發(fā)布時間：2017-08-28 14:36

  本文關(guān)鍵詞：探討激活HO-1對利福平所致肝毒性的影響

  更多相關(guān)文章： 利福平 血紅素加氧酶-1 血晶素 氧化應(yīng)激損傷

【摘要】：背景:據(jù)世界衛(wèi)生組織2015年結(jié)核病報告,全球2014年約有960萬人患結(jié)核病,150萬人因此喪失生命,給人類的健康帶來極大的威脅。抗結(jié)核化學(xué)藥物療法是重要的結(jié)核病防治武器,但也存在諸多問題有待解決。除了耐藥以外,抗結(jié)核藥物的不良反應(yīng)也直接影響結(jié)核病的控制效果,常常使治療中斷或方案更改,導(dǎo)致療效降低和耐藥等。利福平(Rifampicin,RFP)是世界衛(wèi)生組織推薦的、不可替代的一線抗結(jié)核藥,但具有肝毒性。尤其在合用異煙肼(Isoniazid,INH)時,肝毒性發(fā)生的機(jī)率明顯增加,有時甚至發(fā)生急性肝衰竭危及生命。然而,RFP引起肝損傷(Anti-tuberculosis drug induced liver injury,ATLI)機(jī)制尚不清楚。有研究表明,氧化應(yīng)激損傷是RFP合用INH致肝毒性的重要機(jī)制。RFP可誘導(dǎo)細(xì)胞色素P450活性加強(qiáng),增加INH代謝產(chǎn)物生成,從而消耗肝細(xì)胞內(nèi)的谷胱甘肽(Glutathione,GSH),最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。既往研究表明,血紅素加氧酶-1(Heme oxygenase-1,HO-1)是血紅素分解代謝的限速酶。它在分解血紅素形成膽紅素的過程中發(fā)揮重要作用,參與了膽紅素代謝的調(diào)控;能保護(hù)氧化應(yīng)激狀態(tài)下的細(xì)胞,是機(jī)體抗氧化應(yīng)激損傷之防御系統(tǒng)中的重要分子。因此,HO-1很可能在RFP肝毒性發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。本研究擬在體外細(xì)胞模型上初步確定rfp對肝細(xì)胞的毒性效應(yīng),以及其對肝臟的氧化應(yīng)激損傷。再從細(xì)胞和動物兩個水平探討血晶素(hemin)活化ho-1,探討其是否能在rfp所致肝毒性中發(fā)揮保護(hù)效應(yīng),為臨床干預(yù)rfp誘導(dǎo)的肝損傷尋找治療靶點。目的:研究激活ho-1對rfp所致肝毒性的保護(hù)作用。方法:1)體外實驗:不同濃度(10μm、50μm、100μm)rfp處理hepg2細(xì)胞24、48和72h,cck-8檢測rfp對細(xì)胞的毒性作用,并確定藥物作用的最適濃度;檢測細(xì)胞上清液中alt、ast含量變化,細(xì)胞裂解液中mda、gsh-px、sod的水平,以此確定是否存在氧化應(yīng)激損傷;激動劑hemin誘導(dǎo)ho-1表達(dá)增加后再次檢測以上指標(biāo)觀察其變化;rt-pcr、westernblot檢測細(xì)胞蛋白中ho-1表達(dá)情況。2)體內(nèi)實驗:將balb/c小鼠隨機(jī)分為5組,每組8只。分別為生理鹽水(normalsaline,ns)對照組、dmso溶劑對照組、rfp模型組(200mg/kg)、hemin對照組、hemin+rfp干預(yù)組,連續(xù)灌胃15天。檢測小鼠血清中總膽紅素(totalbilirubin,tb),丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanineaminotransferase,alt)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartateaminotransferase,ast);檢測肝勻漿中丙二醛(malondialdehyde,mda)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,sod)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathioneperoxidase,gsh-px)水平;he染色觀察各組病理形態(tài)的改變;westernblot法測定各組肝組織中ho-1蛋白的表達(dá)。結(jié)果:體外實驗:cck-8結(jié)果表明rfp對hepg2細(xì)胞毒性作用呈時間劑量依賴性;rfp組細(xì)胞ast、alt、mda明顯升高,而gsh-px、SOD顯著降低;給予Hemin預(yù)處理能顯著誘導(dǎo)HO-1的表達(dá),并對Hep G2細(xì)胞產(chǎn)生保護(hù)作用,表現(xiàn)為ALT、AST和MDA濃度明顯降低,GSH-Px、SOD活性升高。RT-PCR及Western blot顯示Hemin預(yù)處理后Hep G2細(xì)胞中HO-1表達(dá)明顯增高。體內(nèi)試驗:RFP模型組與DMSO溶劑對照組、NS對照組相比,總膽紅素、AST、ALT、MDA明顯升高,GSH-Px、SOD顯著降低;Hemin+RFP組較RFP組,AST、ALT、MDA顯著降低,GSH-Px、SOD上升,提示肝臟氧化應(yīng)激損傷程度較RFP模型組減輕;肉眼觀察,可見RFP模型組小鼠肝臟黃染,肝臟及膽囊腫大,病理切片示RFP模型組小鼠肝臟中央靜脈周圍肝細(xì)胞呈水樣變性;而Hemin+RFP組肝小葉完整,僅少量細(xì)胞呈水樣變。結(jié)論:RFP可通過氧化應(yīng)激引起肝損傷,激活HO-1表達(dá)可減輕體內(nèi)外RFP引起的氧化應(yīng)激損傷,提示HO-1在RFP致肝毒性中起到保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：利福平 血紅素加氧酶-1 血晶素 氧化應(yīng)激損傷
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R52;R575
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-14
• 1 材料與方法14-24
• 2 實驗結(jié)果24-45
• 3 討論45-47
• 全文總結(jié)47-48
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 文獻(xiàn)綜述51-62
• 參考文獻(xiàn)57-62
• 致謝62-63
• 攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文63

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 黃家惠;陳熙;張程;陶莉;何薇;齊軍;張大剛;徐德祥;;利福平誘導(dǎo)小鼠脂肪肝實驗?zāi)Ｐ偷难芯縖J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2015年07期

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本文編號：748137