本文關(guān)鍵詞：慢性HBV感染患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中FoxP3和RORγt mRNA的表達(dá)及意義

  更多相關(guān)文章： HBV 感染 免疫耐受 Treg 細(xì)胞 Th17 細(xì)胞 FoxP3 RORγt

【摘要】：目的:研究調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Regulatory T cell,Treg細(xì)胞)、輔助性T細(xì)胞17(T helper cell 17,Th17細(xì)胞)的轉(zhuǎn)錄因子叉頭/翼狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子(Forkhead box protein P3,FoxP3)、孤獨(dú)核兒受體γt(Orphan nuclear receptorγt,RORγt)mRNA在慢性HBV感染不同階段患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中的表達(dá)水平,分析其與肝功能丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate amino transferase,AST)、總膽紅素(Total bilirubin,TBIL)、HBsAg、HBeAg、HBV DNA的關(guān)系,并探討Treg、Th17細(xì)胞在慢性HBV感染免疫耐受期可能發(fā)揮的作用,以期用外周血指標(biāo)來(lái)判斷免疫耐受狀態(tài)及變化,并指導(dǎo)臨床通過(guò)免疫治療打破免疫耐受,對(duì)HBV感染進(jìn)行早期有效治療。方法:收集天津市第二人民醫(yī)院2014年4月至2015年3月門(mén)診或住院未經(jīng)過(guò)抗HBV治療的慢性HBV感染者83例,包括免疫耐受期24例,免疫清除期24例,非活動(dòng)或低(非)復(fù)制期35例,應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)技術(shù)檢測(cè)PBMC中FoxP3mRNA、RORγt mRNA的Ct值,用2-DDCt方法計(jì)算其相對(duì)表達(dá)量。同時(shí)采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)受檢者ALT、AST、TBIL,應(yīng)用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)HBV血清學(xué)標(biāo)志物HBsAg、HBeAg、HBeAb,應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR進(jìn)行病毒HBV DNA定量。以健康人14例作為對(duì)照組,比較FoxP3 mRNA、RORγt mRNA在各組中的相對(duì)表達(dá)量,及其與肝功能、病毒學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性,探究其在免疫耐受期慢性HBV感染中的作用機(jī)制。另對(duì)83例研究對(duì)象中進(jìn)行肝組織活檢病理檢查的慢性HBV感染患者27例進(jìn)行肝細(xì)胞炎癥與纖維化程度分析,分析肝組織炎癥和纖維化程度與FoxP3、RORγt mRNA相對(duì)表達(dá)量的關(guān)系。結(jié)果:1.各期HBV感染者及健康對(duì)照組之間FoxP3mRNA相對(duì)表達(dá)量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。免疫耐受期、免疫清除期及非活動(dòng)或低(非)復(fù)制期患者均高于健康對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),免疫耐受期FoxP3 mRNA相對(duì)表達(dá)量高于免疫清除期與非活動(dòng)或低(非)復(fù)制期組患者(0.252±0.410vs 0.195±0.381,0.206±0.498),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。免疫清除期與非活動(dòng)或低(非)復(fù)制期組患者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.737)。2.免疫清除期rorγtmrna相對(duì)表達(dá)量高于健康對(duì)照組、免疫耐受期組、非活動(dòng)或低(非)復(fù)制期組(0.421±0.877vs0.102±0.485,0.222±0.743,0.230±0.391),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。免疫耐受期、非活動(dòng)或低(非)復(fù)制期組rorγtmrna相對(duì)表達(dá)量均高于健康對(duì)照組(0.222±0.743,0.230±0.391vs0.102±0.485),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),免疫耐受期、非活動(dòng)或低(非)復(fù)制期組兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.831)。3.foxp3mrna相對(duì)表達(dá)量與alt、ast、tbil水平均無(wú)明顯相關(guān)性,與hbvdna顯著正相關(guān)(p0.05)。rorγtmrna相對(duì)表達(dá)量與alt、ast均顯著正相關(guān)(p0.01),與tbil、hbvdna水平均無(wú)明顯相關(guān)性。foxp3mrna的相對(duì)表達(dá)量與rorγtmrna成顯著正相關(guān)(r=0.728,p0.001)。4.83例研究對(duì)象中hbvdna陽(yáng)性組foxp3mrna相對(duì)表達(dá)量高于dna陰性組(0.271±0.341vs0.208±0.669),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。hbvdna陽(yáng)性組rorγtmrna相對(duì)表達(dá)量高于dna陰性組(0.409±0.693vs0.362±0.406),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5.83例慢性hbv感染患者中hbeag陽(yáng)性組foxp3mrna相對(duì)表達(dá)量低于hbeag陰性組(0.165±0.328vs0.232±0.507),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.884)。hbeag陽(yáng)性組rorγtmrna的相對(duì)表達(dá)量高于hbeag陰性組(0.361±0.823vs0.240±0.398),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。6.對(duì)83例研究對(duì)象中進(jìn)行肝組織活檢病理檢查的27例患者進(jìn)行分析,其中包括免疫耐受期患者2例(病理診斷分別為g1s1-2,g1-2s1)患者肝組織輕度炎癥損傷與輕度纖維化;免疫清除期患者14例(病理診斷2例為活動(dòng)性肝硬化,炎癥分級(jí)g1有3例,g≥2級(jí)有9例,纖維化程度分期,s1及以下有8例,s≥2有4例);非活動(dòng)期患者11例(炎癥程度分級(jí)g1有8例,g2有3例,纖維化程度分期s1及s2以下9例,s≥2的2例)。7.27例進(jìn)行肝組織病理檢查的患者中肝臟炎癥程度為g≥2的患者(14例)pbmc中foxp3mrna的相對(duì)表達(dá)量高于g1組(13例)(0.162±0.280vs0.044±0.066),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),g≥2組rorγtmrna的相對(duì)表量高于g1組(0.489±1.135vs0.073±0.062),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);肝臟纖維化程度為s1的患者(11例)pbmc中rorγtmrna的相對(duì)表達(dá)量高于s1組(16例)(0.589±1.273vs 0.083±0.076),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),S1組FoxP3 mRNA的相對(duì)表達(dá)量與S1組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.免疫耐受期HBV感染者存在Treg/Th17細(xì)胞失衡,監(jiān)測(cè)其轉(zhuǎn)錄因子FoxP3mRNA、RORγtmRNA表達(dá)情況,能夠有助于評(píng)估機(jī)體細(xì)胞免疫狀態(tài),可能為抗病毒治療時(shí)機(jī)選擇提供參考。2.Treg細(xì)胞在免疫耐受期占優(yōu)勢(shì),可能為導(dǎo)致免疫耐受機(jī)體免疫狀態(tài)的原因之一。Th17細(xì)胞在免疫清除期占優(yōu)勢(shì),Th17細(xì)胞具有促進(jìn)炎癥反應(yīng)作用,利于病毒的清除。3.FoxP3mRNA與HBV DNA載量正相關(guān),抑制免疫反應(yīng),HBV DNA高載量復(fù)制。RORγtmRNA促進(jìn)炎癥反應(yīng),HBeAg發(fā)生血清學(xué)轉(zhuǎn)換后,炎癥反應(yīng)恢復(fù)正常,RORγtmRNA表達(dá)量下降4.RORγtmRNA在肝細(xì)胞纖維化進(jìn)程中可能發(fā)揮著重要的作用,有助于判斷纖維化程度或是評(píng)估肝細(xì)胞是否存在纖維化。5.除了常規(guī)檢測(cè)慢性HBV感染者肝功能及病毒學(xué)指標(biāo)外,動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)慢性HBV感染者體內(nèi)Treg、Th17細(xì)胞數(shù)及其相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子,可以了解患者機(jī)體的免疫狀態(tài)及變化,可能為抗HBV的治療時(shí)機(jī)選擇提供參考意義。
【關(guān)鍵詞】：HBV 感染 免疫耐受 Treg 細(xì)胞 Th17 細(xì)胞 FoxP3 RORγt
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R512.62
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-13
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明13-15
• 前言15-21
• 研究現(xiàn)狀、成果15-20
• 研究目的、方法20-21
• 1.材料21-24
• 1.1 研究對(duì)象21-22
• 1.2 主要試劑22-23
• 1.3 主要儀器與耗材23-24
• 2．方法24-28
• 2.1 標(biāo)本采集24
• 2.2 實(shí)驗(yàn)步驟方法24-27
• 2.2.1 外周血單個(gè)核細(xì)胞提取24-25
• 2.2.2 細(xì)胞內(nèi)RNA提取及逆轉(zhuǎn)錄25-26
• 2.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR26-27
• 2.3 其他臨床指標(biāo)的檢測(cè)27-28
• 2.3.1 生化學(xué)指標(biāo)檢測(cè)27
• 2.3.2 血清HBV標(biāo)志物檢測(cè)27-28
• 2.3.3 血清 HBV DNA 水平檢測(cè)28
• 2.3.4 肝臟組織病理學(xué)檢測(cè)28
• 2.4 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析28
• 3．結(jié)果28-32
• 3.1 各組受檢者人口學(xué)數(shù)據(jù)資料及臨床指標(biāo)檢測(cè)情況28-29
• 3.2 各組患者的外周血單個(gè)核細(xì)胞中FoxP3 mRNA表達(dá)情況29
• 3.3 各組患者的外周血單個(gè)核細(xì)胞中RORγt mRNA表達(dá)情況29-30
• 3.4 FoxP3 mRNA、RORγt mRNA與肝功能、HBV DNA等指標(biāo)的相關(guān)性分析30
• 3.5 FoxP3 mRNA、RORγt mRNA在HBV DNA陽(yáng)性組與DNA陰性組的相對(duì)表達(dá)量30
• 3.6 FoxP3 mRNA、RORγt mRNA在HBeAg陽(yáng)性組與HBeAg陰性組的相對(duì)表達(dá)量30-31
• 3.7 肝組織病理檢測(cè)結(jié)果31
• 3.8 肝組織不同炎癥程度及纖維化分期患者FoxP3 mRNA、RORγt mRMA表情況31-32
• 4.討論32-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明47-48
• 附錄48-50
• 綜述 FoxP3、RORγt細(xì)胞因子與慢性HBV感染50-60
• 綜述參考文獻(xiàn)57-60
• 致謝60

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本文編號(hào)：839263