發(fā)布時(shí)間：2017-03-29 18:14

  本文關(guān)鍵詞：牛病毒性腹瀉病毒的分離鑒定及其E0核酸疫苗與細(xì)胞因子佐劑聯(lián)合免疫研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：牛病毒腹瀉/粘膜病病毒(BVDV/MD)是黃病毒科瘟病毒屬的成員,可引起牛病毒性腹瀉(BVD),呈世界性分布。由于持續(xù)性感染及母牛的繁殖障礙,給世界養(yǎng)牛業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前,國(guó)內(nèi)還沒有商品化疫苗,因此急需研制出新型理想的疫苗防制該病。BVDV的結(jié)構(gòu)蛋白E0保守性高,其上有中和表位。故本研究針對(duì)地方株BVDV-TC的E0基因及兩種細(xì)胞因子基因構(gòu)建的重組真核表達(dá)質(zhì)粒,來研究核酸疫苗與細(xì)胞因子佐劑的聯(lián)合免疫效果。首先,本研究分離出牛病毒性腹瀉新疆株并命名為BVDV-TC,利用RT-PCR分別擴(kuò)增出BVDV-TC的E0及牛粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子基因片段,插入到pVAX1載體,構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒。然后利用脂質(zhì)體2000將各重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至BHK-21細(xì)胞進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá),RT-PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)分析顯示,E0基因的真核重組表達(dá)質(zhì)粒都成功轉(zhuǎn)染至BHK-21細(xì)胞,并進(jìn)行了表達(dá);MTT實(shí)驗(yàn)表明細(xì)胞因子GM-CSF重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的培養(yǎng)物可刺激淋巴細(xì)胞增殖,具有良好的生物學(xué)活性。給健康小鼠分別免疫接種如下重組質(zhì)粒:僅注射pVAX1-E0、pVAX1-E0分別與實(shí)驗(yàn)室以構(gòu)建好的pVAX1-IL-2;pVAX1-GM-CSF;pVAX1-GM-CSF和pVAX1-IL-2共同免疫小鼠,并將空載體pVAX1作為對(duì)照組。通過間接ELISA及MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)免疫小鼠血清中特異性E0抗體及脾淋巴細(xì)胞的增殖水平,與對(duì)照組相比,接種真核重組質(zhì)粒的小鼠E0抗體水平及淋巴細(xì)胞增殖水平都有所提高(P0.01)。而pVAX1-IL-2和pVAX1-GM-CSF共同免疫組則表現(xiàn)出更強(qiáng)的免疫刺激活性。本研究成功構(gòu)建了牛病毒性腹瀉核酸疫苗及細(xì)胞因子佐劑,可以刺激產(chǎn)生細(xì)胞和體液免疫,且具有明顯的免疫佐劑效應(yīng)。這為牛病毒性腹瀉的新型高效的核酸疫苗的研發(fā)提供了理論和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：牛病毒性腹瀉病毒 E0基因 真核表達(dá) 細(xì)胞因子 核酸疫苗
【學(xué)位授予單位】：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.65;S852.4
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 英文縮略詞表7-8
• 第1章 引言8-20
• 1.1 BVDV的生物學(xué)特性8-9
• 1.2 BVDV的基因組和編碼蛋白9-11
• 1.3 臨床癥狀11-12
• 1.4 檢測(cè)方法12-13
• 1.5 BVD的防控13-16
• 1.6 提高DNA疫苗免疫效果的策略16-19
• 1.7 研究的目的和意義19-20
• 第2章 BVDV-TC株的分離鑒定20-31
• 2.1 材料20-21
• 2.2 樣品鑒定21-24
• 2.3 病毒分離培養(yǎng)24-25
• 2.4 病毒分離鑒定25-26
• 2.5 結(jié)果26-29
• 2.6 討論29-31
• 第3章 BVDV-TC株E0真核表達(dá)載體的構(gòu)建31-43
• 3.1 材料31-32
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法32-37
• 3.3 結(jié)果37-40
• 3.4 討論40-43
• 第4章 牛GM-CSF基因的克隆和生物學(xué)活性的鑒定43-52
• 4.1 材料43-44
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法44-47
• 4.3 結(jié)果47-50
• 4.4 討論50-52
• 第5章 核酸疫苗pVAX1-E0與細(xì)胞因子聯(lián)合免疫效果研究52-58
• 5.1 材料和試劑52
• 5.2 實(shí)驗(yàn)方法52-54
• 5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果54-56
• 5.4 討論56-58
• 第6章 結(jié)論58-59
• 參考文獻(xiàn)59-65
• 致謝65-66
• 作者簡(jiǎn)介66

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 路建彪,王允超,孫秋艷,朱瑞良;核酸疫苗的研究與應(yīng)用[J];河南畜牧獸醫(yī);2004年08期

2 江國(guó)托;核酸疫苗研究進(jìn)展(上)[J];現(xiàn)代畜牧獸醫(yī);2005年02期

3 沈清清;;核酸疫苗研制的最新研究進(jìn)展[J];科技資訊;2012年26期

4 陳利民，王代榮;核酸疫苗研究進(jìn)展[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;1996年01期

5 俞順章,周文忠,陳聲林;第三次疫苗革命——核酸疫苗[J];中華醫(yī)學(xué)信息導(dǎo)報(bào);1997年14期

6 孫樹漢;核酸疫苗及其在疾病免疫防治中的應(yīng)用[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2000年06期

7 林天龍,俞伏松,楊金先,龔暉;核酸疫苗研究及其臨床應(yīng)用前景[J];福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2000年S1期

8 黃春妍,雷秉鈞;HCV核酸疫苗研究進(jìn)展[J];四川醫(yī)學(xué);2000年02期

9 劉文波,柴同杰,趙云玲;疫苗新秀─核酸疫苗[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2001年10期

10 林天龍,俞伏松,楊金先,龔暉;核酸疫苗研究及其應(yīng)用前景[J];福建畜牧獸醫(yī);2001年S1期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 魏戰(zhàn)勇;崔保安;王學(xué)斌;徐端紅;;核酸疫苗研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上）[C];2003年

2 溫建新;王金寶;;核酸疫苗的應(yīng)用研究進(jìn)展[A];第一屆中國(guó)養(yǎng)豬生產(chǎn)和疾病控制技術(shù)大會(huì)——2005中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2005年

3 秦愛建;劉紅梅;許小琴;;2005全國(guó)第二屆核酸疫苗研討會(huì)�？痆A];2005全國(guó)第二屆核酸疫苗研討會(huì)論文集[C];2005年

4 林天龍;俞伏松;楊金先;龔暉;;核酸疫苗研究及其應(yīng)用前景[A];福建省科協(xié)首屆學(xué)術(shù)年會(huì)衛(wèi)星會(huì)議——畜牧業(yè)持續(xù)發(fā)展對(duì)策學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2001年

5 邵杰;梁爭(zhēng)論;;核酸疫苗研究進(jìn)展[A];2013年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十三屆中國(guó)藥師周論文集[C];2013年

6 劉克洲;;核酸疫苗的研究現(xiàn)狀和臨床應(yīng)用前景[A];第九次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2000年

7 秦曉冰;金寧一;付明山;馬鳴瀟;尹革芬;金擴(kuò)世;李昌;;豬2型圓環(huán)病毒核酸疫苗的構(gòu)建、鑒定和表達(dá)[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國(guó)免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第六次研討會(huì)論文集[C];2005年

8 朱明昭;宋國(guó)興;;單純皰疹病毒1型糖蛋白D真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建、表達(dá)及其作為核酸疫苗的初步研究[A];中國(guó)生物工程學(xué)會(huì)第三次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2001年

9 劉輝;朱平;林寧晶;張英;卜定方;王奕嘉;;家族特異性抗淋巴瘤核酸疫苗的構(gòu)建及表達(dá)的研究[A];第九屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2003年

10 何宏軒;王承民;張西臣;;微小隱孢子蟲核酸疫苗的研究[A];科技、工程與經(jīng)濟(jì)社會(huì)協(xié)調(diào)發(fā)展——河南省第四屆青年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2004年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 翟望;核酸疫苗研究進(jìn)展[N];保健時(shí)報(bào);2004年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉東旭;水貂阿留申病毒的分離鑒定和五種核酸疫苗的構(gòu)建及免疫原性研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

2 王加才;人類α-突觸核蛋白核酸疫苗的構(gòu)建及其神經(jīng)保護(hù)作用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2008年

3 朱明昭;細(xì)胞因子基因佐劑增強(qiáng)單純皰疹病毒1型糖蛋白D核酸疫苗的保護(hù)性免疫應(yīng)答的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2003年

4 趙小寧;丙型肝炎病毒核心區(qū)核酸疫苗的構(gòu)建及其免疫小鼠的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);1998年

5 章亞男;乙型肝炎核酸疫苗的安全性研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

6 曾韋錕;幽門螺桿菌粘膜核酸疫苗的制備及免疫學(xué)效應(yīng)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

7 徐燦;幽門螺桿菌尿素酶B和黏附素A核酸疫苗的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

8 戴文佳;肺炎球菌溶血素核酸疫苗的制備及其免疫原性研究[D];復(fù)旦大學(xué);2008年

9 何宏軒;隱孢子蟲核酸疫苗的研究[D];中國(guó)人民解放軍軍需大學(xué);2002年

10 高娜;日本腦炎病毒核酸疫苗的構(gòu)建及免疫原性研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李開銘;B群腦膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保護(hù)作用研究[D];南華大學(xué);2015年

2 陳亞蘭;優(yōu)化核酸疫苗對(duì)帕金森病小鼠神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

3 田格如;陜西部分地區(qū)雞腸道寄生蟲感染狀況及隱孢子蟲核酸疫苗研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

4 李曼;剛地弓形蟲WH3-GRA15-GFP核酸疫苗免疫保護(hù)作用的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

5 梁霄勇;牛病毒性腹瀉病毒的分離鑒定及其E0核酸疫苗與細(xì)胞因子佐劑聯(lián)合免疫研究[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

6 高爽;白色念珠菌熱休克蛋白90核酸疫苗的構(gòu)建及其免疫學(xué)活性研究[D];東北師范大學(xué);2011年

7 黃鶯;丙型肝炎核酸疫苗的構(gòu)建及其誘導(dǎo)小鼠免疫效果的評(píng)價(jià)[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2001年

8 楊云鵬;優(yōu)化hα-syn核酸疫苗免疫反應(yīng)效果及安全性的評(píng)價(jià)[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

9 趙飛駿;梅毒螺旋體外膜蛋白核酸疫苗的篩選構(gòu)建及其免疫效果的比較研究[D];南華大學(xué);2005年

10 郭麗姝;艾滋病疫苗（核酸疫苗）的質(zhì)量研究[D];吉林大學(xué);2007年

  本文關(guān)鍵詞：牛病毒性腹瀉病毒的分離鑒定及其E0核酸疫苗與細(xì)胞因子佐劑聯(lián)合免疫研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：275098