本文關(guān)鍵詞：弓形蟲GRA15_Ⅱ效應(yīng)分子誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞極化抑制日本血吸蟲病肝纖維化的研究

  更多相關(guān)文章： 弓形蟲 GRA15_Ⅱ ROP16_(Ⅰ/Ⅲ) 日本血吸蟲 纖維化

【摘要】：背景：血吸蟲病被世界衛(wèi)生組織列為17種被忽視的熱帶疾病之一。在中國,日本血吸蟲病廣泛流行,主要分布于長江流域及其以南廣大地區(qū)。有研究顯示,宿主感染日本血吸蟲后4周內(nèi)以Th1應(yīng)答為主,隨后產(chǎn)生的蟲卵沉積在肝臟的微血管,誘導(dǎo)強(qiáng)烈的肉芽腫反應(yīng),機(jī)體免疫狀態(tài)逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)門h2應(yīng)答,由此促進(jìn)了肝臟纖維化乃至肝硬化的發(fā)生。肝臟巨噬細(xì)胞,亦即枯否細(xì)胞(kupffer cells)是肉芽腫的主要組成細(xì)胞。處于不同激活狀態(tài)的巨噬細(xì)胞分別具有促進(jìn)(或限制)炎癥和纖維化的作用,其中經(jīng)典激活的巨噬細(xì)胞(Classically activated macrophages, CAMs,或M1)減輕血吸蟲病肝纖維化,而選擇激活的巨噬細(xì)胞(Alternatively activated macrophages, AAMs,或M2))卻起著促進(jìn)纖維化病理進(jìn)程的作用。剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)是一種機(jī)會(huì)致病性的專性有核細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲,擁有十分廣泛的宿主。弓形蟲具有不同的基因型,分布在北美和歐洲的弓形蟲主要分為三種基因型：Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型；而我國則以Chinese 1(ToxoDB#9)型弓形蟲最為常見。弓形蟲分泌的多態(tài)性效應(yīng)蛋白與其自身毒力和宿主信號(hào)通路的調(diào)節(jié)有關(guān),其中致密顆粒蛋白15(Dense-granule proteinl5, GRA15)和棒狀體蛋白16(Rhoptry proteins 16, ROP16)可顯著影響弓形蟲對(duì)小鼠的致病性和宿主細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。研究報(bào)道,II型弓形蟲的多態(tài)性效應(yīng)分子GRA15 (GRA15Ⅱ)可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M1極化,而I型或III型弓形蟲ROP16 (ROP16Ⅰ/Ⅲ)使其向M2偏移。而Chinese 1基因型蟲株兼具有效應(yīng)分子GRA15n和ROP16Ⅰ/Ⅲ。目的：驗(yàn)證GRA15Ⅱ或ROP16Ⅰ/Ⅲ穩(wěn)轉(zhuǎn)后的小鼠巨噬細(xì)胞系極化方向,及其對(duì)肝星狀細(xì)胞纖維化相關(guān)蛋白分泌的影響,并且探討其對(duì)小鼠肝纖維化及機(jī)體免疫狀態(tài)的影響。方法：利用慢病毒包裝的重組質(zhì)粒導(dǎo)入小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7后構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系GRA15Ⅱ-RAW264.7、ROP16Ⅰ/Ⅲ-RAW264.7和]LV-RAW264.7。通過ELISA和qRT-PCR分別檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液和細(xì)胞mRAN的TNF-α、IL-4、IL6、IL-10、IL12p40和TGF-β1細(xì)胞因子表達(dá)水平,WB和qRT-PCR檢測(cè)細(xì)胞iNOS和Arg-1的表達(dá),Griess法和尿素法分別檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中NO和Urea的含量,驗(yàn)證巨噬細(xì)胞的極化方向。將上述三種穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系及正常對(duì)照RAW264.7四種細(xì)胞體外與小鼠肝星狀細(xì)胞系JS1共培養(yǎng),qRT-PCR和WB檢測(cè)JS1的α-SMA、Col I和TGF-β1表達(dá)水平差異。構(gòu)建感染日本血吸蟲尾蚴的Balb/c小鼠模型,分為四組,在感染尾蚴前一周及感染尾蚴當(dāng)天各組分別尾靜脈輸注含2×106GRA15n-RAW264.7、 LV-RAW264.7,RAW264.7和無細(xì)胞的150 u1 PBS溶液。感染尾蚴后第八周處死小鼠,檢測(cè)肝臟蟲卵數(shù),HE,Masson,免疫組化(α-SMA, ColⅠ, MMP13和TGF-β1),肝勻漿(Hyp,α-SMA, ColⅠ, MMP13, iNOS和Arg-1),mRNA (α-SMA, ColI,MMP13,TGF-β1, MMP13, iNOS和Arg-1)；血清HA和細(xì)胞因子(IL-4,IL10,TNF-α, IFN-γ);脾臟淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清和mRNA細(xì)胞因子(IL-4,IL10,TNF-α,IFN-γ).結(jié)果：(1)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系GRA15Ⅱ-RAW264.7的iNOS、TNF-α和IL12p40高表達(dá),提示巨噬細(xì)胞向M1偏移；而ROP16Ⅰ/Ⅲ-RAW264.7的Arg-1、IL-10和TGF-β1高表達(dá),顯示巨噬細(xì)胞向M2偏移。(2)GRA15n-RAW264.7與JS1共培養(yǎng)后,其抑制纖維化相關(guān)蛋白a-SMA和ColI的表達(dá),而ROP16Ⅰ/Ⅲ-RAW264.7與其共培養(yǎng)后作用相反。(3)GRA15Ⅱ-RAW264.7體內(nèi)干預(yù)實(shí)驗(yàn)組,肝臟HA,Hyp,α-SMA, ColⅠ和TGF-β1的表達(dá)下降,肝臟蟲卵計(jì)數(shù)減少,肝臟纖維化程度減輕。(4)GRA15Ⅱ-RAW264.7干預(yù)組Thl免疫反應(yīng)增強(qiáng),肝臟MMP13,iNOS表達(dá)增加,脾臟淋巴細(xì)胞和血清Thl細(xì)胞因子(TNF-α和IFN-γ)表達(dá)上調(diào),Th2細(xì)胞因子(IL-4和IL10)表達(dá)下降。結(jié)論：本研究結(jié)果顯示,GRA15n和ROP16Ⅰ/Ⅲ是介導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞極化的重要蟲源性效應(yīng)分子,可以分別使巨噬細(xì)胞向M1和M2方向極化。GRA15Ⅱ誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞體外可顯著抑制肝星狀細(xì)胞纖維化相關(guān)蛋白的表達(dá),體內(nèi)預(yù)先輸注干預(yù)可明顯減輕日本血吸蟲病肝纖維化程度。此研究發(fā)現(xiàn)可更好的深入理解M2/Th2為主介導(dǎo)的血吸蟲病肝纖維化機(jī)制,并提供一個(gè)寄生蟲來源的無毒性多肽制劑定向誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞M1偏移活化,從而為探索治療纖維化疾病的新策略提供線索。
【關(guān)鍵詞】：弓形蟲 GRA15_Ⅱ ROP16_(Ⅰ/Ⅲ) 日本血吸蟲 纖維化
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R532.21;R575.2
【目錄】：

• 英文縮略詞對(duì)照表5-8
• 中文摘要8-11
• 英文摘要11-15
• 1、前言15-20
• 2、材料與方法20-40
• 3、結(jié)果40-50
• 4、討論50-53
• 5、結(jié)論53-54
• 6、參考文獻(xiàn)54-61
• 1、個(gè)人簡(jiǎn)歷61-63
• 2、致謝63-64
• 3、綜述64-78
• 參考文獻(xiàn)72-78

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;豚鼠巨噬細(xì)胞經(jīng)P_(204)處理后的抗石英細(xì)胞毒作用[J];國外醫(yī)學(xué)參考資料(衛(wèi)生學(xué)分冊(cè));1976年04期

2 鄧俠進(jìn);;巨噬細(xì)胞的抗癌作用[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1979年02期

3 陸天才;;疾病對(duì)肺巨噬細(xì)胞的影響[J];煤礦醫(yī)學(xué);1982年01期

4 郭瑞清;祝彼得;;一種分離巨噬細(xì)胞的簡(jiǎn)單方法[J];濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1990年02期

5 謝志堅(jiān);巨噬細(xì)胞異質(zhì)性[J];醫(yī)學(xué)綜述;2001年06期

6 饒艷;運(yùn)動(dòng)及神經(jīng)內(nèi)分泌對(duì)巨噬細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)[J];體育與科學(xué);2002年05期

7 朱金元;;吸煙對(duì)肺巨噬細(xì)胞的影響[J];浙江醫(yī)學(xué)教育;2003年01期

8 張俊峰;過氧化物酶體增殖物激活受體與單核/巨噬細(xì)胞系[J];醫(yī)學(xué)綜述;2004年03期

9 韋錦學(xué);顧軍;;巨噬細(xì)胞的激活誘導(dǎo)死亡[J];生命科學(xué);2006年02期

10 李曉曦;郭寧;曹雪濤;;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞促進(jìn)腫瘤生長與轉(zhuǎn)移的研究現(xiàn)狀[J];中國腫瘤生物治療雜志;2008年01期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 史玉玲;王又明;豐美福;;巨噬細(xì)胞激活作用的研究[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第五次會(huì)議論文摘要匯編[C];1992年

2 吳國明;周輝;;巨噬細(xì)胞和創(chuàng)傷纖維化[A];2009年浙江省骨科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

3 李奇;王海杰;;透明質(zhì)酸對(duì)于淋巴結(jié)巨噬細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的影響[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會(huì)2002年年會(huì)文摘匯編[C];2002年

4 劉革修;歐大明;劉軍花;黃紅林;廖端芳;;丙丁酚在體外能抑制巨噬細(xì)胞脂質(zhì)氧化介導(dǎo)的低密度脂蛋白氧化并調(diào)節(jié)氧化巨噬細(xì)胞的分泌功能[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展（下冊(cè)）[C];1999年

5 葉金善;楊麗霞;郭瑞威;;環(huán)氧化酶-2/前列腺素E_2在血管緊張素Ⅱ刺激巨噬細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子中的作用[A];第十三次全國心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

6 秦帥;陳希;孔德明;;構(gòu)建由綠色熒光標(biāo)記巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因斑馬魚系[A];貴州省中西醫(yī)結(jié)合內(nèi)分泌代謝學(xué)術(shù)會(huì)論文匯編[C];2012年

7 武劍華;徐惠綿;;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在胃癌中的相關(guān)研究[A];第9屆全國胃癌學(xué)術(shù)會(huì)議暨第二屆陽光長城腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2014年

8 何軍;;血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體升高巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇水平[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第11次心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2009年

9 宋盛;周非凡;邢達(dá);;PDT誘導(dǎo)的凋亡細(xì)胞對(duì)巨噬細(xì)胞NO合成的影響[A];第七屆全國光生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2010年

10 張磊;朱建華;黃元偉;姚航平;;血管緊張素Ⅱ?qū)奘杉?xì)胞(THP-1重細(xì)胞)凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體表達(dá)的影響[A];浙江省免疫學(xué)會(huì)第五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2004年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 通訊員 李靜 記者 胡德榮;惡性腫瘤巨噬細(xì)胞未必皆“惡人”[N];健康報(bào);2014年

2 蘭克;以嘗試用巨噬細(xì)胞治癱瘓[N];科技日?qǐng)?bào);2000年

3 薛佳;免疫系統(tǒng)——人體的“衛(wèi)士”[N];保健時(shí)報(bào);2009年

4 記者 胡德榮;鐵泵蛋白“維穩(wěn)”鐵代謝作用首次闡明[N];健康報(bào);2011年

5 侯嘉 何新鄉(xiāng);硒的神奇功能[N];中國食品質(zhì)量報(bào);2003年

6 唐穎 倪兵 陳代杰;巨噬細(xì)胞泡沫化抑制劑研究快步進(jìn)行[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

7 劉元江;新發(fā)現(xiàn)解釋腫瘤為何易成“漏網(wǎng)之魚”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2007年

8 本報(bào)記者 侯嘉 通訊員 何新鄉(xiāng);今天你補(bǔ)硒了嗎[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

9 左志剛;升血小板藥使用注意[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2007年

10 記者 許琦敏;“鐵泵”蛋白幫助回收鐵元素[N];文匯報(bào);2011年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周赤燕;巨噬細(xì)胞MsrA對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的干預(yù)研究[D];武漢大學(xué);2013年

2 章桂忠;TIPE2蛋白調(diào)控細(xì)胞增殖和炎癥的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

3 張瑜;DKK1抑制巨噬細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積及其相關(guān)分子機(jī)制[D];山東大學(xué);2015年

4 孟濤;異丙酚對(duì)心臟收縮功能的抑制作用及其對(duì)巨噬細(xì)胞分泌功能調(diào)節(jié)的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

5 周興;基于酵母微囊構(gòu)建新型口服巨噬細(xì)胞靶向遞送系統(tǒng)的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 蔣興偉;Tim-3對(duì)巨噬細(xì)胞極化的調(diào)控機(jī)制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

7 劉伯玉;清道夫受體A介導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬鉤端螺旋體研究[D];上海交通大學(xué);2013年

8 楊紹俊;miRNA-155介導(dǎo)ESAT-6誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制及其在結(jié)核診斷中的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 翟光耀;單核/巨噬細(xì)胞Ly6C~(low)亞群在心肌梗死后瘢痕形成期的抗炎特性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

10 韓露;TRB3介導(dǎo)的脂肪組織巨噬細(xì)胞極化與糖尿病冠狀動(dòng)脈病變關(guān)系的研究[D];山東大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張譯丹;鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑調(diào)控巨噬細(xì)胞表型對(duì)實(shí)驗(yàn)性矽肺的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 盧文冉;HCV core蛋白作用的巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清對(duì)肝細(xì)胞生物學(xué)性狀的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 李文建;載脂蛋白E影響巨噬細(xì)胞因子表達(dá)及分型的機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 曹爽;高糖對(duì)巨噬細(xì)胞TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)節(jié)作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 寧程程;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在子宮內(nèi)膜癌雌激素敏感性中的作用及機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

6 高龍;PLD4在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞抑制結(jié)腸癌增殖中的作用研究[D];成都醫(yī)學(xué)院;2015年

7 丁弋娜;TLR4在肺癌相關(guān)巨噬細(xì)胞極性轉(zhuǎn)化及其調(diào)控機(jī)制的研究[D];杭州師范大學(xué);2016年

8 袁震;砷對(duì)巨噬細(xì)胞和肝細(xì)胞膽固醇流出及相關(guān)基因ABCA1和ABCG1表達(dá)的影響[D];杭州師范大學(xué);2016年

9 李曉琴;Fc99抑制單核/巨噬細(xì)胞表達(dá)Tenascin-C及緩解關(guān)節(jié)炎癥狀的研究[D];南京大學(xué);2014年

10 王凱凱;綠豆肽的結(jié)構(gòu)鑒定及對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞免疫活性物質(zhì)的影響作用研究[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2016年

，

本文編號(hào)：663902