本文關(guān)鍵詞：利用TALEN技術(shù)建立恒河猴TRIM5α基因突變細(xì)胞株

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【摘要】：利用TALEN技術(shù)建立恒河猴TRIM5α基因突變細(xì)胞株,為進(jìn)一步研究TRIM5α基因的功能奠定基礎(chǔ)。構(gòu)建針對TRIM5α打靶基因的TALEN,通過點(diǎn)突變的方法獲得包含TRIM5α第7個外顯子中打靶位點(diǎn)1 211-1 224的基因序列并構(gòu)建點(diǎn)突變donor載體。將打靶TRIM5α基因的TALEN質(zhì)粒和donor質(zhì)粒電轉(zhuǎn)入恒河猴腎細(xì)胞(LLC-MK2)中,無限稀釋法獲得單克隆細(xì)胞系,通過抽提基因組DNA,再利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目標(biāo)序列并測序篩選出TRIM5α堿基缺失(1 215-1 216)和點(diǎn)突變(1 213-1 215,1 217)的細(xì)胞系。通過共轉(zhuǎn)TALEN質(zhì)粒和點(diǎn)突變的donor質(zhì)粒篩選獲得了TRIM5α基因敲除和TRIM5α基因點(diǎn)突變的LLC-MK2細(xì)胞系。
【作者單位】： 北京工業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與生物工程學(xué)院;湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院生命科學(xué)研究所;中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒所;
【關(guān)鍵詞】： TRIMα TALEN 恒河猴 點(diǎn)突變
【基金】：國家科技部重大專項(xiàng)(2013ZX10001004-002-005)
【分類號】：Q78;R512.91
【正文快照】： 艾滋病,即獲得性免疫缺陷綜合征(acquiredimmunodeficiency syndrome,AIDS),由人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)引起,并以全身免疫系統(tǒng)損害嚴(yán)重為特征的傳染性疾病。目前全世界每天約有1.5萬HIV新發(fā)感染者,艾滋病已成為21世紀(jì)人類面臨的最嚴(yán)峻的考驗(yàn)之一。艾，

本文編號：799239