本文關(guān)鍵詞：吩嗪類化合物作用機(jī)制的初步研究

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【摘要】：目的利用濃度梯度倍增的氯法齊明(clofazimine,Cfz)體外誘導(dǎo)獲得結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)耐藥株,并進(jìn)行耐藥機(jī)制的初步研究。方法選取Mtb標(biāo)準(zhǔn)株H37RV,從亞最低抑菌濃度(sub-minimal inhibitory concentration,sub-MIC)(1/8 MIC、1/4MIC、1/2 MIC…)開始,在Cfz濃度倍增的7H11固體培養(yǎng)基上進(jìn)行傳代培養(yǎng),逐步誘導(dǎo)菌株對(duì)Cfz的耐藥性,并通過藥物敏感性試驗(yàn)和全基因組測(cè)序來進(jìn)行驗(yàn)證;同時(shí)利用MABA(Microplate Alamar Blue Assay)法測(cè)定誘導(dǎo)耐藥菌株對(duì)10個(gè)抗結(jié)核藥物(INH、RFP、EMB、Mfx、LZD、Cs、Cm、Bdq、TBI-166、Cfz)的MIC情況。結(jié)果Mtb標(biāo)準(zhǔn)株經(jīng)誘導(dǎo)后對(duì)Cfz的MIC值是誘導(dǎo)前的32~64倍(誘導(dǎo)前Cfz的MIC值是0.12μg/ml),對(duì)10個(gè)抗結(jié)核藥物敏感性測(cè)定顯示對(duì)貝達(dá)喹啉(Bendaquiline,Bdq,TMC207)及TBI-166產(chǎn)生交叉耐藥;耐藥株在7H9液體培養(yǎng)基中進(jìn)行無藥連續(xù)培養(yǎng)10代后,測(cè)定其MIC值無明顯變化;對(duì)該誘導(dǎo)耐藥株進(jìn)行全基因組測(cè)序共檢測(cè)到195個(gè)單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisma,SNP)突變和19個(gè)插入缺失(In Del)突變。結(jié)論從亞MIC藥物濃度開始,逐漸遞增的長(zhǎng)期藥物刺激能夠誘導(dǎo)結(jié)核分枝桿菌對(duì)氯法齊明的獲得性耐藥,獲得的耐藥株耐藥性穩(wěn)定,初步耐藥機(jī)制分析與外排泵調(diào)節(jié)及呼吸、代謝過程調(diào)節(jié)有關(guān)。目的檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv經(jīng)吩嗪類新化合物TBI-166處理前后,其相關(guān)基因表達(dá)量的變化,探討該化合物可能存在的抗結(jié)核作用機(jī)制。方法選取標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv,培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,分別接種于含TBI-166 4倍最低抑菌濃度誘導(dǎo)培養(yǎng)和含TBI-166 10倍最低抑菌濃度(10MIC)兩組7H9液體培養(yǎng)基,前者培養(yǎng)4h和24h,后者培養(yǎng)4h,提取其總RNA,應(yīng)用基因芯片技術(shù),將不同藥物MIC倍數(shù)和不同時(shí)間處理的菌株進(jìn)行比對(duì),尋找差異表達(dá)的m RNA,分析TBI-166的可能作用位點(diǎn)。結(jié)果藥物處理4h組與熱敏感性、蛋白折疊、蛋白質(zhì)二硫鍵氧化酶等功能相關(guān)的基因表達(dá)量增加,Rv3066、Rv2622、Rv2621c、Rv3418c等表達(dá)量上調(diào)均在6倍以上;其中10MIC-4h組表達(dá)增加的主要功能基因與4MIC-4h組類似,但上調(diào)倍數(shù)略小。藥物處理24h組主要為黃素腺嘌呤二核苷酸結(jié)合、芳香族化合物分解過程相關(guān)的基因表達(dá)量增加,Rv3066上調(diào)達(dá)26倍。結(jié)論Rv3066、Rv2622、Rv2621c、Rv3418c等這些基因的高表達(dá)可能與TBI-166的抗結(jié)核作用相關(guān),TBI-166可能為這些基因的誘導(dǎo)物而導(dǎo)致其激活并高表達(dá)。尚需要對(duì)其中某些相關(guān)基因進(jìn)一步進(jìn)行多方面的驗(yàn)證。
【關(guān)鍵詞】：分枝桿菌 結(jié)核 氯法齊明 耐藥 誘導(dǎo) 分枝桿菌 結(jié)核 TBI-166 基因芯片
【學(xué)位授予單位】：北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R52
【目錄】：

• 縮略詞表5-7
• 前言7-8
• 第一部分中文摘要8-9
• 第一部分英文摘要9-10
• 第二部分中文摘要10-11
• 第二部分英文摘要11-13
• 一.結(jié)核分枝桿菌對(duì)氯法齊明耐藥的體外誘導(dǎo)及其耐藥機(jī)制的初步研究13-39
• 1.前言13-14
• 2.材料和方法14-23
• 3.結(jié)果23-32
• 4.討論32-35
• 5.結(jié)論35-36
• 6.參考文獻(xiàn)36-39
• 二. 吩嗪類新化合物TBI-166抗結(jié)核機(jī)制的基因表達(dá)譜研究39-66
• 1.前言39-40
• 2.材料和方法40-50
• 3.結(jié)果50-58
• 4.討論58-62
• 5.結(jié)論62-63
• 6.參考文獻(xiàn)63-66
• 綜述一66-81
• 參考文獻(xiàn)76-81
• 綜述二81-94
• 參考文獻(xiàn)89-94
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章94-95
• 致謝詞95-97
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷97

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7 周明廣;李艷杰;徐建國;;氯法齊明治療耐多藥結(jié)核病臨床觀察[J];吉林醫(yī)學(xué);2012年04期

8 ;[J];;年期

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1 陸宇;趙偉杰;鄭梅琴;王彬;李們;付雷;初乃惠;梁博文;;氯法齊明的抗結(jié)核作用研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)2008年全國結(jié)核病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

2 陸宇;鄭梅琴;王彬;趙偉杰;李們;初乃惠;;氯法齊明的抗結(jié)核作用研究[A];中國藥理學(xué)會(huì)化療藥理專業(yè)委員會(huì)第九屆學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2008年

3 徐建;陸宇;付雷;趙偉杰;王彬;李們;;氯法齊明在小鼠低劑量氣溶膠感染慢性模型中抗結(jié)核作用研究[A];第十屆全國化療藥理暨抗感染藥理高峰論壇資料匯編[C];2010年

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1 李文;我國投資支持研發(fā)治療耐藥性肺結(jié)核新藥[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2009年

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本文編號(hào)：950620