本文關鍵詞：一種適合中國地區(qū)HBV流行特征的熒光定量PCR檢測方法的初探

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【摘要】：目的設計1套適合中國地區(qū)HBV流行特征的高靈敏度、高特異性的HBV引物探針,建立HBV熒光定量檢測的方法。方法在NCBI的Nucletide中輸入HBV、China、complete genome等關鍵詞找到中國地區(qū)的HBV序列,經(jīng)比對后在保守序列設計引物探針,引物擴增的PCR產(chǎn)物經(jīng)PMD-19載體連接制備成質(zhì)粒標準品并測序驗證序列,計算質(zhì)�？截悢�(shù),將質(zhì)粒標準品稀釋成不同濃度的質(zhì)粒標準品,用第三方標準品對質(zhì)粒標準品做校正,繪制HBV標準曲線,并用Probit分析計算檢測下限,驗證靈敏度、特異性等。將所建立的HBV熒光定量檢測方法檢測100例標本,并與羅氏cobas湟Taq Screen MPX Test,version 2.0檢測試劑盒檢測結(jié)果做相關性分析。結(jié)果引物探針特異性好,質(zhì)粒測序結(jié)果與目的產(chǎn)物完全吻合,質(zhì)粒標準品曲線R~20.999,擴增效率為95.43%,線性范圍(2×10~2-2.5×10~9)IU/m L,95%檢測下限為16.2 IU/m L,批內(nèi)重復變異系數(shù)為0.15%-1.11%,批間變異系數(shù)為0.91%-4.67%。與羅氏檢測結(jié)果相關性高(R=0.96)。結(jié)論成功設計出1對適合中國HBV流行特征的引物探針,所建立的HBV熒光定量檢測的方法靈敏度高、特異性好、重復性好,為在對中國地區(qū)開展血液HBV DNA載量檢測及監(jiān)控提供了技術支撐。
【作者單位】： 中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院輸血研究所;
【關鍵詞】： HBV流行特點 HBV引物探針 熒光定量PCR 中國地區(qū)
【基金】：科技部科研院所技術開發(fā)研究專項基金(2014EG150133) 國家自然科學基金(81370669)
【分類號】：R440;R512.62
【正文快照】： 阻斷HBV傳播一直是輸血醫(yī)學臨床和基礎研究的主要熱點問題[1]。在2010年的全球疾病負擔研究中,HBV感染是造成死亡的第10大原因、已經(jīng)排名在世界衛(wèi)生工作重點的前端[2],而經(jīng)血傳播是HBV的主要感染途徑之一[3]。從HBs Ag ELISA篩查到目前占主導地位的HBV DNA NAT檢測,尤其是熒光，

本文編號：874805