本文關(guān)鍵詞：一種適合中國地區(qū)HBV流行特征的熒光定量PCR檢測方法的初探

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【摘要】：目的設(shè)計1套適合中國地區(qū)HBV流行特征的高靈敏度、高特異性的HBV引物探針,建立HBV熒光定量檢測的方法。方法在NCBI的Nucletide中輸入HBV、China、complete genome等關(guān)鍵詞找到中國地區(qū)的HBV序列,經(jīng)比對后在保守序列設(shè)計引物探針,引物擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物經(jīng)PMD-19載體連接制備成質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品并測序驗(yàn)證序列,計算質(zhì)粒拷貝數(shù),將質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成不同濃度的質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品,用第三方標(biāo)準(zhǔn)品對質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品做校正,繪制HBV標(biāo)準(zhǔn)曲線,并用Probit分析計算檢測下限,驗(yàn)證靈敏度、特異性等。將所建立的HBV熒光定量檢測方法檢測100例標(biāo)本,并與羅氏cobas湟Taq Screen MPX Test,version 2.0檢測試劑盒檢測結(jié)果做相關(guān)性分析。結(jié)果引物探針特異性好,質(zhì)粒測序結(jié)果與目的產(chǎn)物完全吻合,質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品曲線R~20.999,擴(kuò)增效率為95.43%,線性范圍(2×10~2-2.5×10~9)IU/m L,95%檢測下限為16.2 IU/m L,批內(nèi)重復(fù)變異系數(shù)為0.15%-1.11%,批間變異系數(shù)為0.91%-4.67%。與羅氏檢測結(jié)果相關(guān)性高(R=0.96)。結(jié)論成功設(shè)計出1對適合中國HBV流行特征的引物探針,所建立的HBV熒光定量檢測的方法靈敏度高、特異性好、重復(fù)性好,為在對中國地區(qū)開展血液HBV DNA載量檢測及監(jiān)控提供了技術(shù)支撐。
【作者單位】： 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院輸血研究所;
【關(guān)鍵詞】： HBV流行特點(diǎn) HBV引物探針 熒光定量PCR 中國地區(qū)
【基金】：科技部科研院所技術(shù)開發(fā)研究專項基金(2014EG150133) 國家自然科學(xué)基金(81370669)
【分類號】：R440;R512.62
【正文快照】： 阻斷HBV傳播一直是輸血醫(yī)學(xué)臨床和基礎(chǔ)研究的主要熱點(diǎn)問題[1]。在2010年的全球疾病負(fù)擔(dān)研究中,HBV感染是造成死亡的第10大原因、已經(jīng)排名在世界衛(wèi)生工作重點(diǎn)的前端[2],而經(jīng)血傳播是HBV的主要感染途徑之一[3]。從HBs Ag ELISA篩查到目前占主導(dǎo)地位的HBV DNA NAT檢測,尤其是熒光，

本文編號：874805