本文關(guān)鍵詞：博爾納病病毒感染人少突膠質(zhì)細(xì)胞差異microRNA表達(dá)和生物信息學(xué)分析

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【摘要】：背景:博爾納病病毒(Borna disease virus,BDV)是引起博爾納病的病原體,最先被發(fā)現(xiàn)于德國博爾納鎮(zhèn)的軍馬中,引起急性腦脊髓非化膿性炎癥的地方性流行病。BDV是一種單股負(fù)鏈、非節(jié)段性、非細(xì)胞溶性的非逆轉(zhuǎn)錄病毒,具有強(qiáng)烈的噬神經(jīng)性。BDV能感染大部分溫血?jiǎng)游?包括哺乳動(dòng)物和鳥類等。雖然有關(guān)BDV在人類的自然感染和致病還缺乏直接證據(jù),也未有爆發(fā)流行,但是有文獻(xiàn)對(duì)精神病人的流行病學(xué)調(diào)查顯示BDV有較高的陽性率,而且體外實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明BDV確能感染人神經(jīng)細(xì)胞,并對(duì)其增殖凋亡、代謝、蛋白組學(xué)和信號(hào)通路等產(chǎn)生明顯影響。但是BDV對(duì)于人神經(jīng)系統(tǒng)的miRNA研究較為少見,其中人源病毒株Hu-H1對(duì)于人神經(jīng)系統(tǒng)及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的研究也鮮有報(bào)道。利用mi RNA芯片技術(shù)和RT-qPCR實(shí)驗(yàn)對(duì)miRNA進(jìn)行高通量篩選鑒定,結(jié)合生物信息學(xué)分析,提出miRNA與BDV感染新的假說和課題方向,增強(qiáng)對(duì)BDV感染的認(rèn)識(shí)。目的:本實(shí)驗(yàn)從miRNA的基本點(diǎn)出發(fā),旨在探討人源BDV病毒株Hu-H1干擾OL細(xì)胞miRNA的差異表達(dá)和生物學(xué)功能,為進(jìn)一步BDV致病病理機(jī)制提供新支點(diǎn)。方法:1.復(fù)蘇本實(shí)驗(yàn)保存的bdv長期感染的ol細(xì)胞,提取病毒液測定其滴度;擴(kuò)增本實(shí)驗(yàn)保存的pegfp-n1-p40和pegfp-n1-p24質(zhì)粒,用于后續(xù)細(xì)胞感染。2.復(fù)蘇本實(shí)驗(yàn)保存的無感染正常ol細(xì)胞,感染bdv-hu-h1病毒,與對(duì)照組ol細(xì)胞同時(shí)培養(yǎng)14天后,測定其感染率并提取rna;擴(kuò)增和轉(zhuǎn)染本實(shí)驗(yàn)保存的pegfp-n1-p40和pegfp-n1-p24質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染正常的ol細(xì)胞后提取rna。實(shí)驗(yàn)分為ol組、ol/bdv組、ol/p40組、ol/p24組和ol/con組。3.提取上述各組細(xì)胞rna進(jìn)行mirna芯片篩選實(shí)驗(yàn),將ol和ol/bdv組的差異mirnas進(jìn)行生物信息學(xué)分析。4.將芯片篩選的差異mirna進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量pcr(rt-qpcr)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,從而確定具體差異。結(jié)果:1.病毒感染ol細(xì)胞14天后達(dá)到完全感染;質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染ol細(xì)胞并且p24和p40蛋白正常表達(dá)。2.mirna芯片在正常的ol細(xì)胞和ol/bdv細(xì)胞中篩選出10個(gè)差異mirna,其中4個(gè)上調(diào)(mirna-1290,mirna-1908,mirna-424-5p,mirna-146a-5p),6個(gè)下調(diào)(mirna-296-3p,mirna-1244,mirna-3676-3p,mirna-4521,mirna-4433-3p,mirna-7-5p)。3.將上述差異mirna進(jìn)行生物信息學(xué)(pathway和go)分析和差異miRNA靶基因的預(yù)測,分析對(duì)BDV對(duì)OL細(xì)胞相關(guān)信號(hào)通路和生物學(xué)功能的干擾和影響。4.RT-q PCR實(shí)驗(yàn)將上述差異miRNA進(jìn)一步驗(yàn)證,miRNA-1290,miRNA-1908,miRNA-424-5p,miRNA-146a-5p,mi RNA-296-3p,miRNA-3676-3p,miRNA-7-5p等7個(gè)顯著下調(diào)(P0.05)。miRNA-1244和miRNA-4521沒有顯著性差異(P0.05)。結(jié)論:1.人源BDV病毒株Hu-H1可以干擾人少突膠質(zhì)細(xì)胞(OL細(xì)胞)某些miRNAs的正常表達(dá)。2.根據(jù)生物信息學(xué)的分析和對(duì)差異mi RNAs靶基因的預(yù)測,miRNA參與到BDV感染對(duì)宿主的致病過程。3.推測miRNA-424-p,miRNA-7-5p和mi RNA-296-3p可能參與到BDV感染宿主和細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等生物學(xué)過程;miRNA-146a可能參與BDV感染損害宿主學(xué)習(xí)記憶功能的過程。
【關(guān)鍵詞】：博爾納病病毒 人少突膠質(zhì)細(xì)胞 miRNAs 生物信息學(xué) RT-qPCR
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R511
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-18
• 參考文獻(xiàn)15-18
• 1 材料18-20
• 2 方法20-31
• 3 結(jié)果31-42
• 4 討論42-45
• 全文總結(jié)45-46
• 參考文獻(xiàn)46-49
• 文獻(xiàn)綜述49-58
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 致謝58-59
• 碩士期間發(fā)表的論文59

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Xiang-Dong Fu;;Non-coding RNA: a new frontier in regulatory biology[J];National Science Review;2014年02期

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本文編號(hào)：678073