發(fā)布時間：2017-09-12 14:08

  本文關(guān)鍵詞：allo-HSCT后EBV感染的危險因素分析及CTL治療的研究

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【摘要】：由于造血干細胞移植過程中預處理方案對機體免疫系統(tǒng)的破壞,以及移植后免疫抑制劑的使用,導致機體在移植后免疫功能恢復緩慢,感染成為移植后非復發(fā)死亡的重要原因。在眾多感染病原體中,EB病毒(EBV)是常見的病毒感染之一。EBV在人群中的感染率在90%以上,正常人的感染大多表現(xiàn)為潛伏感染的形式。但是移植后機體免疫系統(tǒng)失去了對EBV的監(jiān)視,導致EBV再激活,引起病毒血癥、肺炎、腦炎以及移植后淋巴細胞增殖性疾病(PTLD)等并發(fā)癥。尤其是PTLD,雖然該病發(fā)病率低,但進展迅速,死亡率高,嚴重影響患者長期生存。目前對于移植后EBV的感染尚缺乏有效的治療措施,細胞免疫治療作為一種新型治療方式,能夠幫助機體建立抗病毒免疫,有效率高且毒副作用少,是治療移植后EBV感染的新途徑,具有很好的臨床應(yīng)用前景。目的:本研究的目的就是通過研究移植后發(fā)生EBV感染的人群,分析高危因素及預后特征,并應(yīng)用體外制備的病毒特異性T淋巴細胞(CTL)來治療移植后EBV感染的患者,研究該方法的安全性和有效性,為臨床防治移植后EBV感染提供新思路。內(nèi)容:本文的研究內(nèi)容主要分三個方面。1.對我中心行造血干細胞移植的病例進行回顧性分析,對發(fā)生EBV感染人群的特征進行研究,統(tǒng)計患者年齡、預處理方案、移植類型、HLA相合程度、GVHD的發(fā)生情況等信息,分析EBV血癥及PTLD的發(fā)生率,找出高危因素,并對感染者的預后特征加以分析。2.采用EBV特異性多肽負載的方法,由G-CSF動員后的供者干細胞采集物作為細胞來源,體外制備病毒特異性CTL(G-CTL),對其表型、功能進行檢測,并與未動員供者來源的CTL(N-CTL)進行比較。3.對移植后發(fā)生EBV感染的患者進行治療性輸注,評價安全性及有效性。方法:1.回顧性研究2011年11月至2014年11月在我中心行造血干細胞移植的402例病例,采用Kaplan-Meier模型分析EB病毒感染的累積發(fā)生率及預后特征,logistic回歸模型分析危險因素。2.研究中國人群HLA基因型的分布頻率,找出HLA-A、HLA-B、HLA-DR位點頻率高的基因型,根據(jù)HLA位點選擇并合成EBV特異性抗原肽庫。利用動員后供者干細胞采集物作為來源,密度梯度離心法分離PBMC,分貼壁與非貼壁細胞進行培養(yǎng),貼壁細胞加入IL-4、GMCSF、TNF-α誘導向DC分化,并在第7天負載EBV特異性抗原肽,而后與非貼壁細胞混合,加入IL-2擴增。第14-21天收獲細胞。而后,對收獲的G-CTL細胞進行體外檢測。測定DC細胞表面分子CD11c、CD80、CD86、CD83的表達情況,檢測CTL細胞群中CD3+、CD3-CD56+、CD4+、CD8+細胞比例,采用胞內(nèi)細胞因子染色技術(shù)(ics)檢測ctl細胞在受到多肽刺激后胞內(nèi)ifn-γ的分泌情況,采用cba技術(shù)檢測培養(yǎng)上清內(nèi)ifn-γ、tnf-α、顆粒酶b的分泌情況。并與采用同樣培養(yǎng)方法得到的n-ctl細胞進行比較。3.選取移植后易發(fā)生ebv再激活的高�；颊�,利用其動員后供者干細胞采集物提前制備ctl,并進行凍存。當患者出現(xiàn)ebv血癥時進行治療性輸注,每周輸注1次,根據(jù)制備的ctl細胞數(shù)及臨床效果決定具體的輸注劑量及輸注頻次。對于低�；蛭刺崆爸苽鋍tl的患者,用其供者二次采集的非動員pbmc制備ctl。輸注后24h內(nèi)密切觀察發(fā)熱、皮疹等輸注相關(guān)不良反應(yīng)時間的發(fā)生情況,輸注后的3月內(nèi)監(jiān)測急性gvhd的發(fā)生情況。采用pcr方法連續(xù)監(jiān)測患者外周血ebv-dna的拷貝數(shù)變化,計算治療的有效率。結(jié)果:1.共對402例移植后患者進行了統(tǒng)計分析,ebv血癥的1年累積發(fā)生率為42%,中位發(fā)生時間為移植后50天,83.5%的感染發(fā)生在移植后的100天以內(nèi)。ptld的1年累積發(fā)病率為1.45%,中位發(fā)病時間為65天。多因素logistic回歸分析表明,發(fā)生ebv血癥的危險因素為預處理中使用atg(p0.001,hr9.92)和發(fā)生Ⅲ~Ⅳ°急性移植物抗宿主病(p=0.0016,hr2.42)。具有2個危險因素的患者ebv血癥的1年累積發(fā)生率明顯高于沒有危險因素的患者(87.5%vs24.6%,p0.001)。發(fā)生ebv血癥患者的3年總生存率明顯低于未發(fā)生eb病毒血癥患者(58.5%vs75.4%,p0.001)。2.(1)共合成89條ebv特異性多肽,所合成的多肽中由大部分hla-Ⅰ類表位多肽和一部分hla-Ⅱ類表位多肽組成,主要針對ebv-lmp1,lmp2,ebna1,ebna3,bzlf1,brlf1等免疫顯性抗原。經(jīng)驗證,此多肽庫對hla表位的覆蓋率超過了90%。(2)經(jīng)過7天的培養(yǎng),貼壁細胞呈現(xiàn)典型的dc形態(tài),經(jīng)檢測,cd11c+細胞比例為97.8%±1.8%,cd80+細胞比例為68.35%±21.3%,cd86+細胞比例為90.4%±10.5%,cd83+細胞比例為13.4%±12.3%。g-ctl收獲時細胞總數(shù)平均擴增1.7倍,n-ctl平均擴增3.1倍,兩者相比差異有統(tǒng)計學意義(p0.01)。g-ctl中cd3+細胞比例為84.3%±8.8%,其中cd4+細胞比例為35.3%±11%,cd8+細胞比例為51.4%±12.6%,cd3-cd56+細胞比例為10.9%±6.7%;與n-ctl相比無明顯差別。(3)g-ctl經(jīng)ebv特異性多肽刺激后,分泌大量顆粒酶b、ifn-γ、tnf-α,分別為5807.8±2926.2pg/ml、450.4±332.9pg/ml、34±32.2pg/ml。ics檢測表明g-ctl中cd3+ifn-γ+特異性細胞比例為20.7%±10.5%,其中cd8+ifn-γ+細胞比例為18.4%±10.6%;而n-ctl中cd3+ifn-γ+、cd8+ifn-γ+細胞比例分別為28.2%±17.5%、22.5%±17%,較動員組相比差異無統(tǒng)計學意義。3.共8例移植后發(fā)生EBV感染的患者接受了CTL輸注治療,其中7例采用動員后供者的干細胞采集物制備,1例采用供者二次采集的未動員PBMC進行制備。單次輸注劑量為(2.3~35.1)×105/kg,輸注總劑量為(0.87~7.89)×106/kg,輸注次數(shù)為2~8次。輸注24h內(nèi)未見與細胞輸注相關(guān)的毒副作用。1例患者發(fā)生腸道重度急性GVHD,可能與輸注劑量的提高及免疫抑制劑的停用有關(guān)。6例患者外周血EBV-DNA拷貝數(shù)明顯下降,達到CR,2例患者無效,總有效率為75%。結(jié)論:首先,本研究對我中心造血干細胞移植后EBV感染的危險因素及預后特征進行了分析,移植后EBV感染的發(fā)生率較高,影響患者長期生存,使用ATG與發(fā)生重度急性GVHD是發(fā)生EBV血癥的危險因素。然后,我們合成了中國人群HLA特異性EBV抗原肽庫,驗證了其較廣的覆蓋率,適用于中國人群。并利用動員后供者的干細胞采集物成功制備了EBV-CTL,雖然其擴增能力不及未動員供者來源的CTL,但在細胞表型與功能上兩者無明顯差異。最后,我們用CTL治療了8例患者,顯示出了良好的臨床療效。除1例發(fā)生急性GVHD外,未見其他毒副作用。采用動員后供者來源的CTL治療移植后EBV再激活的有效率較高,便于臨床應(yīng)用。在治療過程中,應(yīng)注意針對不同個體,確定安全的輸注劑量,以減少急性GVHD發(fā)生的風險。
【關(guān)鍵詞】：EB病毒 造血干細胞移植 危險因素 粒細胞集落刺激因子 細胞毒性 T淋巴細胞
【學位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R457.7;R511
【目錄】：

• 縮略詞表4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-14
• 實驗設(shè)計14-15
• 第一部分 allo-HSCT后EBV感染的危險因素及預后分析15-22
• 對象與方法15-18
• 結(jié)果18-20
• 討論20-22
• 第二部分 EBV特異性CTL的制備及體外功能研究22-31
• 材料與方法22-26
• 結(jié)果26-29
• 討論29-31
• 第三部分 EBV特異性CTL治療HSCT后EBV感染的臨床研究31-39
• 對象與方法31-33
• 結(jié)果33-36
• 討論36-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻40-47
• 個人簡歷47-48
• 致謝48

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4 金燕琴;沈華浩;;阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征的危險因素[J];國際呼吸雜志;2006年11期

5 張明泳;刁玉荃;;慢性阻塞性肺疾病危險因素的調(diào)查[J];齊魯醫(yī)學雜志;2007年05期

6 于艷輝;孫曉紅;趙偉麗;;青年卒中的常見病因及危險因素[J];赤峰學院學報(自然科學版);2008年S2期

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9 李丹妍;;淺談外陰陰道假絲酵母菌病的危險因素[J];大家健康(學術(shù)版);2014年06期

10 謝小燕,劉雪琴;難免性壓瘡發(fā)生的危險因素及預防[J];解放軍護理雜志;2005年09期

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2 趙華;;供應(yīng)室存在的危險因素及防護對策[A];河南省現(xiàn)代消毒供應(yīng)中心(室)建設(shè)與管理暨學術(shù)會議論文集[C];2009年

3 毛麗;;淺談缺血性心腦血管疾病危險因素與預防[A];2010年江蘇省藥學大會暨第十屆江蘇省藥師周大會論文集[C];2010年

4 李翠蘭;胡大一;;長QT綜合征發(fā)病率及不同年齡段的致命性危險因素[A];全國心律失常的現(xiàn)代診療新進展專題會議資料匯編[C];2010年

5 李成義;林貴軍;劉宗明;;自發(fā)性蛛網(wǎng)膜下腔出血死亡相關(guān)危險因素分析[A];第二十三屆航天醫(yī)學年會暨第六屆航天護理年會論文匯編[C];2007年

6 王貞;韓釗;范虹;張征;馮靚;葉祖森;;溫州地區(qū)中青年卒中各年齡段特點及危險因素分析[A];2008年浙江省神經(jīng)病學學術(shù)年會論文匯編[C];2008年

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本文編號：837660