本文關鍵詞：細粒棘球蚴感染早期Th9細胞的分布及其因子的表達

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【摘要】：目的:通過體外細粒棘球蚴原頭蚴與小鼠脾細胞共培養(yǎng),以及建立細粒棘球蚴感染小鼠模型的方法,檢測原頭蚴是否可以誘導脾臟淋巴細胞Th1細胞、Th2細胞、Treg細胞、Th9細胞的分化以及相關炎性細胞因子的表達,探討Th細胞子集是否參與細粒棘球蚴的免疫逃逸,以及不同細胞因子的相互作用可能會導致原頭蚴可以逃避宿主的免疫應答作用。方法:1、體外實驗取BALB/c小鼠脾細胞制備成脾細胞懸液,原頭蚴與小鼠脾細胞懸液共培養(yǎng)12 h、24 h、36 h、48 h后,流式細胞分析儀檢測脾細胞中Th1細胞、Th2細胞、Treg細胞和Th9細胞的數(shù)量;加入IL-9共培養(yǎng)48 h后Real-time PCR測定脾細胞IL-9Rα、RORα、IL-4Rα、IL-13Rα2、IL-5Rαm RNA的表達;ELISA檢測上清液中IL-9、IL-10、IL-4、IFN-γ、TGF-β、IL-25的表達。2、體內試驗建立小鼠細粒棘球蚴感染模型,BALB/c小鼠隨機分組,實驗組腹腔接種原頭蚴,對照組腹腔接種PBS;分別于第1、5、9天處死小鼠,收集血清、制備脾細胞懸液。流式細胞分析儀檢測脾細胞中Th1細胞、Th2細胞、Treg細胞和Th9細胞的數(shù)量;ELISA檢測血清IL-9、IL-10、IL-4、IFN-γ、TGF-β、IL-25的表達。結果:1、體外實驗建立體外脾細胞與原頭蚴共培養(yǎng)模型,脾細胞和原頭蚴共培養(yǎng)后Th1細胞在各時間點無統(tǒng)計學差異;在共培養(yǎng)24 h、36 h、48 h后,脾細胞中Th2細胞、Treg細胞含量增加,有統(tǒng)計學差異(P0.05);脾細胞與原頭蚴共培養(yǎng)36 h、48 h后,脾細胞中Th9細胞含量增加,有統(tǒng)計學差異(P0.05)。共培養(yǎng)12 h、24 h、48 h時,上清中IL-9表達增加,有統(tǒng)計學差異(P0.05);其IL-10、IL-4、TGF-β逐漸升高,在共培養(yǎng)12 h-48 h后升高有統(tǒng)計學差異(P0.05);IFN-γ先增加后減少有統(tǒng)計學差異(P0.05);IL-25在共培養(yǎng)24 h時增加有統(tǒng)計學差異(P0.05)。加入IL-9共培養(yǎng)48 h后,IL-9Rα、RORα、IL-4Rα、IL-13Rα2的m RNA表達增加有統(tǒng)計學差異(P0.05)。2、體內實驗建立小鼠細粒棘球蚴原頭蚴感染模型。脾細胞中Th1細胞的含量在感染后9天升高(P0.05);脾細胞中Th9細胞、Th2細胞、Treg細胞的含量在感染后5、9天升高(P0.05);IL-9、IFN-γ在感染后第5、9天表達升高(P0.05);IL-10、PU.1、TGF-β和IL-25在感染后第1、5、9天表達升高(P0.05);IL-4在感染后第1、5天表達升高(P0.05);蛋白水平與m RNA水平基本一致。結論:原頭蚴能刺激小鼠脾細胞向Th1細胞、Th2細胞、Treg細胞和Th9細胞分化且上調相應細胞因子的分泌,這些細胞類型和細胞因子可能相互作用從而影響宿主的免疫應答,進而提示這些亞群細胞可能在包蟲病感染的免疫逃逸中發(fā)揮一定作用,導致感染的慢性化。
【關鍵詞】：細粒棘球蚴 脾細胞 Th細胞 IL-9
【學位授予單位】：石河子大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R532.32
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 縮略語表11-12
• 前言12-15
• 第一部分：細粒棘球蚴的原頭蚴與脾細胞體外共培養(yǎng)早期Th9細胞及其它Th細胞亞群及相關炎性細胞因子的變化15-33
• 1 材料15-17
• 1.1 主要儀器和試劑15-17
• 1.2 主要病原體采集及小鼠來源17
• 2 方法17-23
• 2.1 原頭蚴的采集，，培養(yǎng)，活性鑒定17
• 2.2 小鼠脾淋巴細胞懸液制備17-18
• 2.3 體外建立原頭蚴感染模型18-19
• 2.4 流式染色及檢測19
• 2.5 ELISA法檢測共培養(yǎng)上清液中細胞因子的含量19-20
• 2.6 試劑盒法提取檢測細粒棘球蚴原頭蚴早期感染小鼠脾細胞總RNA20-21
• 2.7 RNA逆轉錄合成c DNA21
• 2.8 引物合成21-22
• 2.9 實時熒光定量PCR檢測細粒棘球蚴原頭蚴早期感染小鼠脾細胞各炎癥相關細胞因子受體基因的表達22-23
• 2.10 統(tǒng)計學分析23
• 3 結果23-31
• 3.1 早期體外不同時間點小鼠脾細胞和原頭蚴共培養(yǎng)，小鼠脾細胞中Th1細胞、Th2細胞、Treg細胞、Th9細胞的百分含量23-26
• 3.2 早期體外不同時間點脾細胞和原頭蚴共培養(yǎng)上清液中Th9細胞相關細胞因子蛋白水平的表達26-30
• 3.3 早期體外混合培養(yǎng)脾細胞和原頭蚴以及加入IL-9 共培養(yǎng) 48 h后炎癥細胞因子m RNA水平的表達30-31
• 4 討論31-33
• 第二部分：體內小鼠細粒棘球蚴原頭蚴感染早期Th9細胞以及其它Th細胞亞群及相關炎性細胞因子的變化33-47
• 1 材料及試劑(同第一部分）33
• 2 方法33-35
• 2.1 原頭蚴的采集、培養(yǎng)、活性鑒定（同第一部分）33
• 2.2 建立細粒棘球蚴原頭蚴感染小鼠動物模型33
• 2.3 外周血的采集及處理保存33
• 2.4 小鼠脾單個核細胞的制備33
• 2.5 流式細胞染色及檢測33-34
• 2.6 ELISA法檢測細粒棘球蚴原頭蚴早期感染小鼠外周血中各炎癥相關細胞因子含量34
• 2.7 試劑盒法提取檢測細粒棘球蚴原頭蚴早期感染小鼠脾細胞總RNA（同第一部分）34
• 2.8 RNA逆轉錄合成c DNA（同第一部分）34
• 2.9 引物合成34-35
• 2.10 實時熒光定量PCR檢測細粒棘球蚴原頭蚴早期感染小鼠脾細胞各炎癥相關細胞因子基因的表達（同第一部分）35
• 2.11 統(tǒng)計學分析（同第一部分）35
• 3 結果35-44
• 3.1 早期細粒棘球蚴原頭蚴感染小鼠后不同時間脾細胞中Th9細胞及其它Th細胞亞群的比例變化35-39
• 3.2 細粒棘球蚴原頭蚴早期感染小鼠不同時間Th9細胞及其他Th亞群細胞相關的炎性細胞因子m RNA水平表達升高39-41
• 3.3 細粒棘球蚴原頭蚴早期感染小鼠不同時間Th9細胞及其它Th亞群細胞相關的炎性細胞因子蛋白水平表達增加41-44
• 4 討論44-47
• 結論47-48
• 參考文獻48-51
• 綜述51-58
• 參考文獻55-58
• 致謝58-59
• 作者簡介59-60
• 導師評閱表60

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本文編號：960793