本文關(guān)鍵詞：細(xì)粒棘球蚴感染早期Th9細(xì)胞的分布及其因子的表達(dá)

  更多相關(guān)文章： 細(xì)粒棘球蚴 脾細(xì)胞 Th細(xì)胞 IL-9

【摘要】：目的:通過(guò)體外細(xì)粒棘球蚴原頭蚴與小鼠脾細(xì)胞共培養(yǎng),以及建立細(xì)粒棘球蚴感染小鼠模型的方法,檢測(cè)原頭蚴是否可以誘導(dǎo)脾臟淋巴細(xì)胞Th1細(xì)胞、Th2細(xì)胞、Treg細(xì)胞、Th9細(xì)胞的分化以及相關(guān)炎性細(xì)胞因子的表達(dá),探討Th細(xì)胞子集是否參與細(xì)粒棘球蚴的免疫逃逸,以及不同細(xì)胞因子的相互作用可能會(huì)導(dǎo)致原頭蚴可以逃避宿主的免疫應(yīng)答作用。方法:1、體外實(shí)驗(yàn)取BALB/c小鼠脾細(xì)胞制備成脾細(xì)胞懸液,原頭蚴與小鼠脾細(xì)胞懸液共培養(yǎng)12 h、24 h、36 h、48 h后,流式細(xì)胞分析儀檢測(cè)脾細(xì)胞中Th1細(xì)胞、Th2細(xì)胞、Treg細(xì)胞和Th9細(xì)胞的數(shù)量;加入IL-9共培養(yǎng)48 h后Real-time PCR測(cè)定脾細(xì)胞IL-9Rα、RORα、IL-4Rα、IL-13Rα2、IL-5Rαm RNA的表達(dá);ELISA檢測(cè)上清液中IL-9、IL-10、IL-4、IFN-γ、TGF-β、IL-25的表達(dá)。2、體內(nèi)試驗(yàn)建立小鼠細(xì)粒棘球蚴感染模型,BALB/c小鼠隨機(jī)分組,實(shí)驗(yàn)組腹腔接種原頭蚴,對(duì)照組腹腔接種PBS;分別于第1、5、9天處死小鼠,收集血清、制備脾細(xì)胞懸液。流式細(xì)胞分析儀檢測(cè)脾細(xì)胞中Th1細(xì)胞、Th2細(xì)胞、Treg細(xì)胞和Th9細(xì)胞的數(shù)量;ELISA檢測(cè)血清IL-9、IL-10、IL-4、IFN-γ、TGF-β、IL-25的表達(dá)。結(jié)果:1、體外實(shí)驗(yàn)建立體外脾細(xì)胞與原頭蚴共培養(yǎng)模型,脾細(xì)胞和原頭蚴共培養(yǎng)后Th1細(xì)胞在各時(shí)間點(diǎn)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;在共培養(yǎng)24 h、36 h、48 h后,脾細(xì)胞中Th2細(xì)胞、Treg細(xì)胞含量增加,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);脾細(xì)胞與原頭蚴共培養(yǎng)36 h、48 h后,脾細(xì)胞中Th9細(xì)胞含量增加,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。共培養(yǎng)12 h、24 h、48 h時(shí),上清中IL-9表達(dá)增加,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);其IL-10、IL-4、TGF-β逐漸升高,在共培養(yǎng)12 h-48 h后升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);IFN-γ先增加后減少有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);IL-25在共培養(yǎng)24 h時(shí)增加有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。加入IL-9共培養(yǎng)48 h后,IL-9Rα、RORα、IL-4Rα、IL-13Rα2的m RNA表達(dá)增加有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。2、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)建立小鼠細(xì)粒棘球蚴原頭蚴感染模型。脾細(xì)胞中Th1細(xì)胞的含量在感染后9天升高(P0.05);脾細(xì)胞中Th9細(xì)胞、Th2細(xì)胞、Treg細(xì)胞的含量在感染后5、9天升高(P0.05);IL-9、IFN-γ在感染后第5、9天表達(dá)升高(P0.05);IL-10、PU.1、TGF-β和IL-25在感染后第1、5、9天表達(dá)升高(P0.05);IL-4在感染后第1、5天表達(dá)升高(P0.05);蛋白水平與m RNA水平基本一致。結(jié)論:原頭蚴能刺激小鼠脾細(xì)胞向Th1細(xì)胞、Th2細(xì)胞、Treg細(xì)胞和Th9細(xì)胞分化且上調(diào)相應(yīng)細(xì)胞因子的分泌,這些細(xì)胞類型和細(xì)胞因子可能相互作用從而影響宿主的免疫應(yīng)答,進(jìn)而提示這些亞群細(xì)胞可能在包蟲病感染的免疫逃逸中發(fā)揮一定作用,導(dǎo)致感染的慢性化。
【關(guān)鍵詞】：細(xì)粒棘球蚴 脾細(xì)胞 Th細(xì)胞 IL-9
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R532.32
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 縮略語(yǔ)表11-12
• 前言12-15
• 第一部分：細(xì)粒棘球蚴的原頭蚴與脾細(xì)胞體外共培養(yǎng)早期Th9細(xì)胞及其它Th細(xì)胞亞群及相關(guān)炎性細(xì)胞因子的變化15-33
• 1 材料15-17
• 1.1 主要儀器和試劑15-17
• 1.2 主要病原體采集及小鼠來(lái)源17
• 2 方法17-23
• 2.1 原頭蚴的采集，，培養(yǎng)，活性鑒定17
• 2.2 小鼠脾淋巴細(xì)胞懸液制備17-18
• 2.3 體外建立原頭蚴感染模型18-19
• 2.4 流式染色及檢測(cè)19
• 2.5 ELISA法檢測(cè)共培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子的含量19-20
• 2.6 試劑盒法提取檢測(cè)細(xì)粒棘球蚴原頭蚴早期感染小鼠脾細(xì)胞總RNA20-21
• 2.7 RNA逆轉(zhuǎn)錄合成c DNA21
• 2.8 引物合成21-22
• 2.9 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)粒棘球蚴原頭蚴早期感染小鼠脾細(xì)胞各炎癥相關(guān)細(xì)胞因子受體基因的表達(dá)22-23
• 2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析23
• 3 結(jié)果23-31
• 3.1 早期體外不同時(shí)間點(diǎn)小鼠脾細(xì)胞和原頭蚴共培養(yǎng)，小鼠脾細(xì)胞中Th1細(xì)胞、Th2細(xì)胞、Treg細(xì)胞、Th9細(xì)胞的百分含量23-26
• 3.2 早期體外不同時(shí)間點(diǎn)脾細(xì)胞和原頭蚴共培養(yǎng)上清液中Th9細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子蛋白水平的表達(dá)26-30
• 3.3 早期體外混合培養(yǎng)脾細(xì)胞和原頭蚴以及加入IL-9 共培養(yǎng) 48 h后炎癥細(xì)胞因子m RNA水平的表達(dá)30-31
• 4 討論31-33
• 第二部分：體內(nèi)小鼠細(xì)粒棘球蚴原頭蚴感染早期Th9細(xì)胞以及其它Th細(xì)胞亞群及相關(guān)炎性細(xì)胞因子的變化33-47
• 1 材料及試劑(同第一部分）33
• 2 方法33-35
• 2.1 原頭蚴的采集、培養(yǎng)、活性鑒定（同第一部分）33
• 2.2 建立細(xì)粒棘球蚴原頭蚴感染小鼠動(dòng)物模型33
• 2.3 外周血的采集及處理保存33
• 2.4 小鼠脾單個(gè)核細(xì)胞的制備33
• 2.5 流式細(xì)胞染色及檢測(cè)33-34
• 2.6 ELISA法檢測(cè)細(xì)粒棘球蚴原頭蚴早期感染小鼠外周血中各炎癥相關(guān)細(xì)胞因子含量34
• 2.7 試劑盒法提取檢測(cè)細(xì)粒棘球蚴原頭蚴早期感染小鼠脾細(xì)胞總RNA（同第一部分）34
• 2.8 RNA逆轉(zhuǎn)錄合成c DNA（同第一部分）34
• 2.9 引物合成34-35
• 2.10 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)粒棘球蚴原頭蚴早期感染小鼠脾細(xì)胞各炎癥相關(guān)細(xì)胞因子基因的表達(dá)（同第一部分）35
• 2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析（同第一部分）35
• 3 結(jié)果35-44
• 3.1 早期細(xì)粒棘球蚴原頭蚴感染小鼠后不同時(shí)間脾細(xì)胞中Th9細(xì)胞及其它Th細(xì)胞亞群的比例變化35-39
• 3.2 細(xì)粒棘球蚴原頭蚴早期感染小鼠不同時(shí)間Th9細(xì)胞及其他Th亞群細(xì)胞相關(guān)的炎性細(xì)胞因子m RNA水平表達(dá)升高39-41
• 3.3 細(xì)粒棘球蚴原頭蚴早期感染小鼠不同時(shí)間Th9細(xì)胞及其它Th亞群細(xì)胞相關(guān)的炎性細(xì)胞因子蛋白水平表達(dá)增加41-44
• 4 討論44-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 綜述51-58
• 參考文獻(xiàn)55-58
• 致謝58-59
• 作者簡(jiǎn)介59-60
• 導(dǎo)師評(píng)閱表60

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