A/T克隆的方法對(duì)肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2家族(MEF2A、MEF2B、MEF2C和MEF2D)所有成員完整編碼區(qū)(CDS)序列進(jìn)行克隆,并對(duì)四個(gè)成員序列進(jìn)行相關(guān)生物信息學(xué)分析,同時(shí)運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(QRT-PCR)技術(shù)對(duì)興義鴨該基因家族四個(gè)基因在不同生長(zhǎng)階段的心、肝、肺、腎、十二指腸、大腦、胸肌、腿肌、肌胃、腺胃10個(gè)組織的m RNA表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè),試驗(yàn)主要研究成果如下:(1)成功克隆獲得了興義鴨MEF2A、MEF2B、MEF2C和MEF2D基因編碼區(qū)序列,全長(zhǎng)分別為1479 bp、1221 bp、1104 bp(1308 bp)和1548 bp的開(kāi)放閱讀框序列,分別編碼492、406、367(435)和515個(gè)氨基酸,同時(shí)發(fā)現(xiàn)興義鴨MEF2C基因可能存在兩種剪切方式。(2)本研究首次克隆獲得鴨MEF2B基因CDS區(qū)序列,該片段包含起始密碼ATG和終止密碼TAG,經(jīng)序列比對(duì)與其他物種同源性較高。經(jīng)NCBI在線預(yù)測(cè)m RNA保守結(jié)構(gòu)域,結(jié)果顯示其含有MADS-box保守結(jié)構(gòu)域,不含HJURP_C區(qū)域,符合脊椎動(dòng)物MEF2B結(jié)構(gòu)特征。(3)興義鴨MEF2基因家族實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn),該基因家族所有成員的m RNA在0、30、60、90、120和150日齡鴨的10個(gè)組織中均有不同程度的表達(dá),經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析,各基因的相對(duì)表達(dá)量在不同組織、不同階段以及不同性別之間均存在顯著差異。各基因在性別之間的表達(dá)差異都達(dá)到了顯著水平,但同一生長(zhǎng)階段不同組織中公鴨和母鴨的表達(dá)趨勢(shì)并不一致,同一組織不同生長(zhǎng)階段公鴨和母鴨的表達(dá)趨勢(shì)并也不一致,這可能跟公母鴨的生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律不同有關(guān)。各基因在同一生長(zhǎng)階段不同組織之間的表達(dá)差異都顯著,同一組織不同生長(zhǎng)階段之間的表達(dá)差異也都達(dá)到顯著水平,但各基因的表達(dá)趨勢(shì)并不一致,表明四個(gè)基因的表達(dá)并不同步,這可能與四個(gè)基因各自的功能和表達(dá)順序不同有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：MEF2基因家族 克隆 組織表達(dá) 興義鴨
【學(xué)位授予單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S834
【目錄】：

• 主要符號(hào)說(shuō)明表5-9
• 摘要9-10
• Abstract10-12
• 前言12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-24
• 1.1 中國(guó)養(yǎng)鴨概況12-13
• 1.2 興義鴨品種的概述13
• 1.3 肌肉發(fā)育機(jī)制13-15
• 1.4 MADS-BOX轉(zhuǎn)錄因子超基因家族15-16
• 1.5 MEF2因子家族研究概況16-22
• 1.5.1 MEF2A基因研究進(jìn)展17-19
• 1.5.2 MEF2B基因研究進(jìn)展19-20
• 1.5.3 MEF2C基因研究進(jìn)展20-21
• 1.5.4 MEF2D基因研究進(jìn)展21-22
• 1.6 本研究目的及意義22-24
• 第二章 材料與方法24-33
• 2.1 試驗(yàn)材料24-27
• 2.1.1 試驗(yàn)樣品24
• 2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器24-25
• 2.1.3 主要試驗(yàn)試劑25
• 2.1.4 1‰DEPC處理水配制25-26
• 2.1.5 LB培養(yǎng)基配制26
• 2.1.6 感受態(tài)細(xì)胞培養(yǎng)（CaCl_2法）26-27
• 2.1.7 5×TBE的配制27
• 2.2 試驗(yàn)方法27-32
• 2.2.1 采樣前準(zhǔn)備27
• 2.2.2 總RNA提取27-28
• 2.2.3 組織總RNA檢測(cè)28-29
• 2.2.4 cDNA第一條鏈合成29
• 2.2.5 引物設(shè)計(jì)及合成29-30
• 2.2.6 RT-PCR反應(yīng)30
• 2.2.7 MEF2基因家族克隆30-31
• 2.2.8 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)31-32
• 2.3 數(shù)據(jù)分析與統(tǒng)計(jì)32-33
• 第三章 結(jié)果與分析33-83
• 3.1 總RNA提取檢測(cè)33
• 3.2 RT-PCR擴(kuò)增及CDNA克隆33-34
• 3.3 MEF2A基因克隆及序列分析34-36
• 3.3.1 MEF2A基因mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)35
• 3.3.2 MEF2A蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)及理化性質(zhì)35-36
• 3.3.3 MEF2A基因蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)36
• 3.4 MEF2B基因克隆及序列分析36-39
• 3.4.1 鴨MEF2B基因mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)37-38
• 3.4.2 鴨MEF2B基因蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)與三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)38-39
• 3.5 MEF2C基因克隆及序列分析39-42
• 3.5.1 MEF2C基因mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)及蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)41-42
• 3.6 MEF2D基因克隆及序列分析42-43
• 3.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR43-83
• 3.7.1 MEF2家族及β-actin熒光定量PCR相關(guān)曲線43-44
• 3.7.2 興義鴨MEF2在不同性別間的表達(dá)44-51
• 3.7.3 興義鴨MEF2在不同組織間的表達(dá)51-66
• 3.7.4 興義鴨MEF2基因發(fā)育性表達(dá)66-83
• 第四章 討論83-90
• 4.1 興義鴨MEF2A基因克隆及表達(dá)83-85
• 4.1.1 MEF2A基因多態(tài)性研究83-84
• 4.1.2 MEF2A基因克隆及組織表達(dá)84-85
• 4.2 興義鴨MEF2B基因克隆及表達(dá)85-86
• 4.2.1 MEF2B基因克隆及多態(tài)性研究85-86
• 4.2.2 MEF2B基因表達(dá)研究86
• 4.3 MEF2C基因克隆及表達(dá)86-88
• 4.3.1 MEF2C基因克隆與多態(tài)性研究86-88
• 4.3.2 MEF2C基因表達(dá)研究88
• 4.4 MEF2D基因克隆及表達(dá)88-90
• 4.4.1 MEF2D基因克隆與多態(tài)性研究88-89
• 4.4.2 MEF2D基因表達(dá)研究89-90
• 第五章 結(jié)論90
• 下一步需要開(kāi)展的工作90-91
• 參考文獻(xiàn)91-95
• 致謝95-96
• 附錄96-97

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本文編號(hào)：280253