發(fā)布時間：2017-04-01 07:07

  本文關鍵詞：DEV感染對鴨主要TLRs轉(zhuǎn)錄水平影響研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：鴨腸炎病毒(Duck enteritis virus,DEV)又稱鴨瘟病毒(Duck plague virus,DPV),是危害養(yǎng)鴨業(yè)健康發(fā)展的重要病原之一。目前對DEV的研究主要集中在基因結構與功能、快速檢測技術及誘導特異性免疫應答反應等方面,但在DEV感染與鴨天然免疫應答方面研究較少。Toll樣受體(Toll like receptors,TLRs)作為一種天然免疫分子,可通過機體自身的表面模式識別受體識別病原微生物的損傷相關分子模式并激活胞內(nèi)信號傳導,誘導炎性因子以及細胞因子的產(chǎn)生,最終達到清除入侵病原體的目的。因此,本文開展了DEV感染對鴨TLRs基因轉(zhuǎn)錄和細胞因子分泌的影響研究,以期為鴨病毒性腸炎(鴨瘟)的預防與控制提供新思路。主要研究內(nèi)容包括:1.健康鴨組織中TLR2、TLR3和TLR7基因的相對轉(zhuǎn)錄水平根據(jù)Gen Bank上鴨TLR2、TLR3、TLR7和β-actin基因設計特異性引物,以β-actin為內(nèi)參,采用實時熒光定量PCR對鴨機體組織TLR2、TLR3和TLR7基因轉(zhuǎn)錄量進行檢測分析,結果發(fā)現(xiàn):TLR2、TLR3和TLR7基因m RNA在所檢測組織中均有不同程度轉(zhuǎn)錄,其中TLR2基因在脾臟中轉(zhuǎn)錄最高,依次是肝臟、胰臟、腎臟、氣管、肺臟、十二指腸、肌肉、心臟和腦;TLR3基因在肝臟中轉(zhuǎn)錄最高,依次是腎臟、脾臟、氣管、心臟、肺臟、胰臟、肌肉、十二指腸和腦;TLR7基因在脾臟中轉(zhuǎn)錄最高,依次是肝臟、胰臟、肺臟、氣管、十二指腸、腎臟、肌肉和腦。2.DEV感染對鴨組織中TLR2、TLR3和TLR7基因轉(zhuǎn)錄的影響采集DEV感染后不同時間段鴨組織樣本,提取組織樣本總RNA,采用實時熒光定量PCR對鴨機體組織TLR2、TLR3和TLR7基因轉(zhuǎn)錄量進行檢測分析,結果發(fā)現(xiàn):與正常組相比較,TLR2、TLR3和TLR7基因在鴨體不同組織中轉(zhuǎn)錄均發(fā)生不同程度變化,其總體趨勢是,隨著DEV感染時間的推進,三種Toll樣基因轉(zhuǎn)錄呈現(xiàn)倒“S”變化,即先升高后降低再升高的現(xiàn)象,但Toll樣受體基因在同一感染時間上不同鴨體組織的轉(zhuǎn)錄變化未呈現(xiàn)出一定的規(guī)律性。3.DEV感染對鴨血清和外周淋巴細胞中細胞因子分泌的影響采集DEV感染后不同時間段鴨血清樣本,采用ELISA測定IL-2、IL-6、IL-8、IFN-β和IFN-γ含量,結果發(fā)現(xiàn):DEV感染后鴨血清中IL-2、IL-6、IL-8、IFN-β和IFN-γ分泌均發(fā)生不同程度的變化,其中IL-2在6h時最高,120h時最低;IL-6在72h前趨于穩(wěn)定,96h時降到最低;IL-8在6h時最高,96h時最低;IFN-β開始時降低,6~48h時升高,后又降低,至96h時開始上升;IFN-γ在6h時最高,18~120h時呈整體下降趨勢,至168h時升高。分離健康鴨血液中外周淋巴細胞,培養(yǎng)呈單層細胞后,感染DEV,收集感染后不同時間細胞樣本,采用ELISA方法測定IL-2、IL-6、IL-8、IFN-β和IFN-γ含量,結果發(fā)現(xiàn):DEV感染后鴨外周淋巴細胞中IL-2、IL-6、IL-8、IFN-β和IFN-γ分泌均發(fā)生不同程度的變化,其中IL-2和IL-6呈現(xiàn)持續(xù)上升,至4h后分泌趨于穩(wěn)定;IL-8在1h時開始下降,4h時上升至最高,8h時下降,12h上升;IFN-β在1h時開始上升,4~8h時持續(xù)下降,12h時上升;IFN-γ在1h時無變化,4h時上升,8h時下降,12h時上升。結論:TLR2、TLR3和TLR7基因在正常鴨組織中具有不同程度的轉(zhuǎn)錄,感染DEV后其轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生一定的變化,總體趨勢沒有規(guī)律性;鴨血清和鴨外周淋巴細胞中IL-2、IL-6、IL-8和IFN-γ分泌變化趨勢大致相同,而IFN-β不同。
【關鍵詞】：鴨腸炎病毒 TLRs 細胞因子 熒光定量PCR ELISA
【學位授予單位】：貴州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S858.32
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略詞9-10
• 文獻綜述10-22
• Toll 樣受體的研究進展10-17
• 細胞因子研究進展17-22
• 第一章 正常鴨源TLRs基因的組織轉(zhuǎn)錄水平研究22-38
• 1 材料23
• 1.1 實驗動物23
• 1.2 主要試劑23
• 1.3 主要儀器23
• 2 方法23-27
• 2.1 引物設計與合成23-24
• 2.2 RNA提取及cDNA合成24-26
• 2.3 熒光定量PCR反應體系及程序26-27
• 2.4 數(shù)據(jù)處理27
• 3 結果27-34
• 3.1 RQ-PCR產(chǎn)物的特異性以及擴增效率分析27-31
• 3.2 TLRs基因的組織表達譜31-34
• 4 討論34-38
• 4.1 關于熒光定量檢測方法的建立34
• 4.2 關于TLR2、TLR3和TLR7基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平研究34-38
• 第二章 DEV感染對鴨主要TLR基因轉(zhuǎn)錄水平影響研究38-72
• 1 材料39
• 1.1 實驗動物39
• 1.2 主要試劑39
• 1.3 主要儀器39
• 2 方法39-40
• 2.1 人工感染及樣品采集39
• 2.2 引物設計與合成39
• 2.3 總RNA提取及cDNA合成39
• 2.4 熒光定量PCR反應體系及程序39
• 2.5 數(shù)據(jù)處理39-40
• 3 結果40-70
• 3.1 DEV感染后鴨TLR2基因的組織轉(zhuǎn)錄水平40-50
• 3.2 DEV感染后TLR3基因的組織轉(zhuǎn)錄差異50-60
• 3.3 DEV感染后TLR7基因的組織轉(zhuǎn)錄差異60-70
• 4 討論70-72
• 4.1 關于免疫與TLRs70
• 4.2 關于DEV感染與TLRs70-72
• 第三章 DEV感染對鴨主要細胞因子表達影響研究72-83
• 1 材料73
• 1.1 實驗動物73
• 1.2 主要試劑73
• 1.3 主要儀器73
• 2 方法73-75
• 2.1 DEV感染鴨及樣品采集73-74
• 2.2 外周淋巴細胞的制備及處理74
• 2.3 細胞因子水平檢測74-75
• 2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析75
• 3 結果75-81
• 3.1 DEV感染后鴨血清中五種細胞因子分泌水平75-78
• 3.2 DEV感染后鴨外周淋巴細胞中細胞因子的分泌情況78-81
• 4 討論81-83
• 4.1 DEV感染對鴨血清中細胞因子的影響81-82
• 4.2 DEV感染外周淋巴細胞中細胞因子的影響82-83
• 全文結論83-84
• 參考文獻84-91
• 附錄 攻讀碩士學位期間發(fā)表論文情況91-92
• 致謝92-93

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