發(fā)布時(shí)間：2017-09-09 06:05

  本文關(guān)鍵詞：慢病毒介導(dǎo)的shRNA干擾人HepG2.2.15細(xì)胞Akt2基因表達(dá)的研究

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【摘要】：目的針對Akt2基因構(gòu)建shRNA慢病毒干擾載體并評價(jià)慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾在人HepG2.2.15中的基因沉默效應(yīng)。方法設(shè)計(jì)Akt2的RNAi寡聚核苷酸序列,利用慢病毒載體構(gòu)建Akt2的shRNA載體,轉(zhuǎn)染入大腸埃希菌并觀察重組表達(dá)狀況,利用293T細(xì)胞包裝得到重組腺病毒,以綠色熒光蛋白(GFP)作為標(biāo)記,逐孔稀釋法確定轉(zhuǎn)染效率及滴度,以實(shí)時(shí)熒光定量法比較各組對Akt2 mRNA的干擾效果。結(jié)果篩選了所構(gòu)建的3個(gè)Akt2靶向序列,包裝shRNA慢病毒后轉(zhuǎn)染HepG2.2.15細(xì)胞,慢病毒轉(zhuǎn)染后的沉默效率可達(dá)85%,比較得出沉默效率最高的靶序列和工作條件。結(jié)論本研究成功構(gòu)建并篩選了針對Akt2的shRNA慢病毒載體,有效抑制HepG2.2.15細(xì)胞中Akt2 mRNA的表達(dá)。
【作者單位】： 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬青島市市立醫(yī)院;青島市消化疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;青島市市立醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室;青島市市立醫(yī)院消化內(nèi)二科;
【關(guān)鍵詞】： Akt shRNA 慢病毒 HepG..
【基金】：山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(12-1-4-16-(9)-jch)
【分類號】：R512.62
【正文快照】： 慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)是由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)引起的肝臟炎癥,中國是CHB高發(fā)國家,HBV攜帶者人數(shù)約1.2億。目前治療CHB的方法主要是抑制病毒復(fù)制,無法從根本上清除及殺死病毒,約25%未積極治療的患者將發(fā)展為肝硬化和肝癌[1,2]。由于HBV基因

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 王建;沈中陽;宋紅麗;鄭衛(wèi)萍;宋曉靜;;他克莫司在體外對HepG2.2.15細(xì)胞增殖及乙型肝炎病毒復(fù)制的影響(英文)[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2011年53期

2 李桂秋;陳淑蘭;崔蘭英;趙金英;羅文濤;路娟;;HepG2.2.15細(xì)胞中siRNA與拉米夫定抗乙型肝炎病毒復(fù)制作用的比較[J];中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué);2010年07期

3 ;[J];;年期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉坤;HepG2.2.15與HepG2細(xì)胞蛋白復(fù)合體和分泌蛋白譜差異比較[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2007年

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本文編號：818720