【摘要】：病毒與受體吸附是病毒起始感染的第一步,在致病過程中起著決定性的作用。病毒受體在宿主范圍和組織嗜性中也起著重要的作用。野生型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)主要通過衣殼蛋白VP1上G-H環(huán)中RGD基序吸附整聯(lián)蛋白受體起始感染宿主和宿主細(xì)胞。因此對(duì)FMDV受體和受體識(shí)別位點(diǎn)的研究將為FMDV致病機(jī)制和宿主嗜性以及宿主范圍的研究具有重要的意義。先前已有報(bào)道,整聯(lián)蛋白受體識(shí)別基序以及RGD+1和+4位氨基酸突變影響FMDV的致病表型。本研究基于Asai1型FMDV出現(xiàn)了規(guī)律性的G-H環(huán)中RGD基序和RGD+9氨基酸的變化,且該變化與病毒致病表型具有一定的關(guān)聯(lián)性。為了,(1)查明RGD突變對(duì)FMDV識(shí)別整聯(lián)蛋白受體的影響;(2)闡釋RGD+9位氨基酸突變對(duì)FMDV致病性和識(shí)別整聯(lián)蛋白受體的影響;(3)探索FMDV利用非整聯(lián)蛋白非硫酸乙酰肝素受體入侵宿主細(xì)胞的內(nèi)吞路經(jīng);我們進(jìn)行如下研究:1.RGD突變對(duì)FMDV識(shí)別豬和牛源整聯(lián)蛋白受體的影響前期實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)拯救了毒株rRGD、rRDD和rRSD,然后比較了這些毒株在宿主細(xì)胞上的生物學(xué)特性和對(duì)宿主動(dòng)物豬和牛的致病性,也比較了它們對(duì)鼠源整聯(lián)蛋白受體的識(shí)別能力。在此,在前期研究的基礎(chǔ)上進(jìn)一步比較它們對(duì)豬和牛源整聯(lián)蛋白受體的識(shí)別能力,(1)克隆豬和牛源整聯(lián)蛋白受體各亞基基因,構(gòu)建各亞基的真核表達(dá)質(zhì)粒并驗(yàn)證了表達(dá)效果。(2)比較了三個(gè)毒株對(duì)單個(gè)整聯(lián)蛋白受體的識(shí)別能力,結(jié)果表明,RGD突變改變了Asia1型FMDV對(duì)整聯(lián)蛋白受體的識(shí)別能力,而且同一毒株對(duì)不同宿主的同一種整聯(lián)蛋白受體識(shí)別能力有差異。2.RGD+9(VP1-154)位氨基酸突變對(duì)FMDV致病性和識(shí)別整聯(lián)蛋白受體的影響(1)通過FMDV單質(zhì)粒反向遺傳系統(tǒng)拯救了VP1 S154D突變的毒株。(2)在宿主細(xì)胞上生物學(xué)特性測(cè)定及對(duì)乳鼠致病實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,VP1 S154D突變?cè)鰪?qiáng)了FMDV在宿主細(xì)胞上的生長(zhǎng)能力和致病表型以及對(duì)乳鼠的致病能力。(3)對(duì)豬的致病性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,VP1 S154D突變?cè)鰪?qiáng)了FMDV對(duì)豬的致病性。(4)最后比較了兩個(gè)毒株對(duì)豬源整聯(lián)蛋白受體的利用情況,結(jié)果表明,VP1 S154D突變?cè)鰪?qiáng)了Asia1型FMDV對(duì)豬源整聯(lián)蛋白受體的識(shí)別能力,尤其是αvβ6和αvβ8。3.FMDV第三受體介導(dǎo)的內(nèi)吞路徑鑒定近些年,許多報(bào)道表明FMDV存在第三受體,但是至今尚未被鑒定。實(shí)驗(yàn)室利用Asia1型FMDV感染不含整聯(lián)蛋白和硫酸乙酰肝素受體的CHO-677細(xì)胞模型,在進(jìn)行第三受體鑒定的同時(shí),也開展了第三受體介導(dǎo)的內(nèi)吞路徑的研究。在這個(gè)研究中,通過藥物抑制實(shí)驗(yàn)、siRNA干擾實(shí)驗(yàn)和顯性負(fù)突變抑制實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明,FMDV Asia1/HN/CHA/06內(nèi)吞進(jìn)入CHO-677細(xì)胞時(shí),即利用網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞路徑,也利用小窩蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞路徑,同時(shí)需要?jiǎng)恿Φ鞍椎膮⑴c和核內(nèi)體的酸性環(huán)境。綜上所述,在本研究中,建立了FMDV豬和牛源整聯(lián)蛋白受體的瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng),并比較了RGD突變對(duì)FMDV識(shí)別整聯(lián)蛋白受體的影響,揭示了RGD突變導(dǎo)致致病性變異的可能原因;證明了VP1 S154D突變?cè)鰪?qiáng)了Asia1/HN/CHA/06毒株的致病性,鑒定了G-H環(huán)中又一個(gè)重要的位點(diǎn)。探索了FMDV Asia1/HN/CHA/06利用非整聯(lián)蛋白、非硫酸乙酰肝素受體入侵CHO-677細(xì)胞的內(nèi)吞路徑,為將來(lái)揭示第三受體的內(nèi)吞路徑奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Adsorption of viruses to their receptors is the first step in the initiation of viral infection and plays a decisive role in the pathogenesis. Viral receptors also play an important role in host range and tissue tropism. Therefore, the study of FMDV receptor and receptor recognition sites will play an important role in the pathogenesis, host tropism and host range of FMDV. Previous reports have shown that integrin receptor recognition motifs and RGD+1 and+4 amino acid mutations affect the pathogenic phenotype of FMDV. The RGD motif and RGD+9 amino acids in the G-H loop of type 2 FMDV were changed regularly, and the changes were correlated with the pathogenic phenotype of FMDV. We used the non integrin non heparan sulfate receptor to invade the endocytosis pathway of host cells; we conducted the following research: * the 1.RGD mutation has previously rescued the strains rRGD, rRDD and rRSD from the FMDV identification of pig and bovine integrin receptors, and then compared the biological characteristics of these strains on host cells and their active effects on host cells. * the pathogenicity of pig and cattle also compared their ability to identify the integrin receptor of the rat. Based on the previous studies, we further compared their ability to identify the integrin receptor of pig and cattle * * (1) cloning the subunit genes of the integrin receptor from pig and cattle, constructing the eukaryotic expression plasmid of each subunit and verifying the expression. The results showed that RGD mutation changed the recognition ability of Asia1 FMDV to integrin receptor, and the same strain had different recognition ability to the same integrin receptor in different hosts. 2. RGD + 9 (VP1-154) amino acid mutation had different pathogenicity and recognition to FMDV. The effect of integrin receptor (1) rescued the VP1 S154D mutant strain through the FMDV single particle reverse genetic system. (2) the biological characteristics of host cells and the pathogenic experiment on suckling mice showed that VP1 S154D mutation enhanced the growth capacity and pathogenicity phenotype of FMDV on the host cells and the pathogenicity of suckling mice. (3) pigs * The pathogenicity test results showed that VP1 * S154D mutation enhanced the pathogenicity of FMDV to pigs. (4) finally, the utilization of two integrins * receptors in pig origin was compared. The results showed that VP1 * S154D mutation enhanced the ability of Asia1 FMDV to identify the integrin receptor of pig, especially the endocytosis mediated by alpha V beta 6 and alpha v beta 8.3.FMDV third receptor. In recent years, many reports have shown that FMDV has a third receptor, but so far it has not been identified. Laboratory studies on the endocytosis pathway mediated by the third receptor have been carried out in the CHO-677 cell model without integrin and heparan sulfate receptors infected by Asia1 FMDV. The results of drug inhibition, siRNA interference and dominant negative mutagenesis inhibition showed that when FMDV Asia1/HN/CHA/06 enters CHO-677 cells, both reticulin-mediated endocytosis pathway and pit-mediated endocytosis pathway are used, together with the participation of motilin and acidic environment of nucleosome. In this study, we established a transient expression system of FMDV and RGD *, and compared the effect of FMDV mutation on FMDV recognition of integrin receptor, and revealed the possible cause of RGD mutation leading to pathogenicity variation. It was proved that VP1 S154D mutation enhanced the pathogenicity of Asia1/HN/CHA/06 strain and identified another important part of G-H loop. The endocytosis pathway of FMDV Asia1/HN/CHA/06 in CHO-677 cells by non-integrin and non-heparan sulfate receptors was explored, which laid a foundation for revealing the endocytosis pathway of the third receptor in the future.
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.65

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 FU Yuan-fang;LU Zeng-jun;TIAN Mei-na;ZHANG Xiao-li;LIU Zai-xin;CAI Xue-peng;;Expression of Major B-cell Epitopes within the 2C Non-structural Protein of FMDV and Their Immunoreactivity[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2009年S1期

2 ;Immunogenicity of recombinant fowl-pox virus co-expressing structural protein precursor P1-2A and proteinase 3C of FMDV[J];Chinese Science Bulletin;2004年08期

3 孫濤;陸蘋;方心葵;;Expression and Application of the Recombinant Non-Structural Proteins of FMDV[J];Journal of Shanghai Jiaotong University;2005年S1期

4 任憲剛;薛飛;朱遠(yuǎn)茂;馮軍科;史鴻飛;高欲燃;;O型FMDV VP1基因的表達(dá)鑒定及其多克隆抗體的制備[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2009年07期

5 ;Development of a Synthetic Peptide ELISA Assay for the Detection of Foot-and-Mouth Disease Virus Nonstructural Protein Antibodies[J];Agricultural Sciences in China;2010年11期

6 胡博;李昌;王浩然;魯會(huì)軍;李霄;朱戰(zhàn)波;杜壽文;葉明;襲瑩;韓佳麗;王婧;金寧一;;O型FMDV復(fù)合多表位在畢赤酵母中的表達(dá)與鑒定[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2010年12期

7 ;A Simple and Rapid Colloidal Gold-based Immunochromatogarpic Strip Test for Detection of FMDV Serotype A[J];Virologica Sinica;2011年01期

8 ;Generation of Monoclonal Antibodies against Non-structural Protein 3AB of Foot-and-Mouth Disease Virus[J];Virologica Sinica;2012年05期

9 ;Comparison of Three ELISA Kits for the Differentiation of Foot-and-mouth Disease Virus-infected from Vaccinated Animals[J];Virologica Sinica;2007年01期

10 潘潔;邢繼蘭;陳波;饒忠;徐泉興;劉惠莉;;表達(dá)FMDV 3AB抗原生產(chǎn)菌株穩(wěn)定性試驗(yàn)[J];上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2007年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 ;Dendritic cell is the potential antigen-presenting cell for the foot-and-mouth disease virus[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第六屆理事會(huì)第二次會(huì)議暨教學(xué)專業(yè)委員會(huì)第六屆代表大會(huì)論文集[C];2006年

2 王曉蒙;熊德晶;謝文強(qiáng);劉玉梅;;傳統(tǒng)滅活方法對(duì)FMDV146S含量的影響[A];首屆中國(guó)獸藥大會(huì)——獸醫(yī)生物制品學(xué)、獸醫(yī)微生物學(xué)學(xué)術(shù)論壇論文集（2008）[C];2008年

3 石瑋;;Dendritic cell is the potential antigen-presenting cell for the foot-and-mouth disease virus[A];提高全民科學(xué)素質(zhì)、建設(shè)創(chuàng)新型國(guó)家——2006中國(guó)科協(xié)年會(huì)論文集[C];2006年

4 張洪勇;金寧一;葛淑敏;尹革芬;馬鳴瀟;李子健;江文正;;共表達(dá)FMDV P1-2A和3C重組雞痘病毒疫苗與核酸疫苗的實(shí)驗(yàn)免疫研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2004學(xué)術(shù)年會(huì)暨第五屆全國(guó)畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2004年

5 邵軍軍;�；菔|;林彤;叢國(guó)正;獨(dú)軍政;謝慶閣;;用原位雜交對(duì)BHK-21細(xì)胞中的FMDV定位和檢測(cè)[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2006學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2006年

6 王鵬雁;黃炯;任艷;王玉紅;薜英;陳創(chuàng)夫;郭志儒;;FMDV siRNA在BHK-21細(xì)胞中抑制病毒復(fù)制的研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2008年學(xué)術(shù)年會(huì)暨第六屆全國(guó)畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

7 胡博;李昌;魯會(huì)軍;李霄;朱戰(zhàn)波;葉明;杜壽文;韓佳麗;王婧;金寧一;;Asia 1型FMDV復(fù)合多表位的構(gòu)建及畢赤酵母中表達(dá)[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第四次豬病防控學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

8 胡博;李昌;魯會(huì)軍;李霄;杜壽文;朱戰(zhàn)波;葉明;韓佳麗;金寧一;;表達(dá)Asia 1型FMDV復(fù)合多表位枯草芽孢桿菌的構(gòu)建及實(shí)驗(yàn)免疫[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第四次豬病防控學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

9 田明堯;金寧一;李昌;鄭敏;秦曉冰;;FMDV VP1基因在大腸桿菌中的表達(dá)及應(yīng)用研究[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

10 霍曉偉;金寧一;魯會(huì)軍;谷長(zhǎng)維;牟偉鋒;常巧成;馬鳴瀟;;共表達(dá)亞洲Ⅰ型FMDV P1-2A-3C和IL18基因重組雞痘病毒表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第十二次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 曾健雄;口蹄疫病毒感染細(xì)胞中PI4KB招募以及3A-3D~(pol)-PI4KB復(fù)制復(fù)合物的形成[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 連凱琪;亞洲1型FMDV RGD基序和VP1第154位突變對(duì)宿主致病性的影響[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

3 王洪梅;牛Mx1基因抗口蹄疫病毒作用及其抗病分子機(jī)制的研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 馬鳴瀟;FMDV分子背景分析、病毒拯救及多價(jià)基因工程疫苗研究[D];吉林大學(xué);2007年

5 印春生;表達(dá)FMDV-VP1重組PPRV的構(gòu)建及生物學(xué)特性與免疫應(yīng)答研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

6 熊義;IRES調(diào)控α-干擾素的抗FMDV研究[D];武漢大學(xué);2009年

7 霍曉偉;亞洲1型口蹄疫核酸疫苗與重組雞痘疫苗的構(gòu)建及實(shí)驗(yàn)免疫研究[D];吉林大學(xué);2008年

8 曹永生;Asia1型FMDV復(fù)合表位免疫原的研制及免疫效果研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

9 曹永生;Asial型FMDV復(fù)合表位免疫原的研制及免疫效果研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

10 邵寒娟;A、O型口蹄疫雙價(jià)疫苗研究[D];廈門大學(xué);2004年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 解銀麗;O型FMDV衣殼抗原的耐酸改造及其在昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 高明;幾種佐劑對(duì)豬O型FMDV重組多表位抗原免疫原性的影響[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

3 趙慧;FMDV各型表位嵌入型蛋白SLP-Multi VP1的表位預(yù)測(cè)及不同種小鼠IgG亞型變化的影響[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 劉偉芳;IFNα/IFNγ和sIFITM3抗FMDV效應(yīng)和口蹄疫重組假型桿狀病毒的構(gòu)建及免疫原性研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

5 陸繼爽;多型FMDV VP1表位嵌入型S-層蛋白載體的構(gòu)建及其在發(fā)酵乳桿菌中的表達(dá)產(chǎn)物鑒定[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

6 宋一鳴;基于qRT-PCR終點(diǎn)法的FMDV快速中和試驗(yàn)的建立[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

7 袁紅;耐酸性O(shè)型口蹄疫基因工程病毒的構(gòu)建及其特性分析[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

8 張永勝;大腸桿菌表達(dá)的牛亞洲Ⅰ型FMDV多表位重組蛋白的純化[D];吉林大學(xué);2009年

9 崔力凡;抗FMDV核酶的篩選及其重組成纖維細(xì)胞株的建立[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

10 任智慧;新型佐劑對(duì)FMDV核酸疫苗免疫效果的影響[D];新疆大學(xué);2005年

，

本文編號(hào)：2182741