本文關(guān)鍵詞：白念珠菌性膿毒癥中HMGB1的表達(dá)及其作用的臨床和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的:侵襲性真菌感染已成為嚴(yán)重威脅人類健康的疾病,在細(xì)菌性膿毒癥中起著重要作用的晚期炎癥介質(zhì)---高遷移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)是否也在侵襲性真菌感染中發(fā)揮著重要作用目前尚不清楚。而白念珠菌又是侵襲性真菌感染的主要病原體。本研究擬進(jìn)行白念珠菌性膿毒癥的臨床和動(dòng)物實(shí)驗(yàn),研究HMGB1的表達(dá)情況,以期探討HMGB1在侵襲性白念珠菌感染中的作用,為侵襲性白念珠菌感染的防治提供新的治療靶點(diǎn)。方法:1.臨床收集白念珠菌性膿毒癥患者的外周血,用ELISA和q RT-PCR檢測(cè)HMGB1、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)及HMGB1 m RNA的表達(dá),并與臨床指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析。2.構(gòu)建侵襲性白念珠菌感染動(dòng)物模型,實(shí)驗(yàn)分正常組、免疫抑制組、侵襲性白念珠菌感染組和侵襲性白念珠菌感染+丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate,EP)組,分別于感染后1、3、5和7d處死小鼠,取外周血檢測(cè)肝腎功和C-反應(yīng)蛋白(c-reactive protein,CRP)等指標(biāo)以明確小鼠的病情嚴(yán)重程度,取肺、肝和腎組織進(jìn)行HE染色觀察各組織損傷情況,ELISA檢測(cè)外周血HMGB1、TNF-α和IL-6的含量,q RT-PCR檢測(cè)小鼠外周血、肺、肝和腎組織中HMGB1 m RNA的表達(dá),Western blot和免疫組化檢測(cè)肺、肝和腎組織中HMGB1的表達(dá)。結(jié)果:1.白念珠菌性膿毒癥患者外周血q RT-PCR結(jié)果顯示,伴白念珠菌感染的嚴(yán)重膿毒癥患者、不伴真菌感染的嚴(yán)重膿毒癥患者和膿毒癥患者外周血HMGB1 m RNA的表達(dá)均高于正常人(P0.01),而伴白念珠菌感染和不伴真菌感染的嚴(yán)重膿毒癥患者又高于一般膿毒癥患者(P0.05或0.01);但伴白念珠菌感染的嚴(yán)重膿毒癥患者和不伴真菌感染的嚴(yán)重膿毒癥患者外周血HMGB1 m RNA的表達(dá)沒有顯著性差異。2.白念珠菌性膿毒癥患者外周血ELISA結(jié)果顯示,伴白念珠菌感染的嚴(yán)重膿毒癥患者、不伴真菌感染的嚴(yán)重膿毒癥患者和膿毒癥患者血清中HMGB1、TNF-α和IL-6的表達(dá)均高于正常人;而伴白念珠菌感染和不伴真菌感染的嚴(yán)重膿毒癥患者又高于一般膿毒癥患者;且伴白念珠菌感染的嚴(yán)重膿毒癥患者血清中HMGB1和TNF-α的表達(dá)明顯高于不伴真菌感染的嚴(yán)重膿毒癥患者,但伴白念珠菌感染的嚴(yán)重膿毒癥患者和不伴真菌感染的嚴(yán)重膿毒癥患者血清中IL-6的表達(dá)沒有顯著性差異。3.Spearman相關(guān)分析顯示:白念珠菌性膿毒癥患者外周血HMGB1與降鈣素原(procalcitonin,PCT)、CRP和1,3-β-D-葡聚糖(1,3-β-D-glucan,BDG)成正相關(guān)(r分別為0.530、0.541、0.816,P0.05或0.01),與白細(xì)胞(white blood cell,WBC)無相關(guān)(r為0.093,P0.05)。4.小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺后,血液中的白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白和血小板均明顯減少,其中以白細(xì)胞減少最為明顯,表明免疫抑制小鼠模型構(gòu)建成功。5根據(jù)不同濃度小鼠的生存曲線,本實(shí)驗(yàn)選取的侵襲性白念珠菌感染的最適濃度為2×105個(gè)/ml。6.肺、肝和腎組織培養(yǎng)及病理結(jié)果顯示:肺、肝和腎組織中均有白念珠菌生長,表明侵襲性白念珠菌感染模型構(gòu)建成功。7.與正常組相比,免疫抑制組、侵襲性白念珠菌感染組和EP組小鼠在免疫抑制后第4d開始體重明顯下降(P0.05);與免疫抑制組相比,侵襲性白念珠菌感染組和EP組小鼠在感染后第2d開始體重明顯下降(P0.05);與EP組相比,侵襲性白念珠菌感染組小鼠在感染后第3d開始體重明顯下降(P0.05)。8.侵襲性白念珠菌感染組小鼠的死亡率為33.33%,EP組小鼠的死亡率為13.33%;與侵襲性白念珠菌感染組相比,EP能顯著減少小鼠的死亡率,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。9.生化和病理結(jié)果顯示,與正常組和免疫抑制組相比,侵襲性白念珠菌感染組小鼠的肺、肝和腎組織明顯受損,CRP明顯升高;而與侵襲性白念珠菌感染組相比,EP組小鼠肺、肝和腎組織受損程度明顯減輕,CRP明顯降低。10.外周血、肺、肝和腎組織q RT-PCR結(jié)果顯示,與正常組和免疫抑制組相比,侵襲性白念珠菌感染組和EP組小鼠的外周血、肺、肝和腎組織中HMGB1 m RNA的表達(dá)均明顯增加(P0.05或0.01);而與侵襲性白念珠菌感染組相比,EP組小鼠在感染后3d開始HMGB1m RNA的表達(dá)明顯減少(P0.01)。11.肺、肝和腎組織Western blot結(jié)果顯示:白念珠菌感染后,侵襲性白念珠菌感染組和EP組小鼠肺、肝和腎組織中HMGB1的表達(dá)明顯增加;與侵襲性白念珠菌感染組相比,EP能顯著抑制HMGB1的表達(dá)。12.肺、肝和腎組織免疫組化結(jié)果顯示,白念珠菌感染后,侵襲性白念珠菌感染組小鼠肺組織HMGB1的表達(dá)明顯增加,主要集中在細(xì)胞核內(nèi);肝組織細(xì)胞核內(nèi)HMGB1的表達(dá)明顯增加,同時(shí)隨著感染天數(shù)的延長,肝細(xì)胞胞漿中HMGB1的表達(dá)也明顯增高;腎組織皮質(zhì)中胞核和胞漿中HMGB1的表達(dá)均明顯增加。而與侵襲性白念珠菌感染組相比,EP不僅能明顯抑制胞核中HMGB1的表達(dá),也能明顯抑制HMGB1從胞核釋放到胞漿中。13.外周血ELISA結(jié)果顯示,侵襲性白念珠菌感染組和EP組小鼠外周血HMGB1、TNF-α和IL-6的表達(dá)明顯增高(P0.01);與侵襲性白念珠菌感染組相比,EP組小鼠外周血HMGB1、TNF-α和IL-6的表達(dá)明顯降低(P0.05或0.01)。結(jié)論:1.白念珠菌性膿毒癥患者外周血HMGB1蛋白水平明顯高于不伴真菌感染的嚴(yán)重膿毒癥患者,但兩者外周血HMGB1 m RNA的表達(dá)沒有顯著性差異。目前HMGB1在白念珠菌性膿毒癥中的研究還未見報(bào)道,本實(shí)驗(yàn)收集到的樣本量少,HMGB1在白念珠菌性膿毒癥中的作用還需進(jìn)一步研究。2.白念珠菌性膿毒癥患者外周血HMGB1與PCT、CRP和BDG成正相關(guān)。根據(jù)其他細(xì)菌膿毒癥和本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果,我們猜測(cè)HMGB1結(jié)合臨床上不同的指標(biāo),有助于區(qū)別細(xì)菌膿毒癥和真菌膿毒癥的診斷。但本實(shí)驗(yàn)收集到的樣本量少,這一猜想還有待進(jìn)一步證明。3.本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建侵襲性白念珠菌感染動(dòng)物模型選取的最適感染濃度為2×105個(gè)/ml,組織培養(yǎng)和組織病理學(xué)方法均證實(shí)侵襲性白念珠菌感染動(dòng)物模型構(gòu)建成功。4.侵襲性白念珠菌感染組小鼠外周血、肺、肝和腎組織中HMGB1m RNA和蛋白表達(dá)明顯增高,而與侵襲性白念珠菌感染組相比,EP能明顯抑制HMGB1的表達(dá)和釋放,減輕肺、肝和腎組織的損傷程度,減少小鼠死亡率,表明HMGB1抑制劑可能為侵襲性白念珠菌感染的治療提供新的靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：高遷移率族蛋白B1 丙酮酸乙酯 白念珠菌 膿毒癥
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R519.3;R459.7
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照4-6
• 中文摘要6-11
• 英文摘要11-18
• 前言18-20
• 第一部分 HMGB1在白念珠菌性膿毒癥患者外周血中的表達(dá)20-39
• 1 材料20-22
• 2 方法22-26
• 3 結(jié)果26-36
• 4 討論36-39
• 第二部分 HMGB1在侵襲性白念珠菌感染動(dòng)物模型中的表達(dá)39-73
• 1 材料39-41
• 2 方法41-48
• 3 結(jié)果48-70
• 4 討論70-73
• 參考文獻(xiàn)73-79
• 全文總結(jié)79-80
• 文獻(xiàn)綜述80-90
• 參考文獻(xiàn)87-90
• 致謝90-91
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文91

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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本文編號(hào)：662098