發(fā)布時(shí)間：2017-09-02 11:06

  本文關(guān)鍵詞：阿薩希毛孢子菌抗氧化酶活性研究

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【摘要】：研究背景細(xì)胞在進(jìn)行有氧呼吸代謝和能量生成的同時(shí),也伴隨著細(xì)胞內(nèi)活性氧介質(zhì)(reactive oxygen species,ROS)的生成[1]。ROS主要包括超氧陰離子(O2·ˉ),過氧化氫(H2O2),羥基自由基(·OH)等,ROS的殺傷力非常強(qiáng),不僅可以通過破壞核酸、氧化蛋白質(zhì)、引起脂質(zhì)過氧化影響多種細(xì)胞功能,而且ROS導(dǎo)致的氧化損傷正逐漸成為突變形成、細(xì)胞退化、老齡化和凋亡的重要因素[1]。大量病原微生物(如細(xì)菌、真菌)的研究表明:在感染宿主過程中,ROS主要來源于微粒體新陳代謝和由吞噬細(xì)胞產(chǎn)生的作為殺滅病原體過程的呼吸爆發(fā)[1]。此外,多項(xiàng)抗菌藥物,尤其是抗真菌藥物的研究也證實(shí):唑類、多烯類、棘白霉素類藥物也可誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)ROS的生成[2]。為了生存,病原體進(jìn)化了很多方式以清除或者修復(fù)氧化應(yīng)激所帶來的有害損傷,同時(shí)也為其侵襲性感染與致病創(chuàng)造條件。研究表明:超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和過氧化氫酶(catalase,CAT)是保護(hù)真菌免受ROS氧化殺傷的兩種最主要的抗氧化酶,SOD主要催化O2·ˉ生成H2O2和O2;而CAT可催化H2O2生成H2O2和O2,同時(shí)減少·OH的產(chǎn)生,從而降低ROS的氧化損傷[3]。這在白念珠菌(Candida albicans,C.albicans)、煙曲霉(Aspergillus fumigatus,A.fumigatus)、新型隱球菌(Cryptococcus neoformans,C.neoformans)等常見致病真菌的研究中均已得到證實(shí)[4-9]。此外,還有學(xué)者發(fā)現(xiàn):CAT和SOD是構(gòu)成C.albicans毒力的必要因素[4,5]。近年來,由于T.asahii引起的播散性毛孢子菌病的發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì),占深部真菌感染患者的5%~10%[10],并且T.asahii對(duì)絕大多數(shù)抗真菌藥均耐藥,一旦該菌在機(jī)體造成播散性、系統(tǒng)性感染,死亡率可高達(dá)80%以上[11],這使得對(duì)T.asahii臨床感染的管理與防治變得更加棘手,因此,從抗氧化防御角度探索其感染與致病機(jī)制,對(duì)T.asahii感染的防治具有重要意義。在前期的研究中,本課題組宗麗娜等人[12]發(fā)現(xiàn):三種不同的氧化劑(甲萘醌、H2O2、二酰胺)可對(duì)T.asahii產(chǎn)生不同程度的氧化殺傷作用。因次,我們推測(cè):與其他真菌病原體一樣,T.asahii也應(yīng)該具有相應(yīng)的抗氧化防御系統(tǒng),使T.asahii能夠入侵宿主體內(nèi)并造成嚴(yán)重感染而致病。為了驗(yàn)證這一假設(shè),本課題收集筆者所在實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的44株不同來源的T.asahii,測(cè)定其SOD和CAT酶活性并進(jìn)行比較和分析,初步探索其抗氧化防御機(jī)制,為進(jìn)一步研究該菌的感染與致病機(jī)制奠定基礎(chǔ)。研究目的1.觀察和比較T.asahii環(huán)境分離菌株和與臨床分離菌株抗氧化酶活性;2.觀察小鼠體內(nèi)傳代對(duì)T.asahii菌株抗氧化酶活性的影響。3.觀察氟康唑耐藥誘導(dǎo)對(duì)T.asahii菌株抗氧化酶活性的影響。研究方法.1.收集44株不同來源T.asahii菌株,將其分為環(huán)境組、臨床組、體內(nèi)傳代組和體外耐藥組四組;取上述菌株新鮮單菌落接種于PDA培養(yǎng)基上35℃生長48h;配置濃度為1.5×108cfu/ml的0.9%無菌生理鹽水和T.asahii的懸液;取1ml菌懸液添加到50ml SDB培養(yǎng)基中,震蕩培養(yǎng)48h(37℃,150r/min);離心機(jī)分離,取下層細(xì)胞沉淀用玻璃珠溶解法溶解;強(qiáng)振蕩后再次離心機(jī)分離,取上層清液用于酶活性的測(cè)定。2.用總超氧化物歧化酶測(cè)試盒和過氧化氫酶測(cè)定試劑盒分別測(cè)定過氧化氫酶和超氧化物歧化酶活性,具體操作方法按照說明書執(zhí)行。BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度:用標(biāo)準(zhǔn)血清蛋白作對(duì)照。重復(fù)3遍。3.SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。結(jié)果1.環(huán)境組:菌株CBS8904、CBS7137、CBS8520 SOD酶活性分別為3.828、3.46、4.75U/mgprot,均值為4.01±0.66U/mgprot,CAT酶活性分別為45.833、42.61、57.082U/mgprot,均值為48.51±7.60U/mgprot。2.臨床組:不同臨床分離來源菌株抗氧化酶活性不同,SOD酶活性變化范圍為6.221~16.826U/mgprot,均值為10.45±3.87U/mgprot,CAT酶活性變化范圍為61.956~164.552U/mgprot,均值為110.56±35.77U/mgprot。3.體內(nèi)傳代組:小鼠體內(nèi)傳代第1~5代后,菌株CBS2479、CBS8904、CBS7137和CBS8520的抗氧化酶活性均逐漸升高。臨床標(biāo)準(zhǔn)株CBS2479傳代前和傳5代后的SOD酶活性分別為:6.221 U/mgprot和14.610 U/mgprot(P0.05);其CAT酶的活性分別為61.956 U/mgprot和89.045 U/mgprot(P0.05)。環(huán)境株CBS8904傳代前和傳5代后的SOD酶活性分別為:3.828 U/mgprot和7.854U/mgprot(P0.05);其CAT酶的活性分別為45.833 U/mgprot和61.418U/mgprot(P0.05)。環(huán)境株CBS7137傳代前和傳5代后的SOD酶活性分別為:3.460U/mgprot和5.016 U/mgprot(P0.05);其CAT酶的活性分別為42.610U/mgprot和66.025 U/mgprot(P0.05)。環(huán)境株CBS8520傳代前和傳5代后的SOD酶活性分別為:4.750U/mgprot和7.115 U/mgprot(P0.05);其CAT酶的活性分別為57.082U/mgprot和68.964 U/mgprot(P0.05)。4.體外耐藥組:氟康唑耐藥誘導(dǎo)后,菌株CBS2479和CBS8904抗氧化酶活性隨誘導(dǎo)代數(shù)的遞增而逐漸升高。臨床標(biāo)準(zhǔn)株CBS2479誘導(dǎo)前和誘導(dǎo)10代后的SOD酶活性分別為:6.221 U/mgprot和9.126 U/mgprot(P0.05);其CAT酶的活性分別為61.956 U/mgprot和86.738 U/mgprot(P0.05)。環(huán)境株CBS8904誘導(dǎo)前和誘導(dǎo)10代后的SOD酶活性分別為:3.838 U/mgprot和6.921 U/mgprot(P0.05);其CAT酶的活性分別為45.833 U/mgprot和74.128 U/mgprot(P0.05)。而在回復(fù)末期,菌株CBS2479和CBS8904抗氧化酶SOD和CAT活性逐漸恢復(fù)至正常水平。結(jié)論1.T.asahii臨床組菌株SOD和CAT酶活性顯著高于環(huán)境組。體內(nèi)傳代組菌株的抗氧化酶活性隨傳代次數(shù)的遞增而逐漸升高;至傳代末期第5代菌株SOD和CAT酶活性顯著高于傳代前;且其CAT酶活性也明顯高于環(huán)境組。耐藥組菌株抗氧化酶活性隨誘導(dǎo)代數(shù)的遞增而逐漸升高;至誘導(dǎo)末期第10代菌株SOD和CAT酶活性顯著高于誘導(dǎo)前;且其SOD和CAT酶活性均明顯高于環(huán)境組。2.不同來源T.asahii抗氧化能力不同,主要體現(xiàn)在抗氧化酶活性的不同,其中,臨床組菌株抗氧化能力最強(qiáng);體內(nèi)傳代組菌株和耐藥組菌株次之;環(huán)境組菌株最低。
【關(guān)鍵詞】：過氧化氫酶 超氧化物歧化酶 阿薩希毛孢子菌
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R756
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 常用縮寫詞中英文對(duì)照表12-14
• 前言14-16
• 技術(shù)路線16-17
• 1 材料與方法17-24
• 1.1 材料17-22
• 1.2 方法22-23
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析23-24
• 2 結(jié)果24-29
• 2.1 T.asahii環(huán)境組與臨床組抗氧化酶活性結(jié)果24-25
• 2.2 T.asahii體內(nèi)傳代組抗氧化酶活性結(jié)果25-26
• 2.3 T.asahii耐藥組組抗氧化酶活性結(jié)果26-29
• 3 討論29-32
• 4 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-36
• 綜述36-42
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果42-44
• 致謝44-45
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷45

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;提高宿主}D~T黃嘌呤氧化酶活性對(duì)流行性乙型腦炎病毒感染性的影響[J];浙醫(yī)學(xué)報(bào);1965年03期

2 趙習(xí)Y，

本文編號(hào)：778162