本文關鍵詞：山東地區(qū)恙蟲病東方體感染分子流行病學研究

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【摘要】：研究背景恙蟲病(Scrub typhus, tsutsugamushi disease),又稱叢林斑疹傷寒,是一種自然疫源性疾病, 由感染了恙蟲病東方體(Orientia tsutsugamushi, O. tsutsugamushi)的恙螨幼蟲叮咬而傳播給人,以鼠類為主要宿主。該病的臨床表現以特征性焦痂或潰瘍、高熱、淋巴結腫大、皮疹為主要特征,并可引起多種并發(fā)癥甚至死亡。恙蟲病廣泛流行于亞洲太平洋沿岸地區(qū),每年發(fā)病人數達100萬例,因誤診或未及時治療的患者病死率可高達15%。目前,我國至少29個省(直轄市或自治區(qū)),1031個縣區(qū)存在恙蟲病的感染與流行。作為重點疫區(qū)之一的山東,其疫情已波及全省80%的地區(qū),且新的疫區(qū)不斷出現、流行強度逐年增局。恙蟲病的流行特征、臨床嚴重程度與感染O. tsutsugamushi的型別有關,而不同國家／地區(qū)O. tsutsugamushi基因型的分布存在地域差異。單價疫苗對異型菌株攻擊的免疫保護性差,針對不同地區(qū)研制含不同類型保護性抗原／基因的多價疫苗是恙蟲病疫苗發(fā)展的方向。因此,掌握恙蟲病流行區(qū)的O. tsutsugamushi基因型及分布對于該地區(qū)恙蟲病的免疫預防及診斷治療具有重要意義。研究目的1.通過對山東恙蟲病主要流行區(qū)的病人及宿主動物O.tsutsugamushi感染的調查及實驗室分析,探討O. tsutsugamushi的基因型及其宿主、地區(qū)分布特征,闡明該地O. tsutsugamushi流行株及優(yōu)勢株。2.對篩選出的基因變異株STA-07的分子結構進行分析,比較其與國際參考株(Gilliam、Karp、Kato、Kawasaki、Kuroki、Boryong和Shimokoshi)及山東優(yōu)勢株的核苷酸及氨基酸序列的差異,為恙蟲病的預防控制提供理論參考。研究方法根據山東省疾病報告信息系統(tǒng)的恙蟲病疫情資料及以往研究基礎,選取山東省泰安市的岱岳區(qū)、新泰市,臨沂市的蒙陰縣,淄博市的沂源縣,青島市的即墨市、黃島區(qū),萊蕪市的萊城區(qū)和棗莊市的市中區(qū)、臺兒莊區(qū)、嶧城區(qū)為現場調查點,于2013年6月至2015年12月在上述10個調查點分室內室外采用籠夜法進行捕鼠并采集鼠內臟組織。對調查點轄區(qū)內各監(jiān)測醫(yī)院或衛(wèi)生室上報的恙蟲病病例或疑似病例采集急性期全血及焦痂標本,并收集有關臨床及流行病學資料。對采集的血液、焦痂和鼠標本提取基因組DNA,以巢式PCR針對O. tsutsugamushi 56-kDa TSA基因進行擴增以檢測標本中的O.tsutsugamushi DNA。對PCR目的基因的擴增產物進行純化、回收并測序。將本研究所得序列、自NCBI GenBank獲得的國際參考株和山東地區(qū)以往研究的代表株建立數據庫,以Mega5.0軟件包進行序列分析：以Blast進行同源性檢索,Clustal W程序進行序列排序,采用鄰接法(neighbor-joining)繪制系統(tǒng)發(fā)育樹, bootstrap分析重復數設定為1000。將比對后的序列導入Lasergene軟件MegAlign,采用Sequence distance計算序列同源性。根據捕獲的宿主動物及O.tsutsugamushi DNA檢測結果,計算宿主動物種屬構成及感染狀況,繪制各型的地區(qū)分布圖。對篩選的基因變異株STA-07的O.tsutsugamushi 56-kDa TSA的核苷酸及氨基酸進行組分分析,基因編碼產物采用SOPMA分析其二級結構、TMHMM預測跨膜區(qū)、SiganlP預測信號肽和Protean預測其抗原表位。用Mega5.0及MegAlign分析比較STA-07基因型56-kDa TSA的各可變區(qū)核苷酸及氨基酸序列與參考株的差異。結果1.標本收集及感染狀況在10個調查點于四個季度中共捕獲2360只鼠,包括褐家鼠(1784只,75.59%)、小家鼠(306只,12.97%)、黑線姬鼠(225只,9.53%)、大倉鼠(25只,1.06%),小倉鼠(8只,0.34%)和，

本文編號：884212