t10,c12 CLA可通過降低乳腺上皮細(xì)胞內(nèi)核轉(zhuǎn)錄因子n SREBP1的水平,引起牛奶乳脂率降低50%,降低牛乳營養(yǎng)成分,影響乳品質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)以牛乳腺上皮細(xì)胞系(MAC-T)為模型,分別從轉(zhuǎn)錄、翻譯后加工修飾以及降解調(diào)控水平研究t10,c12 CLA降低n SREBP1水平的調(diào)控機(jī)制。為緩解低乳脂癥(MFD),提高乳品質(zhì)提供參考。試驗(yàn)一t10,c12 CLA對乳脂合成網(wǎng)絡(luò)的影響以MAC-T為模型,檢測乳脂合成網(wǎng)絡(luò)基因的表達(dá),觀察脂滴分泌情況。不同梯度t10,c12 CLA(0,75,150和300 n M)處理MAC-T,western blot篩選t10,c12 CLA對n SREBP1的最佳抑制濃度,用它處理MAC-T,RT-q PCR和western blot檢測乳脂合成網(wǎng)絡(luò)的m RNA豐度和蛋白豐度。結(jié)果顯示,1)MAC-T能表達(dá)乳脂合成網(wǎng)絡(luò)中的21個(gè)基因,能分泌脂滴;2)150 n M的t10,c12 CLA對n SREBP1的抑制效果最佳,并可顯著降低ACACA,FASN,SCD1的m RNA豐度和SCD1的蛋白豐度。結(jié)果表明,MAC-T能作為本研究的模型,t10,c12 ...

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 CLA的來源及制備
    2 CLA的生物學(xué)活性
    3 牛奶中CLA的來源
    4 乳脂的合成
    5 MFD現(xiàn)象
        5.1 乙酸/β-羥丁酸不足學(xué)說
        5.2 VB12/甲基丙二酸不足學(xué)說
        5.3 葡萄糖/胰島素學(xué)說
        5.4 反式脂肪酸理論
    6 脂肪酸合成通路中的轉(zhuǎn)錄因子
        6.1 甾醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白(SREBPs)
        6.2 甲狀腺激素應(yīng)答蛋白Stop 14
        6.3 過氧化物酶體增殖物激活受體
    7 研究內(nèi)容及目標(biāo)
    8 研究意義
第二章 T10, C12 CLA對乳脂合成網(wǎng)絡(luò)的影響
    1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
    2 試驗(yàn)材料
        2.1 試驗(yàn)器材
        2.2 試驗(yàn)試劑
        2.3 引物
    3 試驗(yàn)方法
        3.1 RNA的提取和反轉(zhuǎn)錄
        3.2 PCR檢測乳脂合成網(wǎng)絡(luò)表達(dá)
        3.3 油紅O染色
        3.4 蛋白檢測
        3.5 RT-q PCR
    4 試驗(yàn)結(jié)果
        4.1 MAC-T生長情況
        4.2 MAC-T脂滴分泌
        4.3 MAC-T內(nèi)乳脂合成網(wǎng)絡(luò)表達(dá)結(jié)果
        4.4 t10, c12 CLA抑制n SREBP1表達(dá)最佳濃度的確定
        4.5 t10, c12 CLA對FA吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)、合成的影響
        4.6 t10, c12 CLA對THRSP的影響
    5 討論
        5.1 MAC-T的乳脂合成情況
        5.2 t10, c12 CLA對n SREBP1的影響
        5.3 t10, c12 CLA對乳脂合成的調(diào)控
        5.4 THRSP在t10, c12 CLA調(diào)控n SREBP1過程中的影響
    6 小結(jié)
第三章 T10, C12 CLA在轉(zhuǎn)錄和翻譯后加工水平對SREBP1的調(diào)控機(jī)制研究
    1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
    2 試驗(yàn)材料
        2.1 試驗(yàn)儀器
        2.2 試驗(yàn)試劑
    3 試驗(yàn)方法
    4 試驗(yàn)結(jié)果
        4.1 t10, c12 CLA對SREBP1上游基因m RNA的影響
        4.2 t10, c12 CLA對PPARG、SCAP和INSIG1蛋白表達(dá)的影響
    5 討論
        5.1 t10, c12 CLA對SCAP和INSIG1的影響
    6 小結(jié)
第四章 T10, C12 CLA在SREBP1降解過程的影響
    1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
    2 試驗(yàn)材料
    3 試驗(yàn)方法
        3.1 RT-q PCR、western blot
        3.2 ATP含量測定
    4 試驗(yàn)結(jié)果
        4.1 MG-132對MAC-T影響效果
        4.2 添加G-MG-132后t10, c12 CLA對ATP和乳脂合成的影響
        4.3 t10, c12 CLA對SREBP1降解過程的影響
    5 討論
        5.1 MG-132對MAC-T的抑制效應(yīng)
        5.2 t10, c12 CLA對細(xì)胞內(nèi)ATP水平的影響
        5.3 26S蛋白酶體在t10, c12 CLA調(diào)控SREBP1過程中的影響
    6 小結(jié)
第五章 結(jié)論、創(chuàng)新點(diǎn)及后續(xù)展望
    1 結(jié)論
    2 創(chuàng)新點(diǎn)
    3 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
個(gè)人簡介
致謝



本文編號：4004435