本文關鍵詞：日本血吸蟲感染T細胞缺陷型小鼠誘導肝蟲卵肉芽腫研究

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【摘要】：[目的]利用T細胞缺陷型BALB/c裸鼠建立日本血吸蟲病動物模型,研究T細胞缺失后血吸蟲感染不同時間點肝臟病理變化和肝纖維化程度;研究T細胞缺失后B細胞及MDSC在血吸蟲感染不同時間點的增殖水平以及與肝蟲卵肉芽腫和纖維化病變的關系。從而評價T細胞在小鼠日本血吸蟲病肝纖維化過程中的作用,為日本血吸蟲病肝纖維化的防治提供新思路和新途徑。[方法]將80只BALB/c裸鼠隨機分為8組(0w、2w、4w、6w、8w、10w、12w、16w),用日本血吸蟲尾蚴(18±2條/只),皮膚敷貼感染,于不同時間點取血、脾臟、骨髓和肝臟組織進行試驗。HE和Masson染色觀察BALB/c裸鼠肝組織病理變化;免疫組化檢測肝組織中Ig G和Ig E水平;ELISA檢測血清的Ig G和Ig E水平;化學發(fā)光法檢測血清中透明質酸(HA)、三型前膠原N端肽(PⅢP N-P)、層粘連蛋白(LN)和Ⅳ型膠原蛋白(Ⅳ-C)的表達水平;FCM分析肝臟、脾臟、血液和骨髓中B細胞(CD19+細胞)與MDSCs(D11b+Gr-1+細胞)的增殖水平。[結果]BALB/c裸鼠感染日本血吸蟲后,肝組織在不同時間點出現(xiàn)不同程度的炎癥反應。感染早期(2w~4w):肉眼觀肝臟腫大,質軟,無蟲卵顆粒狀結節(jié);HE染色可見肝組織出現(xiàn)以為分葉核細胞主的炎癥細胞浸潤及膠原蛋白含量的增加。蟲卵肉芽腫形成期(4w~8w):肉眼可見肝臟顏色變深、腫大、質地變硬,表面有蟲卵顆粒狀結節(jié);HE染色可見大量的分葉核細胞、多核巨細胞及泡沫細胞浸潤為主的炎癥細胞浸潤和蟲卵肉芽腫形成;Masson染色可見肝組織膠原蛋白含量顯著性增加,門管區(qū)和肝小葉有膠原蛋白沉積,向肝纖維化病變轉化。慢性纖維化早期(8w~12w):肉眼可見肝臟呈深褐色,質硬,表面大量顆粒狀結節(jié);HE染色可見大量炎性細胞浸潤與蟲卵結節(jié);Masson組織染色可見肝纖維化病灶與大量膠原蛋白沉積。慢性纖維化晚期(12w~16w):與感染8w~12w比較,肝臟呈褐色,顏色變淺,質地變軟,顆粒狀結節(jié)減少;HE染色可見肝臟蟲卵結節(jié)開始液化并形成空洞。血清ELISA和肝組織免疫組化揭示:Ig E在正常對照組與感染組之間均未檢測到。化學發(fā)光技術檢測血清結果表明:HA含量在裸鼠感染組第6w~12w顯著性升高(P0.05),第10w為峰值(3830.50),其它感染組與對照組比較無顯著性差異;PⅢP N-P、LN、Ⅳ-C的含量在各組間無統(tǒng)計學意義(P0.05);與日本血吸蟲感染正常的BALB/c小鼠比較,HA、PⅢP N-P、LN及Ⅳ-C的含量均顯著性低于裸鼠,(P0.05)。FCM結果顯示:骨髓中,MDSCs(CD11b+Gr-1+細胞)比率在第4w、8w、16w顯著性升高,(P0.05);血液中,感染組MDSCs比率均高于對照組,(P0.05);肝臟中,MDSCs在感染第2w~8w升高,但無顯著性差異,而第10w~16w則顯著性低于正常對照組,(P0.05);脾臟中,MDSCs在感染第8w顯著性升高,而第10w顯著性降低,(P0.05)。對B細胞檢測顯示:B細胞比例僅在血吸蟲感染第2w的骨髓中顯著性升高,(P0.05),其它感染組均顯著性低于正常對照組,(P0.05),在肝臟和脾臟中,除感染第2w外,其它各感染組均顯著性下降,其中感染組肝組織第4w、6w、10w、12w、16w與正常組比較具有極顯著性差異,(P0.01);在血液中,感染組均顯著性降低于正常對照組,有統(tǒng)計學意義,(P0.05)。[結論](1)T細胞缺失的裸鼠感染日本血吸蟲后仍可形成肝蟲卵肉芽腫及纖維化病,說明T細胞可能不是形成肝臟免疫病理變化的唯一重要的免疫細胞。(2)在肝蟲卵肉芽腫形成中發(fā)現(xiàn)大量的分葉核細胞、多核巨細胞及泡沫細胞浸潤,說明固有免疫細胞參與了炎癥反應和蟲卵肉芽腫的形成。
【關鍵詞】：日本血吸蟲病 蟲卵肉芽腫 裸鼠 B細胞
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R532.21
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-13
• 常用的英文縮寫13-17
• 第1章 緒論17-20
• 第2章 實驗材料20-23
• 2.1 主要儀器設備及材料20-21
• 2.2 主要實驗試劑21-23
• 第3章 實驗方法步驟23-30
• 3.1 購建Balb/c裸鼠日本血吸蟲病實驗動物模型23
• 3.2 組織病理學檢測23-24
• 3.3 化學發(fā)光法檢測血清中肝纖維化指標24-25
• 3.4 流式細胞術測定CD11b_+Gr-1_+、CD19_+細胞數(shù)量25-27
• 3.5 ELISA檢測IgE抗體27-28
• 3.6 免疫組織化學法檢測感染小鼠肝組織中Ig E水平28-29
• 3.7 統(tǒng)計學方法處理數(shù)據(jù)29-30
• 第4章 實驗結果30-52
• 4.1 實驗動物體征與死亡情況30
• 4.2 肝臟病理組織學改變30-35
• 4.3 FCM測定血吸蟲感染組MDSC和B細胞比率35-45
• 4.4 血清中肝纖維化指標檢測45-49
• 4.5 裸鼠血清中特異性抗體Ig E檢測49-50
• 4.6 免疫組織化法檢測肝組織中特異性IgE50
• 4.7 免疫組織化法檢測肝組織中B細胞的表達50-52
• 第５章 討論52-56
• 第6章 結論56-57
• 參考文獻57-60
• 文獻綜述60-68
• 參考文獻65-68
• 本研究受以下課題資助68-69
• 研究成果及論文69-70
• 致謝70

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 馮安貴;高勇強;梁瑜;吳媛;陳鵠;張愉快;王可耕;陳姍姍;肖建華;;Sjcb2 DNA疫苗在血吸蟲感染小鼠中的保護性作用研究[J];中國人獸共患病學報;2014年07期

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本文編號：680586