本文關(guān)鍵詞：日本血吸蟲感染T細(xì)胞缺陷型小鼠誘導(dǎo)肝蟲卵肉芽腫研究

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【摘要】：[目的]利用T細(xì)胞缺陷型BALB/c裸鼠建立日本血吸蟲病動物模型,研究T細(xì)胞缺失后血吸蟲感染不同時(shí)間點(diǎn)肝臟病理變化和肝纖維化程度;研究T細(xì)胞缺失后B細(xì)胞及MDSC在血吸蟲感染不同時(shí)間點(diǎn)的增殖水平以及與肝蟲卵肉芽腫和纖維化病變的關(guān)系。從而評價(jià)T細(xì)胞在小鼠日本血吸蟲病肝纖維化過程中的作用,為日本血吸蟲病肝纖維化的防治提供新思路和新途徑。[方法]將80只BALB/c裸鼠隨機(jī)分為8組(0w、2w、4w、6w、8w、10w、12w、16w),用日本血吸蟲尾蚴(18±2條/只),皮膚敷貼感染,于不同時(shí)間點(diǎn)取血、脾臟、骨髓和肝臟組織進(jìn)行試驗(yàn)。HE和Masson染色觀察BALB/c裸鼠肝組織病理變化;免疫組化檢測肝組織中Ig G和Ig E水平;ELISA檢測血清的Ig G和Ig E水平;化學(xué)發(fā)光法檢測血清中透明質(zhì)酸(HA)、三型前膠原N端肽(PⅢP N-P)、層粘連蛋白(LN)和Ⅳ型膠原蛋白(Ⅳ-C)的表達(dá)水平;FCM分析肝臟、脾臟、血液和骨髓中B細(xì)胞(CD19+細(xì)胞)與MDSCs(D11b+Gr-1+細(xì)胞)的增殖水平。[結(jié)果]BALB/c裸鼠感染日本血吸蟲后,肝組織在不同時(shí)間點(diǎn)出現(xiàn)不同程度的炎癥反應(yīng)。感染早期(2w~4w):肉眼觀肝臟腫大,質(zhì)軟,無蟲卵顆粒狀結(jié)節(jié);HE染色可見肝組織出現(xiàn)以為分葉核細(xì)胞主的炎癥細(xì)胞浸潤及膠原蛋白含量的增加。蟲卵肉芽腫形成期(4w~8w):肉眼可見肝臟顏色變深、腫大、質(zhì)地變硬,表面有蟲卵顆粒狀結(jié)節(jié);HE染色可見大量的分葉核細(xì)胞、多核巨細(xì)胞及泡沫細(xì)胞浸潤為主的炎癥細(xì)胞浸潤和蟲卵肉芽腫形成;Masson染色可見肝組織膠原蛋白含量顯著性增加,門管區(qū)和肝小葉有膠原蛋白沉積,向肝纖維化病變轉(zhuǎn)化。慢性纖維化早期(8w~12w):肉眼可見肝臟呈深褐色,質(zhì)硬,表面大量顆粒狀結(jié)節(jié);HE染色可見大量炎性細(xì)胞浸潤與蟲卵結(jié)節(jié);Masson組織染色可見肝纖維化病灶與大量膠原蛋白沉積。慢性纖維化晚期(12w~16w):與感染8w~12w比較,肝臟呈褐色,顏色變淺,質(zhì)地變軟,顆粒狀結(jié)節(jié)減少;HE染色可見肝臟蟲卵結(jié)節(jié)開始液化并形成空洞。血清ELISA和肝組織免疫組化揭示:Ig E在正常對照組與感染組之間均未檢測到�；瘜W(xué)發(fā)光技術(shù)檢測血清結(jié)果表明:HA含量在裸鼠感染組第6w~12w顯著性升高(P0.05),第10w為峰值(3830.50),其它感染組與對照組比較無顯著性差異;PⅢP N-P、LN、Ⅳ-C的含量在各組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與日本血吸蟲感染正常的BALB/c小鼠比較,HA、PⅢP N-P、LN及Ⅳ-C的含量均顯著性低于裸鼠,(P0.05)。FCM結(jié)果顯示:骨髓中,MDSCs(CD11b+Gr-1+細(xì)胞)比率在第4w、8w、16w顯著性升高,(P0.05);血液中,感染組MDSCs比率均高于對照組,(P0.05);肝臟中,MDSCs在感染第2w~8w升高,但無顯著性差異,而第10w~16w則顯著性低于正常對照組,(P0.05);脾臟中,MDSCs在感染第8w顯著性升高,而第10w顯著性降低,(P0.05)。對B細(xì)胞檢測顯示:B細(xì)胞比例僅在血吸蟲感染第2w的骨髓中顯著性升高,(P0.05),其它感染組均顯著性低于正常對照組,(P0.05),在肝臟和脾臟中,除感染第2w外,其它各感染組均顯著性下降,其中感染組肝組織第4w、6w、10w、12w、16w與正常組比較具有極顯著性差異,(P0.01);在血液中,感染組均顯著性降低于正常對照組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,(P0.05)。[結(jié)論](1)T細(xì)胞缺失的裸鼠感染日本血吸蟲后仍可形成肝蟲卵肉芽腫及纖維化病,說明T細(xì)胞可能不是形成肝臟免疫病理變化的唯一重要的免疫細(xì)胞。(2)在肝蟲卵肉芽腫形成中發(fā)現(xiàn)大量的分葉核細(xì)胞、多核巨細(xì)胞及泡沫細(xì)胞浸潤,說明固有免疫細(xì)胞參與了炎癥反應(yīng)和蟲卵肉芽腫的形成。
【關(guān)鍵詞】：日本血吸蟲病 蟲卵肉芽腫 裸鼠 B細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R532.21
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-13
• 常用的英文縮寫13-17
• 第1章 緒論17-20
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料20-23
• 2.1 主要儀器設(shè)備及材料20-21
• 2.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑21-23
• 第3章 實(shí)驗(yàn)方法步驟23-30
• 3.1 購建Balb/c裸鼠日本血吸蟲病實(shí)驗(yàn)動物模型23
• 3.2 組織病理學(xué)檢測23-24
• 3.3 化學(xué)發(fā)光法檢測血清中肝纖維化指標(biāo)24-25
• 3.4 流式細(xì)胞術(shù)測定CD11b_+Gr-1_+、CD19_+細(xì)胞數(shù)量25-27
• 3.5 ELISA檢測IgE抗體27-28
• 3.6 免疫組織化學(xué)法檢測感染小鼠肝組織中Ig E水平28-29
• 3.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法處理數(shù)據(jù)29-30
• 第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-52
• 4.1 實(shí)驗(yàn)動物體征與死亡情況30
• 4.2 肝臟病理組織學(xué)改變30-35
• 4.3 FCM測定血吸蟲感染組MDSC和B細(xì)胞比率35-45
• 4.4 血清中肝纖維化指標(biāo)檢測45-49
• 4.5 裸鼠血清中特異性抗體Ig E檢測49-50
• 4.6 免疫組織化法檢測肝組織中特異性IgE50
• 4.7 免疫組織化法檢測肝組織中B細(xì)胞的表達(dá)50-52
• 第５章 討論52-56
• 第6章 結(jié)論56-57
• 參考文獻(xiàn)57-60
• 文獻(xiàn)綜述60-68
• 參考文獻(xiàn)65-68
• 本研究受以下課題資助68-69
• 研究成果及論文69-70
• 致謝70

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 馮安貴;高勇強(qiáng);梁瑜;吳媛;陳鵠;張愉快;王可耕;陳姍姍;肖建華;;Sjcb2 DNA疫苗在血吸蟲感染小鼠中的保護(hù)性作用研究[J];中國人獸共患病學(xué)報(bào);2014年07期

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本文編號：680586