本文關(guān)鍵詞：我國北方地區(qū)家畜和媒介蜱攜帶新型無形體的調(diào)查

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【摘要】：一、研究背景無形體是一類由蜱為主要傳播媒介、哺乳動物為宿主、可造成人畜共患病的病原體。它主要寄生于牛、羊等反芻動物的血細胞中,不僅可造成動物感染,還可對人類造成感染和致病,其引起的疾病被稱為無形體病:自1994年在美國首次發(fā)現(xiàn)人感染嗜吞噬細胞無形體的病例后,Anaplasma phagocytophilum引發(fā)的人粒細胞無形體病在美國的流行情況呈逐年遞增的趨勢。此后,在歐洲和中國也出現(xiàn)了人粒細胞無形體病的暴發(fā)。2007年,在塞浦路斯發(fā)現(xiàn)了一例感染綿羊無形體變種的病例。從20世紀80年代開始,共有三十余種新發(fā)蜱媒微生物在中國大陸被發(fā)現(xiàn)并鑒定,其中無形體科的微生物包括:查菲埃立克體Ehrlichia chaffeensis,犬埃立克體Ehrlichia canis,“西藏埃立克體”Ehrlichia sp.Tibet,嗜吞噬細胞無形體Anaplasma phagocytophilum,扁平無形體Anaplasma platys和米庫爾新埃立克體Candidatus Neoehrlichia mikurensis。這些潛在病原微生物的傳播媒介包括了17個不同蜱種,宿主動物則包括牛、綿羊、山羊、馬、野兔、牦牛以及嚙齒動物等。北京市和黑龍江省均為我國重要的蜱媒傳染病的自然疫源地,在媒介蜱和宿主動物中曾發(fā)現(xiàn)多種蜱媒病原體。不僅如此,在北京地區(qū),已經(jīng)報道的人感染的新發(fā)蜱媒病原體有嗜吞噬細胞無形體A.phagocytophilum和查菲埃立克體E.chaffeensis;在黑龍江地區(qū),已報道的人感染蜱媒病原體包括:黑龍江立克次體Rickettsia heilongjiangensis,歐拉蒂立克次體Rickettsia raoultii,西伯利亞立克次體Rickettsia sibirica sp.BJ-90,塔拉塞維奇立克次體Candidatus Rickettsia tarasevichiae,米庫爾新埃立克體Candidatus Neoehrlichia mikurensis,以及巴貝西蟲、伯氏疏螺旋體、蜱傳腦炎病毒等。由此可知,作為我國重要的蜱媒傳染病自然疫源地,對這兩個地區(qū)的家畜和媒介蜱開展無形體的調(diào)查是勢在必行的。近年來,陸續(xù)報道了一些新發(fā)現(xiàn)的無形體種,但對這些新無形體種的研究還僅僅停留在起步的階段。在分子生物學(xué)鑒定方面,這些新種大多只得到了少數(shù)1-2個基因片段的序列;在流行因素方面,也少見對于病原體宿主動物、傳播媒介和自然疫源地的調(diào)查。因此有必要對這些新發(fā)現(xiàn)的無形體種進行更為深入的調(diào)查研究。二、研究目的本研究通過對我國華北地區(qū)和東北地區(qū)的兩個調(diào)查點的家畜和媒介蜱樣本進行無形體的調(diào)查,旨在了解新發(fā)無形體在該地區(qū)宿主和媒介生物中的流行情況;并試圖在這兩個地區(qū)發(fā)現(xiàn)并鑒定出新的無形體種,進而調(diào)查該無形體的傳播媒介和動物宿主,發(fā)掘潛在的自然疫源地。三、研究方法本研究選取了北京市房山區(qū)和黑龍江省牡丹江地區(qū)兩個調(diào)查點,在2012-2015年間對這兩個地區(qū)的媒介蜱和家畜全血進行標本采集。采用全血/組織dna提取試劑盒對樣本dna進行提取,然后采用聚合酶鏈式反應(yīng)(pcr)對模板進行無形體基因片段的擴增檢測,并進行序列分析和系統(tǒng)進化發(fā)育的分析。四、研究結(jié)果1、標本采集媒介蜱的采集:本研究在2012-2015年的5-9月期間,在北京市房山區(qū)共采集游離的長角血蜱(haemaphysalislongicornis)311只,其中成蜱95只,若蜱156只,幼蜱60只。2014年6月,在黑龍江省牡丹江市周邊地區(qū)共采集野生游離成蜱標本628只,其中全溝硬蜱(ixodespersulcatus)447只,嗜群血蜱(haemaphysalisconcinna)181只。家畜全血的采集:2012-2015年期間,在北京市房山區(qū)共采集153份山羊全血樣本,在黑龍江省牡丹江地區(qū)共采集家畜全血標本550份(其中山羊137份,綿羊208份,牛205份)。2、山羊無形體a.capra的調(diào)查家畜中a.capra的檢測結(jié)果:通過對家畜全血樣本進行無形體16srrna和glta基因的檢測,發(fā)現(xiàn)并鑒定出一新無形體種:山羊無形體“anaplasmacapra”。在北京房山地區(qū),檢測到153只山羊中有67只感染a.capra,感染率為43.8%。在黑龍江牡丹江地區(qū),從205只牛中檢測到1只牛攜帶a.capra的另一種的基因型,感染率為0.5%。媒介蜱中a.capra的檢測結(jié)果:在北京房山地區(qū),95只長角血蜱成蜱中有3只攜帶山羊無形體a.capra,陽性率為3.2%,未檢測到若蜱和幼蜱攜帶a.capra。成蜱的a.capra陽性率高于若蜱和幼蜱,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(fisher精確檢驗:p=0.035)。在牡丹江地區(qū),從447只全溝硬蜱中檢測到13只攜帶a.capra,陽性率為2.9%,未檢測到嗜群血蜱攜帶a.capra。3、“北京無形體”的調(diào)查家畜攜帶“北京無形體”的檢測結(jié)果:通過對家畜全血樣本進行無形體的篩查,并通過16S rRNA(rrs)、gltA和groEL三個基因片段的確認,發(fā)現(xiàn)并鑒定出一新無形體種:北京地區(qū)的153只山羊中有3只檢測呈陽性,感染率為2.0%。在黑龍江牡丹江地區(qū),208只綿羊中有1只檢測到該無形體呈陽性,感染率為0.5%,未在牡丹江地區(qū)的山羊和牛中檢測出攜帶該無形體。鑒于這一無形體種是在北京地區(qū)山羊中鑒定出來的,為方便后文敘述,本文中暫命名為“北京無形體Anaplasma sp.Beijing”。媒介蜱攜帶“北京無形體”的檢測結(jié)果:對北京市房山區(qū)所采集的311只長角血蜱(成蜱95只,若蜱156只,幼蜱60只)進行檢測,未檢測出陽性。五、研究結(jié)論本研究通過對北京房山地區(qū)和黑龍江牡丹江地區(qū)的家畜進行無形體的篩查,發(fā)現(xiàn)并鑒定了新無形體種“山羊無形體Anaplasma capra”,并發(fā)現(xiàn)山羊和牛均為該病原體的動物宿主。通過對媒介蜱中A.capra的調(diào)查,在牡丹江地區(qū)發(fā)現(xiàn)了攜帶的A.capra的媒介生物全溝硬蜱;在北京地區(qū)發(fā)現(xiàn)了攜帶A.capra媒介生物長角血蜱。通過對北京房山地區(qū)和黑龍江牡丹江地區(qū)家畜全血樣本進行PCR檢測,并對其三個基因片段(16S rRNA、gltA、groEL)進行了分子生物學(xué)鑒定,發(fā)現(xiàn)了新無形體種“北京無形體”。通過對家畜和媒介蜱攜帶“北京無形體”進行調(diào)查,發(fā)現(xiàn)山羊和綿羊均為該無形體的動物宿主。并通過對兩個調(diào)查點的調(diào)查,為該無形體自然疫源地的發(fā)現(xiàn)提供了線索和調(diào)查依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：蜱媒傳染病 山羊無形體 動物宿主 自然疫源地
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.6;R513
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 摘要6-9
• Abstract9-12
• 前言12-14
• 第一部分 我國北方地區(qū)家畜和媒介蜱攜帶山羊無形體的調(diào)查14-32
• 引言14
• 1. 材料與方法14-19
• 1.1 現(xiàn)場調(diào)查14
• 1.2 家畜全血樣本采集14
• 1.3 蜱標本采集14
• 1.4 標本的儲存14-15
• 1.5 家畜全血標本的DNA提取15
• 1.6 蜱標本的處理和DNA提取15
• 1.7 PCR擴增檢測15-17
• 1.8 瓊脂糖凝膠電泳17
• 1.9 測序和序列分析17-18
• 1.10 數(shù)據(jù)分析18
• 1.11 實驗所用主要的試劑18-19
• 1.12 實驗所用主要的儀器19
• 2. 結(jié)果19-29
• 2.1 樣本采集結(jié)果19-20
• 2.2 山羊無形體A.capra的鑒定和檢測結(jié)果20-24
• 2.3 A.capra的序列分析24-25
• 2.4 遺傳進化分析25-29
• 3. 討論29-32
• 3.1 檢測方法的選取29
• 3.2 山羊無形體A.capra的發(fā)現(xiàn)和鑒定29-30
• 3.3 A.capra傳播媒介的確認30
• 3.4 A.capra動物宿主的確認30
• 3.5 A.capra的自然疫源地分布30-31
• 3.6 醫(yī)學(xué)及公共衛(wèi)生意義31
• 3.7 A.capra傳播能力的探討31
• 3.8 其他新無形體種的發(fā)現(xiàn)31-32
• 第二部分 我國北方地區(qū)家畜和媒介蜱攜帶“北京無形體”的調(diào)查32-44
• 引言32
• 1. 材料與方法32-35
• 1.1 現(xiàn)場調(diào)查32
• 1.2 家畜全血樣本采集32
• 1.3 蜱標本采集32
• 1.4 標本的儲存32
• 1.5 家畜全血標本的DNA提取32
• 1.6 蜱標本的處理和DNA提取32
• 1.7 PCR擴增檢測32-34
• 1.8 瓊脂糖凝膠電泳34
• 1.9 測序和序列分析34
• 1.10 實驗所用主要的試劑34-35
• 1.11 實驗所用主要的儀器35
• 2. 結(jié)果35-40
• 2.1 樣本采集結(jié)果35
• 2.2 “北京無形體”的鑒定和檢測結(jié)果35-38
• 2.3 序列分析38-39
• 2.4 遺傳進化分析39-40
• 3. 討論40-44
• 3.1 檢測方法的選取40-41
• 3.2 “北京無形體”的發(fā)現(xiàn)與鑒定41
• 3.3 “北京無形體”動物宿主的討論41
• 3.4 “北京無形體”傳播媒介的討論41-42
• 3.5 “北京無形體”的自然疫源地42
• 3.6 醫(yī)學(xué)和公共衛(wèi)生意義42-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻45-48
• 個人簡介48-49
• 致謝49

【相似文獻】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王亞偉;我國北方地區(qū)家畜和媒介蜱攜帶新型無形體的調(diào)查[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2016年

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本文編號：740430